On the influence of the decay products of tumor tissue on the development and growth of transplanted tumors

Full Text

Занимаясь вопросом экспериментальной терапии опухолей, мы заинтересовались рядом работ Тушнова, Миагава, Беленовского и др., с успехом разрабатывающих в настоящее время интересную проблему специфического воздействия на клетки органов и тканей. Mijagawa выдвинул положение, что продукты распада тканей, выработавшиеся в результате их жизнедеятельности, являются специфическими возбудителями гомологичных тканей. Эти продукты, существуя все время жизни организма, являются, наряду с нервной и гормональной регуляциями, необходимыми для правильного функционирования органов и тканей.

В зависимости от количества этих продуктов получается или повышение жизнедеятельности клеток или же, наоборот, некротические, дегенеративные явления в них. Большим количеством экспериментов с эмульсиями и автолизатами органов Миагава с сотрудниками (Кіmurа, Wadа, Murai, Теradа и др.) подтвердил все вышесказанное [1].

Миагава и Вада, говоря о специфичности воздействия продуктов распада, указывают, что нельзя, конечно, говорить об абсолютно!специфичности в действии на какойлибо орган или ткань, но скорее опреобладающем действии на данный орган.

Проф. Тушнов выдвинул, повидимому, независимо от указанныхработ теорию „о натуральных клеточных ядах“, продуктов обмена клеток, которые, постоянно вырабатываясь в результате жизнедеятельностиих, служат стимулом к повышению функции и размножению клеток. Этипродукты распада, „интерэкскреты“, являясь специфическими регулято рами жизненных процессов, в известных концентрациях являются „ядами“ для клеток, угнетая их жизнедеятельность.

В своем влиянии эти продукты жизнедеятельности строго специфичны.Эти продукты действуют только на тот орган, в котором они образуются.По своей химической природе они относятся к продуктам промежуточного распадка белков—альбумозам и пептонам. Аминокислоты, по мнению Тушнова, совсем не специфичны. Правда, в этом вопросе у школы Тушнова нет, по-видимому, единого мнения: так, Руфимский считает носителем наибольшей специфичности именно аминокислоты.

Под руководством Тушнова и по его методике был выработан целый ряд препаратов из различных органов. Эти препараты получены врезультате ферментного перевариванпя органов до альбумоз и пептонов,носителей наибольшей специфичности. Пользование этими препаратамитребует известного искусства. Сотрудники Тушнова (Руфимский, Сырнев, Перекропов и др.) в своих работах доказывают специфичность этпх лизатов. К сожалению, эти чрезвычайно интересные опыты, как это совершенно правильно отмечают Сергиевский и Забусов, не имеют целесообразно поставленных контролей,которые с абсолютной уверенностью позволили бы сказать, что в данномслучае имеется действительно специфическое действие лизатов, а не неспецифическая протеинтерапия.

В этом отношении исключительный интерес приобретают работы Белоновского, Миллера и Эпштейна, в которых имеется много данных, подтверждающих специфическое действие эмульсий я лизатов органов. Путем введения эмульсий и лизатов различных органов(селезенка, печень, кожа, легкие, яички) вместе с коллоидальным железом или коллоидными красками (trypanblau, кармин), авторы установили, что наибольшее отложение красок или железа наблюдается именнов том органе, лизат или эмульсия которого вводится одновременно с этимколлоидным индикатором.

В своих исследованиях мы попытались воздействовать на трансплантированную опухоль лизатами из тех же опухолей. В самом деле, ведь опухоли,несмотря на то, что они происходят из клеток организма, имеют своиспецифические особенности в отношении как морфологической структуры,так и химизма. Эта специфичность в известной мере позволяет предполагать, что возможно добиться специфического воздействия на клетку,как это имело место в исследованиях Миагавы, Тушнова и Белоновского. В литературе мы находим такого рода попытки ктерапии злокачественных опухолей. Однако попытки эти не носят систематического характера, не имеют правильно поставленных контрольныхопытов, кроме того, исследователями применялись различного родаэмульсии и экстракты, приготовленные самыми разнообразными методами,почему было не ясно, чем именно эти авторы пытаются воздействоватьна опухоли.

