Preparation of human immunoglobulin against hemorrhagic fever virus with renal syndrome

Cover Page


Cite item

Abstract

Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) is a viral zoonotic natural focal infectious disease of humans and is particularly widespread in the forest areas of the Urals and Middle Volga region. In recent years, methods have been developed and put into practice for indication of infection in rodent hosts of HFRS virus and for serodiagnosis of human HFRS.

Full Text

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) является вирусным зоонозным природно-очаговым инфекционным заболеванием человека и особенно широко распространена в лесных зонах Приуралья и Среднего Поволжья. В последние годы разработаны и применены на практике методы индикации инфекции у грызунов — хозяев вируса ГЛПС и серодиагностики ГЛПС у человека [2, 3].

Непрямой метод флюоресцирующих антител (МФА) оказался наиболее удобным для определения антител к вирусу ГЛПС в крови больных. С помощью этого метода антитела выявляли начиная со второго дня болезни и до 20 лет после перенесенной инфекции (срок наблюдения). Эти данные послужили предпосылкой для разработки методов получения препаратов иммуноглобулина против ГЛПС из сывороток крови реконвалесцентов. Поиски эффективных препаратов иммуноглобулина весьма актуальны, так как до настоящего времени нет методов специфической профилактики и лечения ГЛПС. Специфический иммуноглобулин может быть использован для профилактики лабораторных случаев заболевания и групповых вспышек, а также как лечебное средство при ГЛПС в первые дни (1—5) от начала клинических проявлений болезни.

Целью данной работы являлось получение препарата человеческого иммуноглобулина против ГЛПС, изучение его некоторых физико-химических свойств и специфической активности.

В работе использовали вирус ГЛПС, штамм «Кровь Б» в титре 107,0 ИД50/мл. В качестве антигенов вируса ГЛПС применяли инфицированные клетки Vero Е-6, фиксированные ацетоном на предметных стеклах. Препараты антигенов были приготовлены из нескольких штаммов вируса ГЛПС: штамм «Кровь Б», выделенный из крови больного, 1113 С. g., 1115 С. g. и 1122 С. g., от рыжих полевок Clethrionornys glareolus в Удмуртской АССР, Hantaan 76-118 (HNT) от Apodemus agrarius в Южной Корее, Tchoupitoulas (ТСН) от Rattus norvegicus в США и Prospect Hill (PHV) от Microtus pennsylvanicus в США. Сыворотки реконвалесцентов ГЛПС из европейских очагов СССР (Удмуртия, Татария) и очагов на Дальнем Востоке были использованы в качестве референс- положительных сывороток и как сырье для получения иммуноглобулина. Протективные свойства препарата изучали на лабораторной линии рыжих полевок [1].

Антитела в крови выявляли с помощью непрямого МФА [5], для индикации антигена вируса ГЛПС применяли прямой иммуноферментный метод [6]. Реакцию нейтрализации вируса ГЛПС in vivo проводили по обычной методике [41 путем внутримышечного введения пяти рыжим полевкам 0,3 мл смеси вируса с иммунной сывороткой или иммуноглобулином. На 20-е сутки полевок умерщвляли и исследовали кровь, легкие и селезенку на наличие антигена, а сыворотки крови — на наличие антител. Инфицированными считали тех животных, у которых были обнаружены антиген и/или антитела к вирусу ГЛПС. Для определения протективных свойств препарат иммуноглобулина ГЛПС в разведениях 1 : 10 и 1 : 100 вводили по 0,3 мл внутримышечно восьмидесяти рыжим полевкам спустя 1 ч, 24 ч и 7 сут после инфицирования животных 10, 100, 1000 и 10 000 ИДзо/мл вирусом ГЛПС, штаммом «Кровь Б».

Препараты человеческого иммуноглобулина против ГЛПС были изготовлены на предприятии Казанского НИИЭМ. Сырьем для получения иммуноглобулина служили сыворотки переболевших ГЛПС, проживающих на эндемичной территории Татарской АССР. Для получения двух серий препарата были собраны сыворотки от 146 доноров (138 мужчин и 8 женщин), перенесших ГЛПС, через 1 год (18,4%), 2 (45,2%), 3 (13,0%), 4 (12,3%), 5 лет (8,9%) и более этого срока от начала заболевания (2%). 18 человек были в возрасте 20—24 лет, 25 — 20—29, 53 — 30—40, 37 — 40—50, 13 — 50 лет и старше. Антитела к вирусу ГЛ ПС были выявлены в 100% случаев с диапазоном титров от 1 : 40 до 1 : 2560, среднегеометрический титр log2 составлял 7,44=0,3.

Иммуноглобулин был очищен и сконцентрирован методом фракционирования этиловым спиртом при низких температурах на основе метода Кона (7 этапов). Титр антител в плазме до фракционирования был равен 1 : 80—1 : 320. На всех этапах фракционирования иммуноглобулина определяли специфическую активность.

Концентрация белка в растворе препарата составляла 10,5±1,0%, содержание иммуноглобулиновой фракции — не менее 97% от общего белка. Титр антител к вирусу ГЛПС в готовых препаратах иммуноглобулина варьировал от 1 : 640 до 1 : 10240. Иммуноглобулин против вируса ГЛПС может быть использован для индикации антигенов вирусов, циркулирующих как в европейских очагах ГЛПС («Кровь Б», 1122 С. g.), так и в других регионах мира (PHV, HNT, ТСН). Специфическая активность иммуноглобулина сохраняется в течение 24 мес (срок наблюдения).

Изучение вируснейтрализующей активности иммуноглобулина показало, что он способен нейтрализовать вирус, циркулирующий в европейских очагах ГЛПС (ИН 2,1).

Титр вируснейтрализующих антител в иммуноглобулине ГЛПС был равен 1:417 (8,7±0,3 log2), титры сыворотки реконвалесцента из очага ГЛПС на Дальнем Востоке — 1:52 (5,7±0,5 log2, Р<0,005). Титр иммуноглобулина в реакции нейтрализации с гомологичным вирусом однозначен с титром в МФА (Р>0,5).

Изучение протективного действия иммуноглобулина против вируса ГЛПС показало, что введение его через час после заражения 40 рыжим полевкам защитило 100% животных, через сутки — 50%.

Таким образом, человеческий иммуноглобулин против вируса ГЛПС производства КНИИЭМ способен нейтрализовать более 1000 ИД50/мл вируса ГЛПС циркулирующего в европейских очагах инфекции, оказывать протективное действие и может быть использован в пределах европейского региона для профилактических и лечебных целей.

×

About the authors

I. N. Gavrilovskaya

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

S. B. Bogdanova

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

E. A. Gorbachkova

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

M. P. Chumakov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

N. S. Apekina

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

M. B. Linev

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

Yu. A. Myasnikov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

I. Z. Mukhutdinov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

V. S. Potapov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

V. A. Boyko

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

R. G. Mukhutdinova

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

L. V. Yagnova

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

F. Z. Kamalov

Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Health, RSFSR; Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan; Moscow

References


© 1988 Eco-Vector





This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies