К вопросу о химизме реакции д-ра Манойлова

Аннотация

Как известно, вопрос о химизме реакции д-ра Манойлова (РМ) или, вернее, вопрос о зависимости ее от различных компонентов крови является еще не решенным. По этому вопросу существует несколько весьма противоречивых взглядов.

Полный текст

Как известно, вопрос о химизме реакции д-ра Манойлова (РМ) или, вернее, вопрос о зависимости ее от различных компонентов крови является еще не решенным. По этому вопросу существует несколько весьма противоречивых взглядов. Так, напр., одни—Га л вял о, Владимирова, Виноградов, Оппель-младший¹), Шмидт, Первозовская₂) Schratz³), Alsterberg-Hakansson⁴)идp. считают ее почти всецело зависящей от разницы в количестве белков мужской и женской крови. Другие (Соловцова ⁵) и др.) полагают, что она зависит, главным образом, от полового гормона, а также и ряда других факторов (ионы К и Са⁵'⁶), pH крови⁷) и др.). Третьи (Canutos⁸), Margerеth ⁹), Maccagi¹⁰) и др.) ставят ее, более или менее, в зависимость от количества гемоглобина в крови мужчин и женщин. И, наконец, четвертые (Гусев ¹¹) предполагают, что РМ зависит также и от состояния атомов железа в крови (закисная или окисная форма) и его количества.
Из вышесказанного совершенно очевидно, что единого взгляда на сущность РМ еще нет и это тем более, что экспериментальных работ, посвященных этому вопросу, очень мало. Таким образом, являлась весьма желательной экспериментальная разработка этого вопроса, что и побудило меня поставить несколько серий опытов с РМ, посвященных выяснению вопроса о влиянии различных компонентов крови на эту реакцию.
Первоначально, конечно, требовалась проверка вышеперечисленных взглядов, поэтому свою работу я и начал именно с этого. Но, к сожалению, по независящим обстоятельствам, пришлось начать проверку с наименее распространенных вглядов ваРМ, как на реакцию, зависящую от гемоглобина и железа крови.
II.
Предположение о том, что гемоглобин имеет близкое отношение к РМ и ее исходу, было высказано многими авторами. Ещё в одной из своих первых работ д-р Манойлов ¹²), останавливаясь на трех возможных факторах, от которых, может быть, зависит исход его реакции, между прочим, указывал и на то, что реакция зависит возможно, от гемоглобина крови мужчин и женщин. Но в своей немецкой статье¹³) (а также и других¹⁴ определенно заявляет, на основании своих опытов, что как количество эритроцитов, так и %-ное содержание гемогло
бина в крови не играют особой роли в его реакции ), что поддерживают и др. авторы (Щеглова ¹⁵).
Но некоторые авторы (главным образом иностранные ^8,9,10) настаивают на том, что содержание гемоглобина в крови имеет большое значение. Ряд авторов изучали зависимость РМ от гемоглобина не с кровью, а с разведениями чистого гемоглобина. Так, напр., Галвяло и др.¹ заявляют, что гемоглобин уже в концентрации 0,11—0,22—0,45% дает сильную задержку в обесцвечивании раствора (что близко к „женской реакции Манойлова“—ЖРМ). Опыты же Попова ¹⁶) с гемоглобином показали, что задержка в обесцвечивании наступает в концентрации гемоглобина равной 20% (ЖРМ), а с 10%-ным разведением получается полное обесцвечивание (т. е. „мужская реакция Манойлова"—МРМ).
О влиянии гемоглобина на РМ говорят также Чигарин¹⁷) и Гусев ¹⁸), причем у последнего ЖРМ получалась с насыщенным (!) раствором гемоглобина, а МРМ с тем же раствором, разведенным в 6 раз. У других же авторов (0. Маной лова ¹⁹) результаты опытов с гемоглобином получились недостаточно ясные (хотя те же авторы отрицают влияние количества эритроцитов на исход РМ).
Так как почти все перечисленные опыты носили случайный, а не систематический характер, то строить на них какие-либо выводы не представляется возможным, и это тем более, что результаты этих опытов не вполне совпадают. Таким образом, вопрос о значении гемоглобина в РМ оставался невыясненным. С целью выяснения этого вопроса мною и была поставлена первая серия опытов с РМ.
Как известно, количество гемоглобина в крови колеблется около цифр: 13 — 15% у мужчин и 12,5—13% у женщин²⁰), и т. к. большинство авторов работало с 3%-ной эмульсией эритроцитов (или с таким же раствором крови), т. е. с таким разведением крови, в котором фактически находилось приблизительно около 0,5% гемоглобина, то для наших целей достаточно было взять разведения гемоглобина большие и меньшие 0,5%. Я пользовался разведениями от 0% до 4% гемоглобина. Для этого брался покупной аморфный гемоглобин и из него приготовлялся основной 4%-ный раствор (всегда ex tempore), из которого путем разбавления де- стилированной водой^**) (по формуле W. Roloffа ²¹) приготовлялись различные разведения гемоглобина, так что получалась шкала разведений гемоглобина от 0% до 4%. С этими разведениями (взятыми в количестве 3 куб. см.) и проделывалась РМ (методика строго по третьей модификации РМ). Серия опытов с гемоглобином состояла из 10 опытов. Результаты приведены в таблице № 1.
Как видно из этой таблицы изменения в окраске с.№ 1 по № 24 весьма ничтожны, и лишь в концентрациях больших, чем 1% гемоглобин оказывает некоторое влияние, т. к. окраска становится близкой к ЖРМ. Из этого можно сделать такие выводы:
Во 1-ых, в тех концентрациях (меньших, чем 1%), которые обычно имеют место в тех разведениях крови, которые берутся для РМ (как сказано выше эти разведения бывают по большей части 3% и содержат лишь около 0,5% гемоглобине0, гемогтобин не оказывает заметного влияния на исход РМ, т. е. тем самым отрицается его значение как специфического белка для РМ;

