On the chemistry of the reaction of Dr. Manoilov

Abstract

As you know, the question of the chemistry of the reaction of Dr. Manoilov (RM), or, rather, the question of its dependence on various components of the blood is not yet resolved. There are several very conflicting views on this issue.

Full Text

Как известно, вопрос о химизме реакции д-ра Манойлова (РМ) или, вернее, вопрос о зависимости ее от различных компонентов крови является еще не решенным. По этому вопросу существует несколько весьма противоречивых взглядов. Так, напр., одни—Га л вял о, Владимирова, Виноградов, Оппель-младший¹), Шмидт, Первозовская₂) Schratz³), Alsterberg-Hakansson⁴)идp. считают ее почти всецело зависящей от разницы в количестве белков мужской и женской крови. Другие (Соловцова ⁵) и др.) полагают, что она зависит, главным образом, от полового гормона, а также и ряда других факторов (ионы К и Са⁵'⁶), pH крови⁷) и др.). Третьи (Canutos⁸), Margerеth ⁹), Maccagi¹⁰) и др.) ставят ее, более или менее, в зависимость от количества гемоглобина в крови мужчин и женщин. И, наконец, четвертые (Гусев ¹¹) предполагают, что РМ зависит также и от состояния атомов железа в крови (закисная или окисная форма) и его количества.
Из вышесказанного совершенно очевидно, что единого взгляда на сущность РМ еще нет и это тем более, что экспериментальных работ, посвященных этому вопросу, очень мало. Таким образом, являлась весьма желательной экспериментальная разработка этого вопроса, что и побудило меня поставить несколько серий опытов с РМ, посвященных выяснению вопроса о влиянии различных компонентов крови на эту реакцию.
Первоначально, конечно, требовалась проверка вышеперечисленных взглядов, поэтому свою работу я и начал именно с этого. Но, к сожалению, по независящим обстоятельствам, пришлось начать проверку с наименее распространенных вглядов ваРМ, как на реакцию, зависящую от гемоглобина и железа крови.
II.
Предположение о том, что гемоглобин имеет близкое отношение к РМ и ее исходу, было высказано многими авторами. Ещё в одной из своих первых работ д-р Манойлов ¹²), останавливаясь на трех возможных факторах, от которых, может быть, зависит исход его реакции, между прочим, указывал и на то, что реакция зависит возможно, от гемоглобина крови мужчин и женщин. Но в своей немецкой статье¹³) (а также и других¹⁴ определенно заявляет, на основании своих опытов, что как количество эритроцитов, так и %-ное содержание гемогло
бина в крови не играют особой роли в его реакции ), что поддерживают и др. авторы (Щеглова ¹⁵).
Но некоторые авторы (главным образом иностранные ^8,9,10) настаивают на том, что содержание гемоглобина в крови имеет большое значение. Ряд авторов изучали зависимость РМ от гемоглобина не с кровью, а с разведениями чистого гемоглобина. Так, напр., Галвяло и др.¹ заявляют, что гемоглобин уже в концентрации 0,11—0,22—0,45% дает сильную задержку в обесцвечивании раствора (что близко к „женской реакции Манойлова“—ЖРМ). Опыты же Попова ¹⁶) с гемоглобином показали, что задержка в обесцвечивании наступает в концентрации гемоглобина равной 20% (ЖРМ), а с 10%-ным разведением получается полное обесцвечивание (т. е. „мужская реакция Манойлова"—МРМ).
О влиянии гемоглобина на РМ говорят также Чигарин¹⁷) и Гусев ¹⁸), причем у последнего ЖРМ получалась с насыщенным (!) раствором гемоглобина, а МРМ с тем же раствором, разведенным в 6 раз. У других же авторов (0. Маной лова ¹⁹) результаты опытов с гемоглобином получились недостаточно ясные (хотя те же авторы отрицают влияние количества эритроцитов на исход РМ).
Так как почти все перечисленные опыты носили случайный, а не систематический характер, то строить на них какие-либо выводы не представляется возможным, и это тем более, что результаты этих опытов не вполне совпадают. Таким образом, вопрос о значении гемоглобина в РМ оставался невыясненным. С целью выяснения этого вопроса мною и была поставлена первая серия опытов с РМ.
Как известно, количество гемоглобина в крови колеблется около цифр: 13 — 15% у мужчин и 12,5—13% у женщин²⁰), и т. к. большинство авторов работало с 3%-ной эмульсией эритроцитов (или с таким же раствором крови), т. е. с таким разведением крови, в котором фактически находилось приблизительно около 0,5% гемоглобина, то для наших целей достаточно было взять разведения гемоглобина большие и меньшие 0,5%. Я пользовался разведениями от 0% до 4% гемоглобина. Для этого брался покупной аморфный гемоглобин и из него приготовлялся основной 4%-ный раствор (всегда ex tempore), из которого путем разбавления де- стилированной водой^**) (по формуле W. Roloffа ²¹) приготовлялись различные разведения гемоглобина, так что получалась шкала разведений гемоглобина от 0% до 4%. С этими разведениями (взятыми в количестве 3 куб. см.) и проделывалась РМ (методика строго по третьей модификации РМ). Серия опытов с гемоглобином состояла из 10 опытов. Результаты приведены в таблице № 1.
Как видно из этой таблицы изменения в окраске с.№ 1 по № 24 весьма ничтожны, и лишь в концентрациях больших, чем 1% гемоглобин оказывает некоторое влияние, т. к. окраска становится близкой к ЖРМ. Из этого можно сделать такие выводы:
Во 1-ых, в тех концентрациях (меньших, чем 1%), которые обычно имеют место в тех разведениях крови, которые берутся для РМ (как сказано выше эти разведения бывают по большей части 3% и содержат лишь около 0,5% гемоглобине0, гемогтобин не оказывает заметного влияния на исход РМ, т. е. тем самым отрицается его значение как специфического белка для РМ;

