To the Neisser's gonococcus staining technique
- Authors: Krivosheev N.p
- Issue: Vol 18, No 2 (1922)
- Pages: 72-83
- Section: Articles
- Submitted: 09.09.2021
- Accepted: 09.09.2021
- Published: 23.09.2021
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/79871
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj79871
- ID: 79871
Cite item
Full Text
Abstract
Soon after the appearance of the first message of Neisser about gonococcus as the causative agent of gonorrhea, a number of authors (Krause, Jlirschberg, Ècklund, Gama Pinto, Sternberg, Lustgarten, Hague r, Fränkel, etc.) opposed this doctrine with complete denial virulence and specificity of this microorganism).
Keywords
Full Text
Уже вскоре после появления в свет первого сообщения Neisser’а о гонококке, как возбудителе триппера, против этого учения выступил целый ряд авторов (Krause, Jlirschberg, Ècklund, Gama Pinto, Sternberg, Lustgarten, Hague r, Fränkel и др.) с полным отрицанием вирулентности и специфичности данного микроорганизма). Причиною возникшего отсюда спора между Neisseг’ом и названными авторами отчасти являлось то обстоятельство, что тогда не умели красить гонококков, не было такого способа их обнаружения, который дифференцировал-бы их от других, похожих на них, микроорганизмов, встречающихся в здоровой уретре мужчин, во влагалище женщин, в полости рта и пр.
Только в 1886 г., когда Roux2) предложил для нахождения гонококков в мазках из выделений уретры способ Grаm’a, и когда Finger8), Allen3) и Wendt3), в 1887 году, признали за этим способом важное диагностическое значение, сомнения противников Neisser’а стали рассеиваться, и гонококки получили постепенно общее признание, как возбудители трипнерной заразы.
В настоящее время свойство гонококков обесцвечиваться по Grаm’y и окрашиваться при дополнительном окрашивании в тот или иной цвет, в зависимости от применяемой при этом краски, прочно установлено и признано всеми. В ряду этого обстоятельства и в силу того, что большинство других коков и диплококов, встречающихся в мужской уретре, по Grаm’y окрашивается, способ Grаm’a считается теперь более или менее точным и обязательным дифференциально -диагностическим приемом в распознавании триппераого заболевания. .
Как известно, процедура окраски по первоначальному методу Grаm’a слагается из следующих моментов: 1) окрашивания препарата свеже-приготовленным анилин, гляциана-виолетом (10 см3 насыщенного алкогольного раствора генциала-виблета на 10 см3 насыщенной анилиновой воды, состоящей из 4,0 анилинового масла и 100,0 дестиллированной воды,—по Ehrlich'y), 2) обработки препарата Lugol’eBCKHM раствором (1,0 jodi pari, 2,0 kalii jodatr и 300,0 aq. destill.), 3) обесцвечивания препарата абсолютным спиртом до получения стально-серого цвета (О/И. Бронштейн4), 4) промывания препарата водой и дополнительного (Rоuк2) окрашивания его эозином, сафранином, везувином, или сильно разбавленным фуксином (Steinschneidern Wertheim6).
Способ Grаm’a в оригинальном его виде для окрашивания гонококков впервые стал применять Bu mm) в 1885 году, потом Roux2), Allen’) и Wendt’), но первое систематическое исследование в этом направлении принадлежит Steinschneidет’у8), и Gа1ewsк’ому8). Эти авторы оставляли свои препараты под действием анилин-генциана-виолета на 25—30 минут; обработка препарата Lugo 1’евским раствором производилась ими в течение 8—10 минут; после каждого момента окрашивания ими обязательно производилось промывание препарата водой.
В дальнейшем выяснилось, что время потребное как для окрашивания, так и для обработки препарата раствором Lugo1’я, можно значительно сократить без ущерба для результатов; оказалось, далее, что промывание препарата водой после каждого момента окрашивания совершенно не требуется. Время окрашивания в способе G r a m'a сокращено теперь до минимума, и техника окрашивания по этому способу в настоящее время сводится (A. Wolff и Р. Мu1zег”) к следующему: тонкие, равномерно размазанные препараты, фиксированные на пламени газовой или спиртовой горелки, окрашиваются в течение одной минуты свеже-приготовленным анилин- генциапа-виолетом. Эту краску сливают и, не промывая препарата водой, обрабатывают его раствором Lugоlʹя в течение 2 — 3 минут. Далее сливают и этот раствор и затем, опять без предварительного споласкивания водой, обесцвечивают препарат абсолютным алкоголем до тек пор, пока не будет образоваться более облачка краски. Лишь после этого препарат сильно споласкиваю водой'. Далее он высушивается фильтровальной бумагой и дополнительно окрашивается в течение одной минуты или везувином, или разведенным (1/20) фуксином, каковые краски также смываются водой. В заключение препарат высушивается на воздухе, или фильтровальной бумагой, и рассматривается при помощи иммерсионной системы под микроскопом. Гноеродные кокки и большая часть Диплококков, встречающихся в уретре, окрашиваются при этом в темно-фиолетовый цвет, гонококки же и клеточные ядра, обесцветившись под влиянием спирта, воспринимают слегка-бурый или светло-красный цвет в зависимости от того, раствор какой краски применен для дополнительного окрашивания.
Способ Grаm’a при исследовании секретов на гонококки даже в том его виде, в котором время окрашивания сокращено до минимума, является все же,—в силу необходимости в каждом случае готовить (проф. Н. В. Петров10) свежий раствор анилин- генциана-виолета,—слишком громоздким, кропотливым и отнимающим много времени и материала. Отсюда понятно стремление авторов к дальнейшему усовершенствованию этого метода. Этим последним обстоятельством и можно объяснить обилие и разнообразие в способах окраски, которые описаны различными авторами в разное время для обнаружения гонококков. Можно утверждать, что ни для одного из известных в настоящее время патогенных, микробов не предложено такого большего количества, способов окраски, как для гонококков. При этом различные авторы пытались видоизменить Grаm’овский способ в том направлении, чтобы он отнимал меньше, времени при- пользовании им и не ..требовал частого приготовления свежего анилин-генцпана-виолета; и этнх видах прежде всего были сделаны попытки заменить быстро портящийся анилип-генциана-виолет другими, не Портящимися от времени, растворами.
Täs, Nicolle11) анилиновую воду заменил 1 % раствором карболовой кислоты, составляя раствор генциана-виолета так, что- на 10 см3 насыщенного раствора -этой, краски в ,95% спирте берется, 100 см3 1% раствора карболовой кислоты.
Czaplewski12) предложил свою модификацию метода Grаm’а для окрашивания гонококков, заменяя анилиновый генциава-виолет. карболовым гецциава-Виолетом по „такой цропнеи: 10 см3 крепкого алкогольного раствора этой краски, 2,5 см3 карболовой кислоты и 100 см3 дестиллированной воды. Раствор этот не портится в течение многих месяцев, почему модификация Czapiewsk ’ого и была одобрена Steinschneide г’ом1 ), Jаdаssоh п’ом33), Weinrich’ом13). и другими авторами, а Schölt z’ex14) горячо рекомендована для практических врачей. Однако широкого распространения эта модификация все же не получила, так как препараты, окрашенные этим способом, имеют (Фон-Bаль) грязный мутноватый вид, протоплазма и слизь при нем плохо обесцвечиваются, что сильно мешает быстрому и точному исследованию.
Наиболее удачная модификация метода Grаm’a для диагностики гонококков была предложена в последнее время V. lеnsеn’ом”). Известно, что в методе Gram’a анилиновая вода берется в качестве протравы для более форсированного окрашивания, причем действие протрав вообще сводится к тому, чтобы разрыхлить оболочку микробов и тем облегчить проникновение краска внутрь. Этот весьма интересный вопрос о роли протравы при окрашивании микроорганизмов по Gram’y и изучался lеnsеn’ом”), который на основании своих исследований пришел к выводу, что m методе Grаm’a можно, в качестве протравы, пользоваться карболовой кислотой, или даже вовсе обходиться без протравы, ибо большинство G г а m-отрицательных бактерий весьма хромофильно и быстро воспринимает краску даже из слабых ее растворов.