Так, Еhгhагd получил у мышей исчезновение привитых опухолей в 5°/о случаев при подкожном введении экстрактов опухоли. Fichera,применяя для лечения крысиных сарком автолизаты из этих опухолей, получал успех почти в 50% случаев. Правда, при употреблении автолизата из крысиных эмбрионов, этот авторполучил еще лучшие результаты  около 82°/о выздоровлений.

Клиническое применение опухолевых экстрактов тоже давало в некоторых случаях чрезвычайно интересные результаты. Достаточно вспомнить случаи излечения опухолей у Ровзинга, Лункбейна и др. Однако, большого распространения этот метод лечения но получил, так как, наряду с поразительными случаями излечения, очень много авторов (Петров) не отмечают никакого результата, а иногда даже ухудшение процесса, очевидно, благодаря бурной реакцииистощенного организма на вводимый парэнтерально белок.

Такие разноречивые результаты объясняются в значительной степениразными методами приготовления экстрактов и различными способами ихприменения. Учитывая все это, мы и решили поставить ряд систематических исследований над влиянием лизатов из опухолей на рост и развитие трансплантированных опухолей у мышей и крыс. Поскольку нет еще единого мнения в отношении того, что именно в лизатах является действующим началом, продукты ли промежуточного распада белка—альбумозы, пептоны или же продукты конечного распада—аминокислоты,мы испробовали действие лизатов, приготовленных различными способами. В одних опытах, путем переваривания пепсином или желудочнымсоком расщепление доводилось до стадии альбумоз и пептона, в других—мы применяли эти лизаты в смеси с продуктами расщепления, полученными при дальнейшем переваривании пепсинных лизатов трипсином.Методика приготовления лизатов сводилась к ферментному перевариванию опухолей и заключалась в следующем:

Мелко измельченная опухоль смешивалась в колбе с 7 объемами 1°/о растворапепсина в 0,5°/о соляной кислоты. Эта смесь ставилась, после прибавления нескольких капель хлороформа, в термостат на 3 суток при 37°. Все время поддерживалась постоянная концентрация водородных ионов (Ph=2.0) и прибавлялсяна 2й день еще пепсин. Затем раствор доводился до почти нейтральной реакциии освобождался кипячением после прибавления насыщенного раствора NaCl отостатков непереваренного белка. Этот раствор довольно хорошо сохранявшийся после прибавления хлороформа и содержавший достаточное количество альбумоаи пептонов, в таком виде и применялся. В ряде опытов раствор высушивался ввакууме при 50° С. и применялся порошок из лизата в различных разведениях.В тех случаях, когда мы хотели испытать действие не только продуктов промежуточного распада, но и конечных продуктов распада, часть лизата, после переваривания пепсином, доводилась до щелочной реакции (Ріі—8.0) и, после прибавления трипсина до 1°/о всего объема, переваривалась в термостате до исчезаниябиуретовой реакции. Остатки трипсина разрушались кипячением. В этой группе опытов применялась смесь из равных объемов пепсинного и трипсинйого лизатов.

Лизаты мы применяли, вспрыскивая их под кожу и интраперитонально.

Прежде, чем перейти непосредственно к лечению опухолей полученными на,милизатами, мы решили попытаться убедиться в специфичности действия лизатов,как это проделал Никольский, на опыты которого ссылаются в своей работе Велоновский и Эрнштейн. Для этого группе в 6 крыс 18/ХІ1 31 г. былапересажена саркома Jеnsеn’а. Трем крысам было введено 26/ХІІ и 30/ХІІ по 1 сан.³ пепсинного дизата этой же опухоли вместе с 1 кб. см. 1°/о trypanblau. Тремконтрольным крысам было введено по 1 куб. см. 1°/о trypanblau 1 кб. физиологического раствора. Опухоли сняты 10/1 32 г. Никакой разницы в окраске стромы икапсулы в сторону более интенсивной окраски у животных, получивших лизат вкраску, как это отмечает Никольский, мы отметить не могли. В другой группе опытов четырем крысам была пересажена 11/1 32г. саркома Jensen’a. Двумиз них 17/1 и 22/1 было введено 2 куб. см. лизата, состоявшего из смеси равныхколичеств опухолей, переваренной пепсином и трипсином вместе с 0,5 куб. см.1^ѳ/о trypanlau. Двум крысам введено по 0,5 к. с. 1°/о trypanblau вместе с 2 кб.см. физиологического раствора. Опухоль снята 2/11. Разницы в окраске междуопытными и контрольными опухолями не отмечается.

