Влияние ксимедона на состояние гуморального антибактериального иммунитета у больных ангиной

Полный текст

С общепатологической точки зрения, основой и патогенетической сущностью банальной ангины является острое воспаление как универсальный способ реализации защитного потенциала организма в ответ на бактериальное повреждение [5].

При этом речь идет как о местных проявлениях воспалительного процесса, так и об общей реакции организма, характеризуемой емким понятием “интоксикация”. Под эндогенной интоксикацией подразумеваются клинические, патофизиологические и морфологические проявления защитной реакции организма на токсические продукты, образующиеся в нем самом в результате протекающего патологического процесса [2, 8].

Внедрение в миндалины большого количества вирулентных стрептококков сопровождается подавлением неспецифической резистентности и иммунитета с последующим размножением в них микробов [5]. Многие из продуцируемых стрептококками веществ оказывают биологическое действие на ткани миндалин и организм в целом, что приводит к нарушению микроциркуляции и увеличению проницаемости всех слизистых оболочек организма. Влияние эндотоксина на иммунную систему характеризуется активацией клеточного и гуморального ответов на любые антигены [8, 9, 11]. Ускоряется пролиферация полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ), моноцитов и макрофагов. Фагоциты активизируются, ускоряется их кислородный метаболизм, стимулируется образование интерферона и СЗ-комплемента.

Известно, что стрептококковый эндотоксин, обнаруженный Стетсоном в 1956 г. в неочищенном экстракте стрептококка группы А, по аналогии с эндотоксином грамотрицательных бактерий, обладает пирогенностью и токсичностью, способен сенсибилизировать ткани и вызывает уменьшение циркулирующего пула ПМЯЛ [4]. Все перечисленные эффекты характерны для малых и умеренных доз эндотоксина, избыточные же чаще всего блокируют физиологические системы, усиливая основной патологический процесс [11].

Мы не нашли работ о состоянии антиэндотоксиновой защиты и специфического гуморального ответа на стрептококк и другую условно-патогенную флору (УПФ) у больных ангиной.

В свете изложенной выше концепции возникновения и протекания инфекционного процесса при ангине целью настоящего исследования было изучение напряженности гуморального антибактериального и антиэндотоксино- вого иммунитета в динамике заболевания.

Под наблюдением находились 69 больных ангиной в возрасте от 16 до 56 лет (женщин — 37,5%, мужчин — 62,5%). Тяжесть клинических проявлений оценивали по выраженности синдрома интоксикации и характеру локальных поражений. Тяжелое течение болезни отмечалось у 33,9% больных, среднетяжелое — у 66,1%. По характеру местного процесса наблюдалась преимущественно лакунарная ангина (у 75,9%), язвенно-пленчатая (у 16,7%) и фолликулярная (у 7,4%). Первичная ангина регистрировалась в 46,3% случаев, повторная — в 53,7%. В результате бактериологических исследований β-гемолитический стрептококк в виде монокультуры был высеян у 92 (64,4%) больных, ассоциация стрептококка со стафилококком и другой УПФ — у 35 (24,4%), золотистый стафилококк — у 16 (11,2%) больных, причем он имел место преимущественно у лиц с повторной формой ангины.

Исследования проводились в остром периоде заболевания (3—4-й день болезни), в периоде ранней (10—11-й день от начала заболевания) и поздней (20— 25-й день) реконвалесценции. Напряженность гуморального антибактериального иммунитета оценивали путем определения концентрации антител к антигенам Str. pyogenes, липополисахариду Е. coli О14, Ps. aeruginosa, Pr. mirabilis, S. aureus, C.albicans, Str. pneumoniae, а также к эндотоксину (гликолипид RE-595 S. Minnesota — ГЛП) методом иммуноферментного анализа.

Использовали соматические антигены Ps.aeruginosa, Pr. mirabilis, S. aureus, полученные путем экстракции 0,1M Na ЭДТА (pH 9,1) после ультразвуковой дезинтеграции. Для отделения антигенов от осколков мембран и экстрагирующего буфера препараты центрифугировали при 20000 g в течение одного часа с последующим трехкратным диализом против 50 объемов 0,01М Na-, К-фосфатного буфера с pH 7,4.