Основываясь на этом свойстве бактерий и принимая во внимание, что анилиновая вода—вовсе не необходимый аттрнбут при окрашивании, бактерий по способу Gram’a, lensen и предложил свою модификацию метода G г а m’a для окрашивания гонококков. Необходимыми реагентами здесь являются: 1) ½% водный раствор уметил-виолета, 2)водный раствор иод-иодистоѵо калия в пропорции: jodi puri 1,0, kalii jodati 2,0, aq. destillätae 100,0, 8) абсолютный или по крайней мере 99% алкоголь и 4) Neu- tralroth в 1% водном растворе для дополнительного окрашивания.
Техника окрашивания по Tensen’y сводится к следующему: сделанные мазки предварительно высушиваются па воздухе, затем осторожно фиксируются на пламени газовой или спиртовой горелки.
После фиксирования,-—подчеркивает автор,—до охлаждения препарата наливать на него краску нельзя; только по. охлаждении на него наливается на ½—1 минуту несколько капель ½ % водного раствора метил-виолета. Эта краска потом сливается, а излишек ее смывается несколькими каплями раствора йод-йодистого калия. После этого па препарат снова наливается несколько капель раствора йод-йодпетого -калия, и оставляется действовать на минуту. Далее препарат споласкивается спиртом и обесцвечивается абсолютным алкоголем, после чего промывается еще несколькими каплями чистого спирта, и на влажный еще мазок наносятся 2—3 капли 1% раствора Neutra Jroth’a на ¼— ½ мин. Краска эта смывается водопроводной водой, препарат высушивается или на воздухе, или фильтровальной бумагой, и рассматривается под микроскопом. При этом гонококки представляются в виде светло-красных образований; ядра клеточных элементов лейкоцитов и эпителиальных клеток) и слизь окрашиваются также в светло-красный цвет, протоплазма же лейкоцитов и эпителиальных клеток окрашивается лишь слегка в слабо-заметный розоватый цвет; что касается микроорганизмов, красящихся по Grаm’у, они представляются , окрашенными в тёмно-фиолетовой, почти черный цвет, микробы же Grаm-отрицательные принимают такой же светло-красный цвет, в какой, окрашиваются гонококки и ядра клеточных элементов.
Способ Iеnsеn’а, не уступая в своей надежности оригинальному методу Grаm’a и имея пред ним такие преимущества, как быстрота окраски, легкость выполнения ее, свойство реагентов не портиться от времени,—представляет значительный шаг вперед в развитии бактериологической техники окрашивания гонококков. В настоящее время эта модификация получила весьма широкое распространение в деле распознавания трапперного воспаления уретры. Тем не менее и она не лишена некоторых недостатков, которые несколько умаляют ее значение.
Одним из таких недостатков данной модификации является отсутствие контрастности окраски гонококков по сравнению с фоном препарата. Все части препарата—и ядра клеточных элементов, и слизь, и гонококки—окрашиваются при этом способе в одинаковый светло-красный цвет. Эго обстоятельство весьма сильно мешает быстрому нахождению гонококков в препарате. Вторым недостатком модификации lensen’a ’является то, что все Grаm отрицательные микроорганизмы окрашиваются при дополнительном окрашивании Neutralroth’oM в одинаковый светло-красный цвет. В силу этого обстоятельства отличить гонококков от других диплококков, не красящихся по Grаm’y, по цвету совершенно не представляется возможным, особенно в мазках из выделений мочеиспускательного канала, где имеется несколько видов [по Fоulеrtоn’у’7) —5 видов, по Таnо”)—даже 7 обесцвечивающихся по Grаm’y диплококков и кокков, которые способом Grаm’a и его модификацией по Iеnsеn’у окрашиваются в такой же светло-красный цвет, какой воспринимают и гонококки, но ничего общего, в смысле специфичности, с последними не имеют, хотя своей формой и величиной весьма близко к ним подходят.