Из приведенных выше опытов следует, что применение лизатов из опухолей, содержавших альбумозы, пептоны, аминокислоты вместе с коллоидной краской trypanblau, не способствует большему окраши ванйю опухолей по сравнению с контрольными, как это отмечает Никольский. Конечно,, это еще не дает нам оснований отрицать отсутствие специфического действия лизатов. В дальнейшем мы поставили рядопытов на крысах и мышах, в которых попытались выяснить действиеэкстрактов и лизатов из опухолей на рост и развитие опухолей. Сначала рассмотрим опыт на крысах.

Опыт № 1. Экстракт из опухоли получен мацерацией мелко измельченнойстерильной опухоли (саркома Jеnsen’а) в физиологическом растворе в течение 4суток в термостате при 55° 1/ХП 32 г. пересажена саркома 8ми крысам. Пяти из них 4, 6, 7, 9 и 12 декабря 1931 г. введено под кожу всего 8,5 к. с. экстракта каждой. Три крысы служили контролем. Никакой разницы в росте и развитииопухолей между опытными и контрольными не отмечается. Крысы, получившие экстракт из опухолей, погибли на 3338 день, а контрольные на 3135 день после пересадки.

Опыт № 2. Лизат получен перевариванием пепсином опухолей. Опухоли пересажены 12 крысам 18/XIJ 31 г. Девять из них получили на 8, 11, 14, 18 и 22день после прививки всего 25 куб. см. лизата каждая. Опухоли в росте и величине не отличаются от контрольных. Все погибли на 3340 день после пересадки опухолей.

Опыт № 3. Лизат получен перевариванием до альбумоз и пептонов, высушен ввакууме при 50°С. Опухоли пересажены З/ІІ 32 г. пяти крысам. Инъекции лизатабыли произведены 13/JI 1 кб. см. 1°/о, 15/ІІ—1 кб. см. 1°/о, 17/11—1 кб. см 2°/о,19/11—2 кб. см. 4°/о, 20 и 27 по 2 кб. см. 8°/о. Крысы погибли на 40—42 деньпосле пересадки. Заметной разницы в росте и развитии по сравнению с контрольными не отмечено. Явления некротизации опухолей у опытных начались на 4—5дней позже, чем у контрольных.

Опыт № 4. Лизат получен перевариванием до альбумоз и пептонов. Опухоли пересажены 6 крысам 28/И 32 г.

Три крысы получили 3, 5, 8, 9 марта—14 кб. см. лизата. Отмечается более бурный рост опухолей у получивших лизат крыс по сравнению с контрольными.У одной из опытных крыс при вскрытии опухоли, достигшей величины куриногояйца, не обнаружено, как это обычно отмечается, явлений распада в центре(макроскопически). Микроскоп препаратов по техническим причинам изготовитьбыло нельзя. Все животные контрольные и опытные погибли на 35—40 день.