во 2-ых, если концентрация гемоглобина становится большей, чем 1%, то получается как бы ЖРМ, т. е. даже и в больших концентрациях гемоглобин влияет не как специфический белок (тогда с увеличением концентрации гемоглобина должна была бы получаться МРМ, так как у мужчин гемоглобина больше, чем у женщин), а просто, возможно, как неспецифический белок вообще ^*).
Что количество гемоглобина не играет роли по РМ видно также из того, что можно делать РМ с такими разведениями крови, что все они будут содержать одинаковое количество гемоглобина (напр. 2—3% по Sahl i), как это и делается некоторыми (Манойлов, Вагнер ²²), Рейнус и Чалисова ²³), т. е. при этом уравнивается разница в количестве гемоглобина у различных людей вообще и у разных полов в частности, и тем не менее РМ дает правильные результаты. Кроме того РМ можно делать и с сывороткой (а также с асцитической жидкостью, спинно-мозговой жидкостью и мочей), где, как известно, гемоглобина нет.
Таким образом, становится ясным, что гемоглобин не только не обуславливает собою РМ, но что он не оказывает даже влияния на исход РМ (имея в виду вышеуказанные концентрации гемоглобина и физиологические колебания в содержании его у разных людей), и только лишь в тех концентрациях, которые обычно не имеют места в условиях РМ, гемоглобин начинает оказывать влияние на ее исход.
III.
Переходя теперь к вопросу о зависимости РМ от количества и качества атомов железа в крови мужчин и женщин, надо отметить, что автор этого взгляда пр.-доц. Гусев¹¹ проделывая свои опыты^*) с закисной (соль Мора) и окисной (железно-аммиачные квасцы) солями железа, получил в результате зависимость РМ от окисной формы железа, причем с увеличением (0,046—0,5%) количества окисной соли железа получается как бы МРМ, что соответствует большему содержанию железа в крови мужчин, а с уменьшением (0,034—0,03 8%) количества железа получается как бы ЖРМ, приходит к выводу, что ' „РМ находится в зависимости... и от железа крови, но как будто бы не от количества его, а от состояния “.
В целях выяснения этого вопроса мною и была поставлена вторая серия опытов с РМ. В качестве закисных солей брались: соль Мора ) (FeS0₄. (NHJ₂ SO₄. 6Н₂О) и сернокислое железо (FeS04. 7Н2О) ) а в качестве окисных солей: железно-аммиачные квасцы (NH₄. Fe(S0₄)₂ ^**). 12Н₂О) ^**) и хлорное железо (FeCl₃. 6Н₂О) ^***). Ex tempore приготовлялся основной раствор, содержащий 0,558% железа, и из него делались разведения (от 0% до 0,558%). Бралось 3 кб. см. каждого разведения и делалась РМ. Результаты приведены в таблице № 2. Надо еще отметить, что в своих опытах с гемоглобином и железом я получал одинаковые результаты, работая с папайотином и без него, что как будто бы согласуется с указаниями некоторых авторов, отрицающих значение этого фермента для РМ^{1, 18, 24, 25, 26}.
Прежде чем рассматривать результаты опытов с железом, надо отметить следующее. Так как в крови человека находится около 50 млгр. % железа, то в 3-хпроцентном разведении крови (с которым обычно и работает большинство авторов) железо находится лишь около 1,5 млгр. % (0,0015%) и следовательно для нас важны будут результаты РМ с теми разведениями указанных солей, которые содержат приблизительно это количество железа.
Таблица № 2 показывает, что железо в концентрации до 0,15% не оказывает почти никакого влияния на исход РМ (изменение окраски, в сторону большей интенсивности при увеличении концентрации, надо отнести за счет окраски самих разведений до РМ) и лишь в концентрациях больших, чем 0,2% сказывается влияние закисного железа на РМ в виде изменения окраски в зеленый или синий цвет (эти колебания зависят от соляной кислоты).
Таким образом, становится очевидным, что никакой зависимости между РМ и количеством железа нет, так как с увеличением концентрации железа должна была бы получиться МРМ, а на самом деле даже концентрация в 0,15% не сказывается на исходе РМ, а обычно имеют дело с концентрацией железа значительно меньшей, чем эта (около 0,0015%)- Одинаковые же результаты, полученные как с закисными (до 0,2%), так и с окисными солями железа, говорят о том, что состояние атома железа не имеет значения для РМ.

