Preparation and use of saponin for blood tests for cancer cells
- Authors: Starostin A.P.1
-
Affiliations:
- Department of Surgery and Oncology at Kazan State Pedagogical University named after V.I. Lenin on the basis of the 5th city hospital
- Issue: Vol 45, No 6 (1964)
- Pages: 87-88
- Section: Articles
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/57364
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj57364
- ID: 57364
Cite item
Full Text
Abstract
A blood test for tumor cells in patients with malignant neoplasms is of certain importance for clarifying the diagnosis, assessing the effectiveness of various methods of treatment, and the radical nature of the operation. Theoretical questions are also of interest - the fate of tumor complexes and individual cells rejected from the tumor, their viability, and the ways of their spread.
Keywords
Full Text
Исследование крови на опухолевые клетки у больных злокачественными новообразованиями имеет определенное значение для уточнения диагноза, оценки эффективности различных методов лечения, радикальности проведенной операции. Представляют интерес и теоретические вопросы — судьба отторгшихся от опухоли опухолевых комплексов и отдельных клеток, их жизнеспособность, пути их распространения.
Метод выделения опухолевых клеток из крови должен удовлетворять следующим требованиям: простота и точность в работе, дешевизна и доступность реактивов и аппаратуры.
Из всех методов, употребляемых в настоящее время для элиминации опухолевых клеток из крови, наиболее простыми являются два метода: флотационный и основанный на гемолизе. Для первого необходимо иметь индифферентную жидкость определенного удельного веса. Исходя из того, что удельный вес эритроцитов колеблется в пределах 1,092—1,097, лейкоцитов 1,07—1,08, а раковых клеток в среднем 1,05—1,06 (6, 10, И, 14), выбирают жидкость с удельным весом 1,065—1,075. Для этой цели употребляют альбумин (9), силикон (12). декстран (10). Более легкие опухолевые клетки собираются в верхнем слое. Ни альбумин и декстран определенного удельного веса трудно готовить, а силикон с удельным весом больше 1,0 отечественной промышленностью не вырабатывается.
При использовании метода гемолиза в настоящее время применяют стрептолизин 0, стрептолизин S или сапонин (5, 7, 11, 15). Все эти препараты импортные.
Анализ литературы показывает, что существует несколько методов приготовления сапонина, некоторые из них просты и дают большой процент выхода действующих начал. Сапонин, вернее сапонины, содержится во многих растениях. К настоящему времени известно около 1000 сапониноносных растений. Содержание сапонинов колеблется от следов до 50%. Сапонины —безазотистые вещества глюкозидной природы (2), большинство их является производными тритерпенов, однако некоторые имеют стероидное строение (3).
На кровь in vitro сапонины действуют даже в больших разведениях гемолитическим образом (2, 8). Экспериментальные работы показали, что при использовании сапонина как гемолитического агента в первую очередь разрушаются эритроциты, затем лейкоциты, лимфоциты и уже в последнюю очередь — опухолевые клетки, так как они наиболее резистентны к действию сапонина (5, 11, 15). В основе механизма гемолитического действия сапонинов лежит свойство их соединяться с липоидами клеток крови (3). Гемолитический индекс свыше 1500 обнаружен у следующих растений: калужница перепончатая, воронец красноплодный, марь остистая, ломонос шестилепестковый, джефферсония сомнительная, девятисил японский, ломонос маньчжурский, ломонос сизый, мыльный корень (2, 3). У некоторых же (качим метельчатый, первоцвет, синюха лазурная) гемолитический индекс колеблется от 50 000 до 100 000 (3, 4).
Сырьем для сапонина может явиться любое из названных выше растений. Мы пользовались мыльным корнем, который применяется на меховых производствах. Приводим описание двух наиболее простых и эффективных способов получения сапонина:
- Крупный порошок мыльного корня обрабатывается кипящим 95% этиловым спиртом, в горячем виде процеживается и оставляется на несколько суток при температуре -J- 10°. Образовавшийся осадок промывается холодным безводным спиртом эфиром и высушивается в теплом месте.
- Измельченное сырье экстрагируют в аппарате Сакслета (объем 150—300 мл) метиловым спиртом в течение 16—20 часов. Затем растворитель отгоняют до 40— 50 мл. Остаток переносят в колбу емкостью 300 мл и туда же добавляют 200 мл эфира (осаждение сапонинов). Колбу закрывают корковой пробкой и содержимое перемешивают, после чего оставляют на холоде до следующего дня. Жидкость сливают, остаток эфира удаляют или в вакууме, или на водяной бане при температуре около 50°, осадок сушат при 100—105°.
При обоих способах получается аморфный порошок светло-желтого цвета, растворимый в воде и дающий при взбалтывании пену.
Был испытан метод выделения опухолевых клеток, основанный на гемолизе эритроцитов при помощи 1% раствора порошка, полученного из мыльного корня. На исследование брали кровь пациента из вены локтевого сгиба. 1% раствор сапонина добавляли из расчета 0,4 мл на 1 мл осадка после центрифугирования. Смесь выдерживали 5 мин, вновь центрифугировали, жидкость над осадком отсасывали, осадок промывали 0,85% раствором поваренной соли, после центрифугирования осадок переносили на предметное стекло и готовили мазок. Окраску проводили по Романовскому-Гимза.
Произведено около 300 исследований крови у 184 больных различными опухолевыми заболеваниями методом гемолиза при помощи 1% раствора сапонина. При сравнении гемолитической активности импортного препарата и полученного любым из указанных выше способов мы отличия в силе действия не обнаружили.
Преимущество сапонина перед стрептолизином заключается в том, что сапонин можно применять в опытах на животных, в то время как стрептолизин не действует на кровь животных гемолитически.
About the authors
A. P. Starostin
Department of Surgery and Oncology at Kazan State Pedagogical University named after V.I. Lenin on the basis of the 5th city hospital
Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan