To the method of counting blood cells in the chamber of I.T.M.O. with a Goryaev grid

Abstract

Description of the Goryaev grid. In 1935 the Leningrad Institute of Precision Mechanics and Optics mastered the production of chambers for counting blood cells. The produced chambers are made of one glass plate, built like the Burker double chamber and equipped with the original Goryaev grid). I must say that before these cameras appeared on our market, there were only cameras from the OVU Experimental Laboratory. YuZ (Odessa), cameras of poor quality, which put laboratory workers in a hopeless position.

Full Text

Описание сетки Горяева. В 1935 г. Ленинградский институт точной механики и оптики освоил производство камер для счета кровяных телец. Выпускаемые камеры сделаны из одной стеклянной пластинки, построены по типу двойной камеры Бюркера и снабжены оригинальной сеткой Горяева¹). Нужно сказать, что до появления этих камер на нашем рынке были только камеры Экспериментальной лаборатории О.В.У. ЮЗ (Одесса), камеры низкого качества, что ставило лабораторных работников в безвыходное положение.

Так как выпускаемые Ленинградским институтом камеры не снабжены описанием сетки Горяева или наставлением, как пользоваться сеткой и производить вычисления (и их нет также во всех распространенных руководствах по методике лабораторных исследований), я считаю не лишним заполнить этот пробел.

Сетка Горяева, представляющая собой расширенную сетку Предтеченского, имеет форму квадрата, каждая сторона которого равна 3 мм, а площадь сетки = 9 кв. мм.

Горизонтальными и вертикальными линиями, расположенными на расстоянии $\frac{1}{5}$ мм одна от другой, квадрат делится на 15 горизонтальных и 15 вертикальных широких полос; пересечением линий образуются большие квадраты со сторонами, равными $\frac{1}{5}$ мм и площадями в $\frac{1}{25}$ кв. мм. Следовательно, каждая полоса содержит по 15 таких квадратов. Каждая третья широкая полоса (горизонтальная и вертикальная) тремя параллельными линиями разделена на 4 узкие полоски шириной в $\frac{1}{20}$ мм. В квадратах узкие полоски образуют по 4 горизонтальных или вертикальных прямоугольника, а на местах перекреста по 16 малых квадратов. Сторона малого квадрата равна  $\frac{1}{20}$мм, а площадь = $\frac{1}{400}$кв. мм, т. е. малый квадрат сетки Горяева равен малому квадрату всех других сеток, принятому за единицу счетной поверхности при подсчете эритроцитов. Т. е. сетка Горяева так же, как и сетка Предтеченского, имеет следующие преимущества по сравнению со всеми другими распространенными сетками: 1) отсутствие в сетке двойных и тройных линий не мешает счету и не требует напряжения внимания для отстраивания от них; 2) простые и ясные границы больших квадратов с группами по 16 малых квадратов четко выделяются в поле зрения микроскопа среди образующих их и затем расходящихся перпендикулярных линий; 3) сетка имеет большую площадь для счета красных кровяных телец: во всей сетке 400 малых квадратов, общая их площадь равна 1 кв. мм, т. е. равна всей площади сетки Тома и более, чем в два раза, превышает площадь всех малых квадратов сетки Бюркера (169 малых квадратов).

1 —широкая полоса сетки. 2 - большой квадрат. 3—большой квадрат, разделенный на 16 малых квадратов (один малый квадрат заштрихован)

По сравнению с сеткой Предтеченского сетка Горяева обладает одним лишним достоинством—большей площадью (площадь сетки Предтеченского-4 кв мм.), ч о имеет большое значение при счете белых кровяных телец. И если сам Предтеченский свою сетку в комбинации с камерой Бюркера считал «наиболее удачным разрешением вопроса, каким аппаратом надо пользоваться для счета форменных элементов крови»²), то комбинация сетки Горяева с двойной камерой Бюркера является наиболее удачной, наиболее удобной из всех существующих и заслуживает самого широкого внедрения в наши лаборатории, как один из элементов рационализации лабораторной методики. Поэтому мы должны приветствовать появление камер И.Т.М.О. и выразить признательность Центральной Комиссии по стандартизации медицинских приборов при НКЗдр. СССР за ее в высшей степени удачный выбор типа камеры и сетки для снабжения медицинских лабораторий Союза. Только консерватизмом и преклонением перед «заграницей» можно объяснить тот факт, что предложенная в 1396 г. сетка Предтеченского и описанная в 1910 г. сетка Горяева не получили в свое время широкого распространения³).

 Принцип подсчета кровяных телец.

 В поле зрения микроскопа большой квадрат, разделенный на 16 маленьких.

 О—кровяные тельца, подлежащие сосчитытаванию, • - не подлежащие сосчитыванию.

