Изменения содержания аминокислот в сыворотке крови при инфекционном гепатите

Аннотация

Мы изучали аминокислотный спектр крови у 131 больного инфекционным гепати­том и у 50 здоровых. Исследования проводили методом одномерной нисходящей хро­матографии на бумаге (3. С. Чулкова, И. И. Гумина, 1958; M. Н. Медведева, П. В. Кугенев, В. П. Щука, 1961), всегда утром натощак, в условиях основного обме­на. Модификация методики разработана О. М. Гулиной.

Полный текст

Исследовали 0,5 мл сыворотки крови, взятой из вены. Для удаления белков до­бавляли равное количество 0,04 н. раствора НС1 и помещали в кипящую баню на 3—4 мин. Свернувшиеся белки отделяли центрифугированием в течение 20 мин. при 4000 об/мин. Фильтрат выпаривали досуха и перед нанесением пробы разводили в 100—150 мкл 0,01 н. раствора НС1.

Бумагу («быстрая», Ленинградской фабрики) предварительно для удаления ми­неральных солей промывали 0,1% раствором оксихинолина в уксуснобутиловом рас­творителе в течение 5 дней. После обработки на бумагу наносили все количество безбелкового фильтрата в виде отдельных полос в 1,5—2 см. Для хроматографического разделения аминокислот применяли в качестве растворителя верхний слой смеси бу­тилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении 4:1:5. Растворитель про­пускали многократно через бумагу с возрастающей экспозицией (5, 7, 12, 17, 20, 24 часа). После каждого пропускания растворителя хроматограммы высушивали при комнатной температуре (в последнем случае не менее 6 часов). Для проявления хро­матограмм применяли 0,5% раствор нингидрина в 95% ацетоне, с подкислением ле­дяной уксусной кислотой из расчета 1 мл на 100 мл раствора. После проявления хро­матограммы высушивали в течение суток при комнатной температуре в темноте. Стабилизация выявленных пятен достигалась погружением хроматограмм в 1% рас­твор азотнокислой меди в абсолютном ацетоне, с добавлением 0,02 мл концентрирован­ной HNO3 Окрашенные пятна вырезали по шаблону и заливали 70% этиловым Спиртом для экстрагирования аминокислот (в течение 2 час.). Полученный экстракт подвергали колориметрии на ФЭК-М с зеленым светофильтром, с определением со­держания аминокислот в единицах оптической плотности. Пересчет содержания ами­нокислот производили с помощью калибровочных кривых, полученных на основании контрольных исследований смеси химически чистых аминокислот.

Наши результаты обследования здоровых лиц в основном соответствовали дан­ным других авторов, пользовавшихся методом бумажной хроматографии (Мютинг, 1958; Кнауфф и сотр., 1959; 3. Н. Лебедева, 1963; В. П. Волков, 1964; М. К. Усманов, 1964).

Мы вели динамическое наблюдение за аминокислотным спектром крови у больных инфекционным гепатитом. При легком течении заболевания (39 больных) содержание аминокислот было в основном в пределах нормальных колебаний. Для больных со среднетяжелым течением (53 чел.) характерным оказалось достоверное увеличение содержания глицина, аланина и тенденция к повышению аспарагиновой кислоты, ти­розина, фенилаланина. Выявлено также снижение концентрации аргинина. После ле­чения содержание аминокислот в значительной мере нормализовалось.

При тяжелом течении болезни (39 больных) зарегистрировано достоверное уве­личение глицина, аланина, пролина, тирозина, лейцина+изолейцина и некоторое повы­шение аспарагиновой кислоты, глютамина, фенилаланина. Противоположные сдвиги отмечены в содержании лизина, аргинина, глютаминовой кислоты. После лечения аминокислотный спектр крови улучшался, но полностью не нормализовался.

Значительное увеличение содержания всех исследуемых аминокислот в сыворотке крови обнаружено у больного острым некрозом печени с развитием печеночной комы. Особенно резко увеличилось содержание аланина, тирозина, валина, аргинина, лейци­на + изолейцина. У этого больного на хроматограмме дополнительно выявлены нингидринположительные пятна, которые не были идентифицированы. При подостром некро­зе печени изменения аминокислотного спектра крови были аналогичны встречавшимся у больных с тяжелым течением болезни; увеличение содержания аминокислот было менее значительным в связи с частичной компенсацией нарушений за счет регенера­торных процессов.

Полученные результаты следует рассматривать как показатель значительного из­менения межуточного обмена белка. Уровень аминокислот в сыворотке крови в нор­ме, как известно, достаточно стабилен.

Трактовка отмеченных сдвигов, до сих пор не уточнена. Еще К. Рокитанский (1849) и Фрерикс (1860) описали появление кристаллов лейцина и тирозина в моче при развитии печеночной недостаточности. Кашен и сотр. (1951, 1954) объясняют уведичение тирозина и фенилаланина нарушением обмена ароматических аминокислот, считают их повышение специфическим индикатором недостаточности печени. Однако Кнауфф и Виндшаймер (1960) связывают появление кристаллов не с резким увели­чением содержания аминокислот, а с их способностью легко кристаллизоваться.

Снижение аргинина в сыворотке крови может быть обусловлено увеличением активности аргиназы, выделяющейся в большом количестве из некротизированной тка­ни печени (Маннинг, Гризолиа, 1957; Вальберг и Беверидж, 1960). Допускают также, что снижение концентрации аргинина связано с нарушением процесса мочевинообразовання (Герок, 1963; Кнауфф и сотр., 1964). Однако содержание мочевины при ин­фекционном гепатите, как правило, не изменяется (А. Л. Михнев, 1950; Мадьяр, 1962).

Некоторое накопление глицина могло наступить в результате нарушения про­цесса образования парных соединений, который связан с расходом данной аминокис­лоты (Герок, 1963).

Снижение глютаминовой кислоты, как и повышение аспарагиновой кислоты и ала­нина, по-видимому, свидетельствует о нарушении процесса переаминирования (Ибер и сотр., 1957). Снижение глютаминовой кислоты при заболеваниях печени может частич­но зависеть от нарушения синтеза ее из альфа-кетоглютаровой кислоты (Кнауфф и сотр., 1960). Приходится также учитывать возможность перехода глютаминовой кислоты через гамма-полуальдегид в пролин (Герок, 1963).

Результаты работы подтвердили значение изучения аминокислотного спектра кро­ви при инфекционном гепатите в качестве дополнительного критерия оценки тяжести течения болезни.