Changes in the content of amino acids in the blood serum in infectious hepatitis

Abstract

We studied the amino acid spectrum of blood in 131 patients with infectious hepatitis and 50 healthy ones. The studies were carried out by the method of one-dimensional descending chromatography on paper (3.S. Chulkova, I.I. Gumina, 1958; M.N. Medvedeva, P.V. Kugenev, V.P. Shchuka, 1961), always on an empty stomach in the morning, under conditions basic exchange. A modification of the technique was developed by O. M. Gulina.

Full Text

Мы изучали аминокислотный спектр крови у 131 больного инфекционным гепати­том и у 50 здоровых. Исследования проводили методом одномерной нисходящей хро­матографии на бумаге (3. С. Чулкова, И. И. Гумина, 1958; M. Н. Медведева, П. В. Кугенев, В. П. Щука, 1961), всегда утром натощак, в условиях основного обме­на. Модификация методики разработана О. М. Гулиной.

Исследовали 0,5 мл сыворотки крови, взятой из вены. Для удаления белков до­бавляли равное количество 0,04 н. раствора НС1 и помещали в кипящую баню на 3—4 мин. Свернувшиеся белки отделяли центрифугированием в течение 20 мин. при 4000 об/мин. Фильтрат выпаривали досуха и перед нанесением пробы разводили в 100—150 мкл 0,01 н. раствора НС1.

Бумагу («быстрая», Ленинградской фабрики) предварительно для удаления ми­неральных солей промывали 0,1% раствором оксихинолина в уксуснобутиловом рас­творителе в течение 5 дней. После обработки на бумагу наносили все количество безбелкового фильтрата в виде отдельных полос в 1,5—2 см. Для хроматографического разделения аминокислот применяли в качестве растворителя верхний слой смеси бу­тилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении 4:1:5. Растворитель про­пускали многократно через бумагу с возрастающей экспозицией (5, 7, 12, 17, 20, 24 часа). После каждого пропускания растворителя хроматограммы высушивали при комнатной температуре (в последнем случае не менее 6 часов). Для проявления хро­матограмм применяли 0,5% раствор нингидрина в 95% ацетоне, с подкислением ле­дяной уксусной кислотой из расчета 1 мл на 100 мл раствора. После проявления хро­матограммы высушивали в течение суток при комнатной температуре в темноте. Стабилизация выявленных пятен достигалась погружением хроматограмм в 1% рас­твор азотнокислой меди в абсолютном ацетоне, с добавлением 0,02 мл концентрирован­ной HNO3 Окрашенные пятна вырезали по шаблону и заливали 70% этиловым Спиртом для экстрагирования аминокислот (в течение 2 час.). Полученный экстракт подвергали колориметрии на ФЭК-М с зеленым светофильтром, с определением со­держания аминокислот в единицах оптической плотности. Пересчет содержания ами­нокислот производили с помощью калибровочных кривых, полученных на основании контрольных исследований смеси химически чистых аминокислот.

Наши результаты обследования здоровых лиц в основном соответствовали дан­ным других авторов, пользовавшихся методом бумажной хроматографии (Мютинг, 1958; Кнауфф и сотр., 1959; 3. Н. Лебедева, 1963; В. П. Волков, 1964; М. К. Усманов, 1964).

Мы вели динамическое наблюдение за аминокислотным спектром крови у больных инфекционным гепатитом. При легком течении заболевания (39 больных) содержание аминокислот было в основном в пределах нормальных колебаний. Для больных со среднетяжелым течением (53 чел.) характерным оказалось достоверное увеличение содержания глицина, аланина и тенденция к повышению аспарагиновой кислоты, ти­розина, фенилаланина. Выявлено также снижение концентрации аргинина. После ле­чения содержание аминокислот в значительной мере нормализовалось.

При тяжелом течении болезни (39 больных) зарегистрировано достоверное уве­личение глицина, аланина, пролина, тирозина, лейцина+изолейцина и некоторое повы­шение аспарагиновой кислоты, глютамина, фенилаланина. Противоположные сдвиги отмечены в содержании лизина, аргинина, глютаминовой кислоты. После лечения аминокислотный спектр крови улучшался, но полностью не нормализовался.

Значительное увеличение содержания всех исследуемых аминокислот в сыворотке крови обнаружено у больного острым некрозом печени с развитием печеночной комы. Особенно резко увеличилось содержание аланина, тирозина, валина, аргинина, лейци­на + изолейцина. У этого больного на хроматограмме дополнительно выявлены нингидринположительные пятна, которые не были идентифицированы. При подостром некро­зе печени изменения аминокислотного спектра крови были аналогичны встречавшимся у больных с тяжелым течением болезни; увеличение содержания аминокислот было менее значительным в связи с частичной компенсацией нарушений за счет регенера­торных процессов.

Полученные результаты следует рассматривать как показатель значительного из­менения межуточного обмена белка. Уровень аминокислот в сыворотке крови в нор­ме, как известно, достаточно стабилен.

Трактовка отмеченных сдвигов, до сих пор не уточнена. Еще К. Рокитанский (1849) и Фрерикс (1860) описали появление кристаллов лейцина и тирозина в моче при развитии печеночной недостаточности. Кашен и сотр. (1951, 1954) объясняют уведичение тирозина и фенилаланина нарушением обмена ароматических аминокислот, считают их повышение специфическим индикатором недостаточности печени. Однако Кнауфф и Виндшаймер (1960) связывают появление кристаллов не с резким увели­чением содержания аминокислот, а с их способностью легко кристаллизоваться.

Снижение аргинина в сыворотке крови может быть обусловлено увеличением активности аргиназы, выделяющейся в большом количестве из некротизированной тка­ни печени (Маннинг, Гризолиа, 1957; Вальберг и Беверидж, 1960). Допускают также, что снижение концентрации аргинина связано с нарушением процесса мочевинообразовання (Герок, 1963; Кнауфф и сотр., 1964). Однако содержание мочевины при ин­фекционном гепатите, как правило, не изменяется (А. Л. Михнев, 1950; Мадьяр, 1962).

Некоторое накопление глицина могло наступить в результате нарушения про­цесса образования парных соединений, который связан с расходом данной аминокис­лоты (Герок, 1963).

Снижение глютаминовой кислоты, как и повышение аспарагиновой кислоты и ала­нина, по-видимому, свидетельствует о нарушении процесса переаминирования (Ибер и сотр., 1957). Снижение глютаминовой кислоты при заболеваниях печени может частич­но зависеть от нарушения синтеза ее из альфа-кетоглютаровой кислоты (Кнауфф и сотр., 1960). Приходится также учитывать возможность перехода глютаминовой кислоты через гамма-полуальдегид в пролин (Герок, 1963).

Результаты работы подтвердили значение изучения аминокислотного спектра кро­ви при инфекционном гепатите в качестве дополнительного критерия оценки тяжести течения болезни.