во 2-ых, если концентрация гемоглобина становится большей, чем 1%, то получается как бы ЖРМ, т. е. даже и в больших концентрациях гемоглобин влияет не как специфический белок (тогда с увеличением концентрации гемоглобина должна была бы получаться МРМ, так как у мужчин гемоглобина больше, чем у женщин), а просто, возможно, как неспецифический белок вообще ^*).
Что количество гемоглобина не играет роли по РМ видно также из того, что можно делать РМ с такими разведениями крови, что все они будут содержать одинаковое количество гемоглобина (напр. 2—3% по Sahl i), как это и делается некоторыми (Манойлов, Вагнер ²²), Рейнус и Чалисова ²³), т. е. при этом уравнивается разница в количестве гемоглобина у различных людей вообще и у разных полов в частности, и тем не менее РМ дает правильные результаты. Кроме того РМ можно делать и с сывороткой (а также с асцитической жидкостью, спинно-мозговой жидкостью и мочей), где, как известно, гемоглобина нет.
Таким образом, становится ясным, что гемоглобин не только не обуславливает собою РМ, но что он не оказывает даже влияния на исход РМ (имея в виду вышеуказанные концентрации гемоглобина и физиологические колебания в содержании его у разных людей), и только лишь в тех концентрациях, которые обычно не имеют места в условиях РМ, гемоглобин начинает оказывать влияние на ее исход.
III.
Переходя теперь к вопросу о зависимости РМ от количества и качества атомов железа в крови мужчин и женщин, надо отметить, что автор этого взгляда пр.-доц. Гусев¹¹ проделывая свои опыты^*) с закисной (соль Мора) и окисной (железно-аммиачные квасцы) солями железа, получил в результате зависимость РМ от окисной формы железа, причем с увеличением (0,046—0,5%) количества окисной соли железа получается как бы МРМ, что соответствует большему содержанию железа в крови мужчин, а с уменьшением (0,034—0,03 8%) количества железа получается как бы ЖРМ, приходит к выводу, что ' „РМ находится в зависимости... и от железа крови, но как будто бы не от количества его, а от состояния “.
В целях выяснения этого вопроса мною и была поставлена вторая серия опытов с РМ. В качестве закисных солей брались: соль Мора ) (FeS0₄. (NHJ₂ SO₄. 6Н₂О) и сернокислое железо (FeS04. 7Н2О) ) а в качестве окисных солей: железно-аммиачные квасцы (NH₄. Fe(S0₄)₂ ^**). 12Н₂О) ^**) и хлорное железо (FeCl₃. 6Н₂О) ^***). Ex tempore приготовлялся основной раствор, содержащий 0,558% железа, и из него делались разведения (от 0% до 0,558%). Бралось 3 кб. см. каждого разведения и делалась РМ. Результаты приведены в таблице № 2. Надо еще отметить, что в своих опытах с гемоглобином и железом я получал одинаковые результаты, работая с папайотином и без него, что как будто бы согласуется с указаниями некоторых авторов, отрицающих значение этого фермента для РМ^{1, 18, 24, 25, 26}.
Прежде чем рассматривать результаты опытов с железом, надо отметить следующее. Так как в крови человека находится около 50 млгр. % железа, то в 3-хпроцентном разведении крови (с которым обычно и работает большинство авторов) железо находится лишь около 1,5 млгр. % (0,0015%) и следовательно для нас важны будут результаты РМ с теми разведениями указанных солей, которые содержат приблизительно это количество железа.
Таблица № 2 показывает, что железо в концентрации до 0,15% не оказывает почти никакого влияния на исход РМ (изменение окраски, в сторону большей интенсивности при увеличении концентрации, надо отнести за счет окраски самих разведений до РМ) и лишь в концентрациях больших, чем 0,2% сказывается влияние закисного железа на РМ в виде изменения окраски в зеленый или синий цвет (эти колебания зависят от соляной кислоты).
Таким образом, становится очевидным, что никакой зависимости между РМ и количеством железа нет, так как с увеличением концентрации железа должна была бы получиться МРМ, а на самом деле даже концентрация в 0,15% не сказывается на исходе РМ, а обычно имеют дело с концентрацией железа значительно меньшей, чем эта (около 0,0015%)- Одинаковые же результаты, полученные как с закисными (до 0,2%), так и с окисными солями железа, говорят о том, что состояние атома железа не имеет значения для РМ.

