Disaggregation effect of the thrombolytic drug Terrilytin

Full Text

Тромболитические свойства террилитина, полученного из гриба Aspergillus terricola [7], при его внутривенном применении у животных с экспериментальными тромбами были показаны в работах С. В. Андреева и сотрудников [4], Я. Д. Мамедова и сотрудников [9, 10]. Имеются сообщения о возможности получения тромболитического эффекта при пероральном применении террилитина [5, 6].

Исследованиями ряда авторов [8, 11] установлено изменение поверхности и формы эритроцитов периферической крови при различных воздействиях на организм. В настоящей работе представлены результаты экспериментального обоснования применения препарата террилитина с помощью электронно-микроскопических исследований поверхности эритроцитов.

Для решения поставленной задачи использовали цитратную кровь кроликов, которую фиксировали 1,25—2,5% глютаральдегидом на фосфатном буфере pH 7,4, обезвоживали по стандартной методике до 70% спирта, лиофилизировали, напыляли углем и золотом и изучали в сканирующем электронном микроскопе.

Поверхность и форму эритроцитов исследовали через 24 ч после экспериментального тромбоза, до и после перорального введения террилитина в дозе 3000—6000 ПЕ/кг живого веса, а также in vitro после 20-минутной — трехчасовой экспозиции с препаратом при комнатной температуре в дозе 60 ПЕ/мл.

Экспериментальный тромбоз воспроизводили в изолированном участке бедренной вены кролика путем механической травмы и с помощью введения 10 ед. тромбина, содержащихся в 0,2 мл физиологического раствора [1]. Введение в желудок террилитина в объеме 5 мл водно-масляной эмульсии препарата осуществляли через зонд. Через 2—3 ч отмечали снижение свертывающего потенциала крови по данным тромбоэластографии (удлинение показателей R на 40%, К на 44%, суммы R и К на 42%; Р<0,05), повышение концентрации ПДФ в 4 раза, снижение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов на 56%.

Электронно-микроскопическое исследование показало, что через 24 ч после моделирования тромба в бедренной вене количество эхиноцитов в периферической крови возрастает до 20% (против 1% в норме), 330 число деформированных эритроцитов увеличивается на 40% (рис. 1 б). После 20-минутной экспозиции in vitro цитратной крови кроликов с суточными тромбами с физиологическим раствором общее количество измененных эритроцитов достигает 80%, из них 50% составляют эхиноциты. Наблюдаются процесс слипания клеток и увеличение адгезивности эритроцитов (рис. 1 в). Добавление к этой крови in vitro 60 ПЕ/мл террилитина вызывает значительное снижение адгезивности эритроцитов (рис. 1г), уменьшение общего числа измененных эритроцитов и эхиноцитов. В результате введения 3000—6000 ПЕ/кг террилитина в желудок кроликам с суточными и двухсуточными тромбами число эхиноцитов снижается до 60%, деформированных эритроцитов — до 15% (рис. 1 д). Двух- или трехразовое введение террилитина тем же способом приводит к дальнейшей стабилизации поверхности и формы эритроцитов (рис. 1 е).

 

 

Рис. 1. Изменение поверхности и формы эритроцитов кролика при экспериментальном тромбозе и под действием террилитина. Сканирующий микроскоп. а, в, г, д, е— X 4000; б— X 3000.

Обозначения: цитратная кровь: а) контрольных кроликов; б) через 24 часа после экспериментального тромбоза; в) с суточными тромбами после 20-минутной инкубации in vitro с физиологическим раствором; г) с препаратом террилитина в дозе 3 мг в 1 мл; д) с 2-суточными тромбами после однократного введения террилитина в дозе 3000 ПЕ/кг в желудок; е) после двукратного его введения в дозе 6000 ПЕ/кг.

 

Анализ результатов влияния террилитина на изменения поверхности и формы эритроцитов периферической крови показал, что наибольшие изменения возникают при 20— 30-минутной экспозиции цитратной крови с физиологическим раствором in vitro. Добавление террилитина в кровь уменьшает адсорбционную способность оболочек эритроцитов, связанную, как правило, с уровнем ее заряда. Еще более эффективно пероральное введение препарата, так как оно способствует большей стабилизации поверхности и формы эритроцитов, однако действие террилитина проявляется при таком способе применения позднее, поскольку в кровь он попадает не сразу, а через стенку желудка.

Таким образом, исследование показало, что террилитин как in vivo, так и in vilro вызывает стабилизацию поверхности эритроцитов и восстановление их формы. Наряду с тромболитическими свойствами террилитин обладает дезагрегационным действием и препятствует оседанию кровяных элементов на стенки сосуда и на уже образовавшийся тромб.

About the authors

T. N. Kovaleva

Institute of Human Morphology, USSR Academy of Medical Sciences

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow

S. V. Andreev

Institute of Human Morphology, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow

Yu. A. Korobko

Institute of Human Morphology, USSR Academy of Medical Sciences

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow

References

Supplementary files