Опыт М 5. В этой группе опытов применялась смесь из равных количествлизата, приготовленного перевариванием пепсином и лизата, приготовленного перевариванием трипсином после пепсина. В опыте было 34 крысы, которые можноразбить на 4 группы: Группа 1—десяти крысам до пересадки с 21/Ѵ по 4/YIпрофилактически впрыскивалась через день под кожу смесь из равных количествпепсинного и трипсинного лизата по 1 кб. см. 8/IY пересажена крысиная саркома Jеnsеn’а; инъекции лизата (по 2 кб. см.) продолжались и дальше до 10/YII.Группа II. Восемь крыс до пересадки с 21/Y по 4/YI профилактически получали лизат иятраперитотально в таких же дозах и с теми же интервалами, каки в предыдущей серии. 8/IY им также пересажены опухоли. Инъекции лизатапродолжались до 10/YIT. Группа III. Восемь крыс с момента пересадки получалиинтраперитотально тот же лизат и в тех же дозировках, как и предыдущие группы. Группа IY (контрольная). Восьми крысам 8/1Y были пересажены опухоли.Животные не подвергались никаким воздействиям и служили для контроля.

И в этих группах как и в предыдущих, мы не могли констатировать заметноговлияния лизатов из опухолей, содержащих конечные и промежуточные продуктыбелка на рост и развитие саркомы у крыс. У всех животных вырастали опухолитакие же, как и у контрольных. Все животные погибли на 37—43 день после пересадки. Не помогло также и впрыскивание лизата интраперитотально. Единственное, что мы могли констатировать, это несколько быстрый рост опухолей у крыспервой и второй группы приблизительно до 14 дня после пересадки. Однако, затем опухоли контрольных животных и опытных выравнялись и в дальнейшем достигли в общем одинаковых размеров (критерием служило измерение двух перпендикулярных диаметров опухолей.

Если мы теперь попытаемся суммировать опыты, направленные навыяснение влияния лизатов из крысиной саркомы на рост и развитие этой опухоли при систематическом подкожном и интраперитонеальномвведении лизата крысам, то приходится констатировать, что инъекциялизатов не оказывает почти никакого влияния па рост и развитие опухолей. Ни в одном опыте не удалось констатировать рассасывания опухолей, заметного отставания в росте, большей долговечности животных ипр. Обращает на себя внимание опыт № 4, в котором у одного из животных в опухоли, достигшей очень больших размеров, не было обнаружено явлений распада в центре, чего мы никогда в случаях саркомы Jеnsen'а не наблюдали. Кроме того, в последней группе можно былоконстатировать ускорение роста у опытных животных в первые 15 днейпосле пересадки, по сравнению с контрольными. Насколько такого родафакты носят систематический характер, покажут дальнейшие исследования. Все результаты в общем одинаковы, как при применении продуктов распада при переваривании пепсином, так и при последующем переваривании трипсином.

Одновременно был поставлен ряд исследований на мышах, к описаниюкоторых мы и переходим.

Во всех опытах применялась доза в 0,2 ко. см. лизата, так как былоустановлено, что 1 к. с., впрыснутый под кожу или интраперитонеально,приводит к смерти животного в течение ближайших часов после инъекции.

Опыт № 1 (мышиная карцинома Эрлиха). Опухоли пересажены пяти мышШ29/І1 32 г. Лизат получен перевариванием пепсином. 3, 5, 8, 9 13/І1І впрыснутопо 0,2 кб. см. каждой мыши. Опухоли сначала несколько опередили в росте контрольные, затем сравнялись с ними. Животные погибли на 4—7 дней позже контрольных.

Опыт № 2. Лизат приготовлен перевариванием до стадии альбумоз и пептонов.Всего в опыте было 16 мышей. Их следует разбить на 3 группы.

• группа—7 мышей этой группы получали с 24/111 по 7/1V через день 0,2 кб. см.лизата, 8./ІУ пересажена всем мышинная карцинома Э р л шк а. Лизат животныепродолжали получать до 7/У один раз в три дня.
• групаа—4 мыши получали но 0,2 лизата один раз в три дня с момента пересадки, начиная с 8/1У до 7/Ѵ.
• группа—6 мышей: 8/1V пересажена мышиная карцинома Эрлиха. Животные не подвергались никаким воздействиям—контрольные.

У мышей, получавших лизат до и после пересадки, можно было констатироватьнекоторое ускорение в росте по сравнению с контрольными животными и животными, получавшими лизат после пересадки. Однако подобное усиление роста былосравнительно небольшим.