В качестве антигенов Str. pyogenes, С. albicans, Str. pneumoniae применялись препараты аллергенов для реакции in vitro (Казань, Предприятие по производству бактерийных препаратов), ГЛП был получен по Galanos С., а липополисахарид Е. coli 014 — по Вестфалю. Концентрацию антител в сыворотке крови определяли твердофазным иммуноферментным методом. Для этого плоскодонные планшеты сенсибилизировали антигенами в оптимальной дозировке (от 2,5 до 5 мкг/мл) в течение 24 часов при 4°С. Сенсибилизированные планшеты подвергали блокировке 0,5% раствором альбумина в течение одного часа при температуре 37°С. После промывания забуференным физиологическим раствором (ЗФР) с 0,05% раствором твин-80 в лунки вносили по 200 мкл исследуемой сыворотки в разведении 1:50 в том же ЗФР с твином. После инкубации при 37°С в течение одного часа и отмывки от несвязавшихся антител тем же растворителем связанные антитела выявляли коммерческим препаратом конъюгата белка А с пероксидазой хрена, используемого в тест-системах на ВИЧ-анти- тела. Хромогенную реакцию проводили о-фенилендиамином с последующей остановкой 10% раствором серной кислоты. Для определения концентрации выявляемых антител на том же планшете ставили реакции с разведениями аффинно-выделенных антител той же специфичности. Результаты выражали в микрограммах белка антител на миллилитр сыворотки крови.

Статистическую обработку данных производили с использованием пакетов программы Microsoft Excel.

Исследования специфического гуморального иммунитета у больных ангиной показали, что в остром периоде заболевания (см. табл.) отмечалось достоверное снижение концентрации антител к S. aureus на 33,8% (Р <0,001), к ГЛП - на 44,2% (Р <0,001), к С. albicans на 31,8% (Р <0,01), повышение к Ps. aeruginosa — в 3,3 раза и к Str.pneumoniae — на 12,7%. Имелась тенденция к снижению концентрации антител к Str.pyogenes на 6,5% и к Е. coli на 12,2%. Уровень антител к Pr. mirabilis не отличался от показателей здоровых лиц.

В периоде ранней реконвалесценции уровень антител к Str.pyogenes, E.coli, Pr.mirabilis достоверно не отличался от показателей здоровых лиц; сохранялся достоверно низкий уровень антител к ГЛП; концентрация антител Str. pneumoniae снизилась и достигла уровня здоровых лиц.

В периоде поздней реконвалесценции сохранялось достоверное снижение концентрации антител к S. aureus (на 33,3%), к С. albicans (на 36,5%), к ГЛП (на 49%), а также повышение к Ps. aeruginosa (в 2,8 раза по сравнению с уровнем здоровых лиц). Концентрация антител к Str. pyogenes, Pr. mirabilis и E. coli достоверно не отличалась от показателей здоровых лиц.

Таким образом, динамика специфических антител к УПФ и антител к ГЛП грамотрицательной флоры у больных ангиной характеризовалась разнонаправленностью, торпидностью и монотонным нарастанием на всех сроках наблюдения, что свидетельствовало о дисбалансе в гуморальном иммунитете у этих больных. Отсюда вытекает необходимость рациональной иммунокорригирующей терапии больных ангиной.

Поиски средства, сочетающего в себе свойства активного иммуностимулятора со слабой токсичностью, привели нас к новому отечественному препарату пиримидинового ряда ксимедону.

 

Показатели гуморального иммунитета у больных ангиной в динамике заболевания при традиционной терапии и лечении ксимедоном

Антигены	У здоровых лиц (n = 48)	Концентрация антител у больных ангиной (мкг/мл)
		в периоде разгара	в периоде ранней реконвалесценции	в периоде поздней реконваленсценции
Str. pyogenes	1,7±0,08	1,59±0,15 1,54±0,17	2,6±0,14** 1,65±0,18	1,99±0,22 1,73±0,23
S. aureus	6,0±0,3	3,89±0,23*** 3,97±0,25**	4,09±0,23** 4,1±0,22**	5,19±0,26 4,0±0,42**
Str. pneumoniae	1,5±0,07	1,83±0,11* 1,69±0,09*	1,71±0,21 1,74±0,17	1,73±0,24 1,56±0,18
Pr. mirabilis	3,5±0,17	3,94±0,63 3,24±0,8	4,07±0,5 4,11±0,58	3,13±0,5 3,15±0,49
Ps. aemginosa	3,5±0,17	12,42±1,31*** 10,46±3,25**	12,65±1,38*** 10,62±1,29***	5,13±1,12 9,63±1,75***
E. coli	4,5±0,22	3,75±0,38 3,95±0,55	3,93±0,46 3,51±0,5	3,94±0,74 4,32±0,7
C. albicans	4,3±0,21	3,32±0,19** 2,93+1,35***	3,27±0,21** 2,76±0,15***	3,73±0,46 2,73±0,28***
ГЛП	6,0±0,3	3,87±0,61*** 3,35±0,85***	4,25±0,54* 3,25±0,31***	4,61±0,85 3,06±0,56***

