The use of cryoprecipitate in the treatment of hemophilia

Abstract

The method of obtaining native cryoprecipitate, which we used, is extremely simple: since it does not require complex equipment, expensive scarce reagents, and a long time.

Full Text

Метод получения нативного криопреципитата, использованный нами, предельно прост,; так как не требует сложного оборудования, дорогостоящих дефицитных реактивов и длительного времени. Плазму, полученную плазмаферезом, заготавливали по 250 мл в пластикатные мешки емкостью 500 мл и тотчас замораживали при температуре минус 25—30°. Через 24 часа плазму оттаивали в ледяной бане при температуре плюс 8—10° в течение 1 часа, после чего ее немедленно центрифугировали при 2000 об./мин. и t плюс 4—6° в течение 25—30 мин. Надосадочную плазму отсасывали и использовали для дальнейшего фракционирования с целью получения из нее фибриногена, альбуминага и полиглобулина. Помимо этого, ее можно назначать в гемостатических целях больным с недостаточностью факторов II, VII, IX, X, а также применять для получения препаратов типа PPSB.

Осадок криоглобулинов (3—5 мл), который оставался на дне мешка, помещали в холодильную камеру, где хранили при температуре минус 25—30°. За одну дозу криопреципитата принимали количество его, полученное из 250 мл свежей плазмы. Перед инфузией препарата осадок растворяли в физиологическом растворе до объема, соответствующего 7ю исходного объема плазмы. Содержание общего белка в разведенном препарате, готовом для проведения лабораторных исследований или клинического применения, равнялось 0,7 ± 0,03 г% (метод Лоури). Фибриноген в комплексе с у-глобулинами, определяемый методом электрофореза, составлял 20 ±1,8 мг%.

Активность антигемофильного глобулина (АГГ) исследовали с помощью модифицированного теста генерации тромбопластина по Биггсу и Макферлану в описании Перлика (1960), концентрацию фибриногена — по суховоздушному методу ЛИПК. Исследования проводили с цельной плазмой, из которой готовили препарат, с криопреципитатом и с плазмой над осадком криоглобулинов.

Активность фактора VIII в плазме доноров колебалась от 50 до 200%. В среднем она равнялась 97±3,1 (п = 77). Концентрация фибриногена была в пределах 255±8,4 мг%.

Активность фактора VIII в 91 образце нативного криопреципитата была выше, чем в свежей донорской плазме, в 33 раза. Концентрация фибриногена в криопреципитате составляла 399 ± 28 мг%. После отделения осадка криоглобулинов центрифугированием в надосадочной плазме активность АГГ была равна 42 ± 4,0%, а количество фибриногена — 211 ± 13,0 мг%.

По описанной выше методике было приготовлено 124 дозы криопреципитата. Препарат применяли в хирургической клинике Кировского НИИ переливания крови при лечении 21 больного гемофилией А. Возраст больных колебался от 2 до 35 лет. Показаниями к применению криопреципитата явились операции, желудочно-кишечные кровотечения, кровоизлияния в суставы, кровотечения после экстракции зуба, гематомы различной локализации. Некоторые больные получали инфузии с профилактической целью при значительном удлинении времени спонтанного свертывания крови (свыше 30—40 мин.).

Всего было произведено 97 вливаний криопреципитата. Количество вливаний одному больному колебалось от 1 до 12 (в среднем — 4,6). Детям в возрасте до 7 лет вводили 1,2 мл, старше 7 лет — 0,4 — 0,7 мл на 1 кг веса. .Перед инфузией осадок криоглобулинов растворяли в 20—25 мл стерильного физиологического раствора хлорида натрия и производили вливание через систему с капроновым фильтром. Можно вводить препарат шприцем, предварительно пропустив его через капроновый фильтр. Ни в одном случае во время и после однократных и повторных введений криопреципитата не было отмечено каких-либо реакций и побочных действий. Клинические наблюдения свидетельствуют об отсутствии аллергических реакций у больных даже после многократных инфузий (до 12). Результаты исследования времени спонтанного свертывания крови и активности фактора VIII в динамике косвенно доказывают отсутствие антител к фактору VIII.

У больных, которым вводили препарат, мы исследовали в динамике ряд показателей свертывающей системы крови до вливания, тотчас, через 1, 4, 8, 12, 24 и 48 часов после введения.

Время спонтанного свертывания крови до введения криопреципитата равнялось 31,4 ±2,6 мин., активность фактора VIII — 9± 1,2%, концентрация фибриногена — 353 ±21 мг%. На основании полученных результатов можно заключить, что небольшие количества криопреципитата, введенные однократно, вызывают резкое укорочение времени спонтанного свертывания крови сразу после переливания (Р<0,05). В первые 12 часов время свертывания крови становилось укороченным и даже спустя сутки было меньше исходного (26,4 ± 2,3 мин., Р = 0,05). Через 48 час. оно достигало исходной величины (30,5 ± 6,4 мин.). Судя по этому, можно считать, что препарат оказывает выраженное гемокоагуляционное действие на протяжении 12 часов. Через 48 часов оно полностью исчезает.

Между изменением активности фактора VIII и времени спонтанного свертывания крови отмечен некоторый параллелизм. Тотчас после переливания активность фактора VIII повышалась почти в 2 раза по сравнению с исходной. Самая высокая активность АГГ зарегистрирована через 4 часа после введения криопреципитата (18 ±3,9). Через 8 часов средняя арифметическая активность фактора VIII достоверно от исходной не отличалась, более того, она обнаруживала явную тенденцию к снижению. Активность фактора VIII через 48 часов равнялась 6±1,8%.

Концентрация фибриногена после введения криопреципитата на протяжении прослеженных 48 часов не изменилась. Повышение активности АГГ при однократном введении небольших количеств криопреципитата (10—25 мл) трудно объяснить лишь заместительным эффектом. Возможно, препарат способствует дополнительной выработке этого фактора или его активации.

Клинические наблюдения и результаты изменения времени спонтанного свертывания крови и увеличение активности АГГ свидетельствуют о целесообразности дальнейшего лабораторного и клинического изучения нативного криопреципитата донорской плазмы. Этот препарат обладает выраженным гемостатическим действием. Под контролем системы свертывания крови его можно с успехом применять при кровотечениях различной локализации и с целью профилактики кровотечений у больных гемофилией А.