Оуіыш № 8. В этой группе, насчитывавшей 28 животных, применялся лизат,содержавший межуточные и конечные продукты распада белйа опухолей. Эту серию, подобно предыдущей, следует разделить на три группы: _о

Группа 1—10 мышей получали, профилактически под кожу с 21/У по 13/Y1 лизат через день по 0.2 кб. см. каждая, 14/УІ им был пересажен мышиный ракЭерлиха и они продолжали получать под кожу лизат до 26/УІІ один раз в три дня.

Группа 11—10 мышей. Эта группа получала профилактические инъекции ннтранеритотально по 0,2 кб. см. лизата через день. І4/УІ им был пересажен мышиный рак Эрлиха, и они продолжали получать лизат интраперитотально до26/УІІ 32 г. один раз в три дня.

Группа III. Восьми мышам пересажены 14/УІ мышиный рак. Эта группа служила контролем к двум предыдущим. В этом опыте можно констатировать отставание в росте I группы, получавшей лизат под кожу до и после нересадки опухолей. Это отставание, не будучи очень большим, все же достаточно отчетливозаметно. Что касается группы II, то она не отличалась от контрольной группы в росте и развитии.

Подводя итоги опытам, проведенным на мышах, нам приходится констатироватьчто рост опухолей при подкожном и интраперитонеальном введении лизатов из опухолей сравнительно мало изменяется. Отмечается небольшое ускорение в росте и развитии в опытах №1 и 2 и, наоборот, небольшое замедление в группе 1 опыта № 3.В этих опытах, как и в опытах на крысах, критерием быстроты роста служило'измерение двух перпендикулярных диаметров, производившееся раз в 5—6 дней.

Если мы теперь попытаемся суммировать результаты всех проведенных исследований, то приходится констатировать, что продукты промежуточного и конечного распада опухолей вобщем довольно мало влияютна рост опухолей. Чем можно объяснить этот, казалось бы, парадоксальный факт, так как исследования Миагава, Тушнова идр. как будто дают все предпосылки предполагать наличие влияния лизатов?

 Можно было бы допустить, что незначительный эффект действия лизатов возможен благодаря недостаточному количеству активно действующих продуктов при их введении. Однако, эго возражение не являетсясерьезным, так как благодаря длительному перевариванию опухольнойткани получались в каждом случае достаточно концентрированные растворы продуктов расщепления белков. Что касается дозировки и методавведения, то мы вводили, как это видно из протоколов опытов, достаточно большие количества лизатов и под кожу и интраперитонеально. Возможно, что эффект воздействия не является таким, чтобы он мог датьбольшие изменения в росте и развитии, а отражается в известной мерена морфологическое строение опухолей. Такое предложение тем более вероятно, что на разрезах опухолей у животных, получавших лизаты,мы очень часто могли наблюдать, что соотношения между живой тканьюи зоной некроза значительно отличаются от опухолей контрольных.В одном случае мы даже имели возможность наблюдать в случае крысиной саркомы величиной с куриное яйцо отсутствие явлений распада вцентре (макроскопически). Понятно, что исчерпывающий ответ здесь сможет дать детальное патогистологическое исследование. Учитывая все изложенные выше соображения, мы думаем, что отрицательные результатынаших опытов еще не дают достаточно оснований к тому, чтобы сделатькатегорические выводы об отсутствии этого специфического действия.

Выводы: Продукты расщепления белка опухолей, полученные путем ферментного переваривания до альбумоз пептонов и аминокислот, при введении под кожу и иетраиеритонеально, не оказывают заметного влияния на рост и развитие трансплантированных опухолей.

 

[1] Детально мы на литературе не останавливаемся, так как этот вопрос доволь«но подробно освещен на страницах Казанского медицинского журнала за последние годы.

About the authors

Ya Lazaris

Кафедра патолог. физиологии Днепропетровского мед. института (зав. проф. Ф. Бриккер)

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation

L Timofeeva

Кафедра патолог. физиологии Днепропетровского мед. института (зав. проф. Ф. Бриккер)

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation

References

Supplementary files