Примечание. В числителе — показатели больных основной группы (в периоде разгара — 34 человека, ранней реконвалесценции — 35, поздней — 21), /В знаменателе — показатели контрольной группы (соответственно 35, 35 и 23 человека).

* Р <0,05, ** Р<0,01, *** Р<0,001 — достоверность показателей антиэндотоксинового и антибактериального иммунитета у больных по отношению к показателям здоровых. В остальных случаях Р> 0,05.

 

В механизме действия ксимедона ведущая роль принадлежит его способности активизировать метаболические процессы, модулировать активность иммунной системы с нормализацией клеточного и гуморального иммунитета, повышением неспецифической резистентности, регенерирующим действием [6].

Задачей нашего исследования было изучение влияния ксимедона на клиническое течение ангины и напряженность гуморального антибактериального и антиэндотоксинового иммунитета. Ксимедон назначали основной группе больных (34 чел.) по 0,5 г три раза в день перед едой внутрь в течение 5—7 дней на фоне традиционной терапии. Контрольную группу составили 35 больных, которые получали общепринятую терапию: антибиотики преимущественно пенициллинового ряда, десенсибилизирующие средства, поливитамины. В группе здоровых было 48 человек. Группы набирали методом случайной выборки, а затем их рандомизировали.

Результаты клинических исследований показали, что включение ксимедона в комплексную терапию больных основной группы ускоряло выздоровление: продолжительность синдрома интоксикации достоверно сокращалась в среднем на 2 дня, местного воспалительного процесса — на 1,5 дня.

В периоде ранней реконвалесценции на фоне применения ксимедона происходило достоверное нарастание концентрации антител к Str. pyogenes на 64%, к эндотоксину на 9,8%, к антигену золотистого стафилококка на 5,1%, однако сохранялись достоверно высокие концентрации антител к псевдомонадам.

В периоде поздней реконвалесценции наблюдалось дальнейшее нарастание уровня антител к эндотоксину на 8,5%, к С. albicans на 14,1%, к S. aureus на 27% и снижение концентрации антител к Str. pyogenes на 23% и Ps. aeruginosa в 2,4 раза, что приводило эти показатели к уровню здоровых лиц.

 

Распределение пациентов (в %) по соотношению концентрации антител ГЛП/Е. coli.

 

Как было показано в ранних работах [2], важным с точки зрения патогенеза инфекционного процесса является не только абсолютная концентрация антител к ГЛП и Е. coli, но и их соотношение. Преобладание антител к Е. coli свидетельствует о значительном поступлении в системный кровоток полного липополисахарида бактерий из кишечника со всеми вытекающими последствиями [9]. В нашем исследовании влияние кси- медона выразилось в увеличении доли пациентов, имеющих соотношение концентрации антител ГЛП/Е. coli, характерное для здоровых лиц (42%), в отличие от пациентов, получающих базисную терапию (20%). Мы предполагаем, что такое изменение свидетельствует об уменьшении поступления липополисахарида из кишечника за счет стабилизации мембран, вследствие чего происходит нормализация гуморального иммунитета.

По всей видимости, наблюдаемое изменение в гуморальном иммунитете связано с нарушением проницаемости слизистых оболочек, вызванным стрептококковой токсинемией в разгаре заболевания, о чем косвенно свидетельствуют подобные изменения антипро- тейного иммунитета, наблюдаемые у населения Киева после Чернобыльской аварии в течение трех лет [3].