Методика счета в сетке Горяева. Счет красных кровяных телец производится в больших квадратах, содержащих по 16 малых. Сосчитывают обычно не менее 5 таких квадратов, т. е., не менее 80 малых. Сосчитывание в 5 больших квадратах производится или по диагонали сетки, или в средней полосе. Если требуется подсчитать 10 квадратов, то рекомендуется производить подсчет в квадратах верхней и нижней полосы. Для подсчета 15 квадратов берутся верхняя, средняя и нижняя полосы, для 20—все полосы, кроме средней. Само собой разумеется, что речь идет о полосах, разделенных на узкие полоски. Самое сосчитывание лучше производить не в каждом малом квадрате по отдельности, а по группам из 4 таких квадратов, расположенным в 4 ряда: сначала сосчитывается верхний ряд слева направо, затем второй справа налево, третий—слева направо, четвертый—справа налево. При подсчитывании эритроцитов, расположившихся на линиях сетки, мы пользуемся принципом касания, рекомендованным Егоровым, как наиболее простым и объективным.

Результаты сосчитывания эритроцитов записываются или отдельно для каждого ряда, или при непрерывном счете сразу для всех 16 квадратов.

Вычисление производится по формуле:

$Е=\frac{е.400.200.10}{80}=е.10000$

Е—число эритроцитов в 1 кб. мм исследуемой крови (искомая величина);

е—число эритроцитов, сосчитанных в 80 малых квадратах;

1/400 кв. мм—площадь малого квадрата;

1/200—степень разведения крови;

1/10мм—глубина камеры или толщина слоя жидкости, в котором производился подсчет.

Практически, для получения числа эритроцитов в 1 кб. мм исследуемой крови при подсчете в 80 малых квадратах и разведении крови 1:200 достаточно к полученной цифре приписать справа четыре нуля (т. е. умножить ее на 10000). Напр., в 80 малых квадратах сосчитано 497 эритроцитов, содержание эритроцитов в 1 кб. мм исследуемой крови =4 970 000. При подсчете белых кровяных телец мы пользуемся широкими полосами, причем, как правило, за единицу счетной поверхности берем не отдельный квадрат, а целую полосу во всю ширину сетки» (ширина полосы=1/5 мм., длина полосы ширине сетки=3мм площадь—3/5 кв. мм). Таких полос подсчитывается не менее 10 в случае лейкопении подсчитываются все 15 полос или даже наполняются обе камеры и подсчитываются обе сетки. В тех случаях, когда подсчет ограничивается 10 полосами, удобнее пользоваться пятью парами полос, не разделенных на узкие полоски» Только в случаях с большим содержанием белых телец (большой реактивный лейкоцитоз, лейкемический состав крови) сосчитывание производится по отдельным квадратам или группам квадратов.

В течение подсчета полосы непрерывно передвигаются под линзой микроскопа. Для ускорения подсчет производится зигзагообразно: первая полоса сосчитывается слева направо, вторая—справа налево и т. д.

Вычисление содержания белых кровяных телец производится по формуле:

$L=\frac{1*10*10}{9}=\frac{1*100}{9}$ - для всей сетки (15 полос = 9 кв.м)

для 2/3 сетки (10 полос = 6 кв.м): $L=\frac{1*100}{6}$

для 1/3 сетки (5 полос = 3 кв.м): $L=\frac{1*100}{3}$

L — число белых кровяных телец в 1 кб. мм. исследуемой крови (искомое);

1 — число белых кровяных телец сосчитанное в 15 (10,5) полосах 1 : 10—степень разведения крови;

¹/10—глубина камеры.

Сосчитывание в камере лучше всего производить, пользуясь объективами: 5 и 5 Леитца, D (40^x Цейсса, 6Ь Рейхерта, 40^x советского производства и окуляром 11 (5^x). При отсутстрии указанных объективов, а также во избежание раздавливания дорогих шлифованных покровных стекол для камер (равным образом при пользовании еще более толстыми покровными стеклами) можно рекомендовать слабые объективы (с большим рабочим расстояние; наир., очень удобны 20^х советские объективы и 10 окуляры; при меньших увеличениях объективов (16^х, 10^х) следует брать более сильные окуляры (увеличение должно быть не менее 200).

В заключение позволю себе выразить уверенность, что описание камеры Бюркера с сеткой Горяева (камеры ИТМО) и пользования ею войдет в новые издания всех советских руководств по методике клинического лабораторного исследования, а самая камера получит общее признание и широкое распространение в лабораториях Союза.

¹) Кроме оригинальной сетки Горяева известна еще сетка Горяева-Паппенгейма представляющая редуцированную сетку Горяева.

²) В. Е. Предтеченский. Руководство к клинической микроскопии. 4-е издание. 1913, стр. 76.

³ ) Сетка Предтеченского в комбинации с камерой Тома известна под названием камеры Габричевского в комбинации с камерой Бюркера как камера Ключарева.