IV.
Следовательно наши опыты с гемоглобином и железом позволяют сделать два вывода:
1) РМ не зависит от количества гемоглобина крови, как специфического белка;
2) РМ не зависит от количества и качества атомов железа в крови. Подчеркиваю, что речь идет лишь о тех концентрациях, с которыми обычно работают, принимая во внимание амплитуду колебаний содержания гемоглобина или железа в крови.
В заключение считаю долгом выразить глубокую благодарность д-ру Е. 0. Манойлову за любезное разрешение работать в заведываемой им лаборатории, а также благодарю д-ра А. А. Соловцову и д-ра 0. М. Шамарину за ряд ценных указаний.
Уже по окончании работы я ознакомился со статьей Игнатово й- Крапнской ²⁸). Опыты ее состоят в следующем: взяв по одному куб. см. физиологического раствора и добавляя к ним различные количества (от 0,4 куб. см. и меньше) мужской или женской крови, она получала в результате все оттенки РМ от типичной ЖРМ до типичной МРМ независимо от пола того человека, у которого была взята кровь. Не вдаваясь в критику как опытов, так и выводов автора, я хочу лишь отметить, что и в ее опытах заметное изменение окраски начиналось в тех растворах, которые содержали больше, чем 1% гемоглобина, так что в этом отношении разультаты опытов сходны с нашими, т. е., что гемоглобин начинает влиять на исход РМ лишь в тех концентрациях, которые обычно не имеют места в условиях РМ. Да и сам автор указанных опытов в другой своей работе²⁹) также завляет, что ,,процентное содержание гемоглобина в крови по нашим данным на исход реакции не влияет".
Что небольшие (т е. в том числе и физиологические) колебания в концентрации раствора крови (гемоглобина) не имеют значения для РМ подтверждают и др. (Малыкин ³⁰).

* Т. к. несмотря на то, что в исследуемых пробах крови °/0 гемоглобина колебался от 55% до 92%—ответы получились правильные.
* Иногда основной раствор и разведения приготовлялись на физиологическом растворе.
* Влияние неспецифических белков на РМ составит предмет следующей серии наших опытов.
* К сожалению не указано число опытов.
** 7 опытов.
*** 3 опыта.