IV.
Следовательно наши опыты с гемоглобином и железом позволяют сделать два вывода:
1) РМ не зависит от количества гемоглобина крови, как специфического белка;
2) РМ не зависит от количества и качества атомов железа в крови. Подчеркиваю, что речь идет лишь о тех концентрациях, с которыми обычно работают, принимая во внимание амплитуду колебаний содержания гемоглобина или железа в крови.
В заключение считаю долгом выразить глубокую благодарность д-ру Е. 0. Манойлову за любезное разрешение работать в заведываемой им лаборатории, а также благодарю д-ра А. А. Соловцову и д-ра 0. М. Шамарину за ряд ценных указаний.
Уже по окончании работы я ознакомился со статьей Игнатово й- Крапнской ²⁸). Опыты ее состоят в следующем: взяв по одному куб. см. физиологического раствора и добавляя к ним различные количества (от 0,4 куб. см. и меньше) мужской или женской крови, она получала в результате все оттенки РМ от типичной ЖРМ до типичной МРМ независимо от пола того человека, у которого была взята кровь. Не вдаваясь в критику как опытов, так и выводов автора, я хочу лишь отметить, что и в ее опытах заметное изменение окраски начиналось в тех растворах, которые содержали больше, чем 1% гемоглобина, так что в этом отношении разультаты опытов сходны с нашими, т. е., что гемоглобин начинает влиять на исход РМ лишь в тех концентрациях, которые обычно не имеют места в условиях РМ. Да и сам автор указанных опытов в другой своей работе²⁹) также завляет, что ,,процентное содержание гемоглобина в крови по нашим данным на исход реакции не влияет".
Что небольшие (т е. в том числе и физиологические) колебания в концентрации раствора крови (гемоглобина) не имеют значения для РМ подтверждают и др. (Малыкин ³⁰).

* Т. к. несмотря на то, что в исследуемых пробах крови °/0 гемоглобина колебался от 55% до 92%—ответы получились правильные.
* Иногда основной раствор и разведения приготовлялись на физиологическом растворе.
* Влияние неспецифических белков на РМ составит предмет следующей серии наших опытов.
* К сожалению не указано число опытов.
** 7 опытов.
*** 3 опыта.