Этиологический фактор ангины — стрептококк или ассоциация стрептококка с другой УПФ, чаще всего с золотистым стафилококком. Несмотря на литературные данные о повышенной концентрации антител к Str. pyogenes и S. aureus, наблюдаемой при стрептококковых инфекциях [1, 8], нами не прослежено такой динамики. Наоборот — в периодах разгара, ранней и поздней реконвалесценции концентрация антител к вышеуказанным антигенам была достоверно ниже, чем у здоровых. Очевидно, во время разгара и ранней реконвалесценции происходит усиленное потребление антител, и биосинтез их не успевает компенсировать эти потери. Аналогичная ситуация прослеживалась и в отношении антител к эндотоксину, Е. coli, С. albicans, Pr.mirabilis, за исключением антител к Ps. aeruginosa. Объяснить этот феномен довольно сложно, поскольку Ps. aeruginosa, по литературным данным, не является этиологическим фактором и не принимает участия в развитии ангины. Можно предположить, что эти бактерии имеют антигенный перекрест с тканью лимфоидного кольца носоглотки, и повышается концентрация антител не к Ps. aeruginosa, а к лимфоидной ткани миндалин. Такое предположение мы сделали по полученным нами данным, согласно которым при радиационных поражениях и раке щитовидной железы повышается концентрация антител к Pr. mirabilis, которые имеют антигенное сходство с тканью щитовидной железы. Аналогичная картина возможна и при ангине, только применительно к ткани лимфоидного кольца глотки. Следует заметить, что это лишь одно из объяснений выявленного феномена.

Повышение концентрации антител к Ps. aeruginosa можно объяснить еще и тем, что липид А этого микроорганизма отличается от другой грамотрицательной флоры. Кроме того, Ps. aeruginosa имеет токсин, подобный дифтерийному, который ингибирует синтез белка, связывает фактор элонгации II в клетках [11] и приводит к снижению уровня антител к другим антигенам, повышая синтез антител к псевдомонадам.

Низкие концентрации антител к S. aureus связаны, возможно, с антигенным сходством их и группоспецифического фактора А эритроцитов человека (группа крови II А) — частота этого фактора среди населения Европы составляет 88% [10]. Поэтому можно сделать вывод о значительном числе лиц со сниженным иммунным ответом на стафилококк. Стафилококковые антигены не распознаются как “чужие”, ибо распознавание ингибируется сходством структур.

Снижение уровня антител к другим антигенам, вероятно, обусловлено супрессией иммунной системы, так как мы наблюдали снижение числа Т-лимфоцитов и их субпопуляций — Т-хелперов. По имеющимся литературным данным, стафилококк и стрептококк обладают рядом митогенов, которые могут специфически воздействовать на Т- и В-клетки, хелперы и супрессоры с соответствующим результатом [7, 9].

Применение препарата ксимедона оказывало положительное влияние на состояние гуморального антибактериального иммунитета у больных ангиной, что объясняется его иммунотропным действием и стимуляцией Т- и В-клеточного иммунитета. Механизм этого эффекта может быть обусловлен стимулирующим влиянием ксимедона на синтез ДНК, которая осуществляет перенос информации от Т- к В-лимфоцитам и соответственно способствует повышению функциональной активности В-лимфоцитов, выражающемуся в изменении уровня антител [6].

Выводы

1. Включение ксимедона в комплексную терапию больных ангиной оказывало положительное влияние на клиническое течение болезни, выражавшееся в сокращении длительности интоксикации и местного воспалительного процесса.
2. Ксимедон оказывал корригирующее влияние на состояние гуморального антибактериального иммунитета у больных ангиной, выражавшееся в нормализации концентрации антител к эндотоксину и условно-патогенной микрофлоре.

Об авторах

О. Д. Зинкевич

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com

Профессор, заведующий лаборатории иммунохимии, Кафедра инфекционных болезней 

Россия, Казань; Казань

И. Э. Кравченко

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Email: info@eco-vector.com

Кафедра инфекционных болезней, Лаборатория иммунохимии

Россия, Казань; Казань

В. Х. Фазылов

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Email: info@eco-vector.com

Профессор, заведующий кафедрой инфекционных болезней, Лаборатория иммунохимии

Россия, Казань; Казань

Н. А. Сафина

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Email: info@eco-vector.com

Кафедра инфекционных болезней, Лаборатория иммунохимии

Россия, Казань; Казань

О. А. Платонова

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Email: info@eco-vector.com

Кафедра инфекционных болезней, Лаборатория иммунохимии

Россия, Казань; Казань

Р. А. Уразаев

Казанский государственный медицинский университет; Казанский НИИЭМ

Email: info@eco-vector.com

Кафедра инфекционных болезней, Лаборатория иммунохимии

Россия, Казань; Казань

Список литературы

Дополнительные файлы