Таким образом пи оригинальный метод Grаm’a, ни его лучшая модификация по lensen’у не являются верным орудием в деле микроскопического распознавания гонорреи. Спрашивается, каким же требованиям должен удовлетворять тот надежный способ окраска для обнаружения гонококков, к которому авторы стремятся, уже давно?
Этот способ, конечно, должен прежде всего: 1) окрашивать, гонококков в один цвет, а всех других .уретральных микроорганизмов, Grаm-положительных и Grаm-отрицательных,—в другой; 2) он должен давать отчетливую избирательную окраску различных элементов, исследуемого секрета и в частности окрашивать, гонококков в цвет контрастный .сравнительно с цветом фона из ядер форменных элементов и слизи, наконец, 3) он должен иметь достоинства метода lensôn'a: быстроту окрашивания, легкость выполнения окраски, свойство реагентов не портиться от времени.
Стремясь достигнуть этой цели, я с начала весны 1921 года начал, в лаборатории клиники проф. В. Ф, Бургсдорфа, испытывать для окраски гонококков различные красящие вещества в разных их концентрациях, причем порядок окрашивания Grаm’овского метода, как метода для гонококков дифференциального, мною не нарушался. После довольно продолжительной работы мне удалось подойти к такому изменению этого метода, которое дает весьма демонстративные препараты и, что особенно ценно, позволяет дифференцировать гонококков по цвету от многих других обесцвечивающихся по Grаm’y микроорганизмов,—палочек, кокков и диплококков,—встречающихся в уретре и на различных воспаленных и загрязненных частях человеческого тела.
Вот те реагенты, которые нужны для моей модификации: 1) раствор генциана-виолета для первоначального окрашивания препарата по прописи-—gentiana-violett 1,0, alcohol absolut. 10,0, sol. ас. carbol, puriss. 1% 100,0; 2) раствор иод-иодистого калия по прописи—jôdi purl 1,0, kalii jodati 2,0, aq. destillatae 50,0, 3) абсолютный или обыкновенный продажный чистый спирт 95% крепости и, наконец 4) краска Unnа-Раррenliеïm’a (пиронин и Méthylgrün.) ля дополнительного окрашивания.
Надо заметить, что генциана-виолет в растворе карболовой кислоты в иной несколько прописи, как уже отмечено выше, был предложен для Grаm’овского метода окраски гонококков Nicollе’ем и Czaplewskі’м, по краска Czaplewsk’ого, как я уже указал, дает, по наблюдениям Фон-Валя, мутные, грязные препараты, что обусловливается, по-видимому, большим содержанием в растворе генциана-виолета Карболовой кислоты (ВД.)-
Взятый, мною более концентрированный раствор йод-йодистого калия (1:2:50,0), чем это берется для - оригинального метода Grаm’a (1:2:300,0), сильно сокращает время обработки препарата. Оказывается, бывает достаточно лишь смыть им краску с препарата и тотчас же после того начать обесцвечивание спиртом,— за это короткое время раствор уже успевает создавать в телах микробов, красящихся по Grаm’y, такие условия, что они при дальнейшей обработке препарата спиртом не отдают своей краски. Между тем при Iensеn’овском растворе (1:2:100,0) подобный эффект получается не раньше, как через 1 минуту, а оригинальный раствор Lugol’a (1:2:300,0) дает его лишь через 3 мин.
Что касается теперь спирта, то абсолютный спирт производит обесцвечивание быстрее, чем 95%, по картины препарата не изменяет.
Краска Unnа-Раррenheim’a которую я предлагаю для дополнительного окрашивания препаратов, предложена для окраски гонококков одновременно и независимо друг от друга Unna-—для срезов и Pappen11еіt’ом—для мазков. Препараты, окрашенные этой смесью, очень красивы и весьма демонстративны: гонококки окрашиваются при этом в тёмно-красный цвет, протоплазма клеток—в розовый, ядра гнойных клеток—в светло-зелёный, эпителиальные клетки—в тёмно-розовый цвет, а ядра эпителия—в сине-фиолетовый (E. Finger).
В предлагаемой мною модификации для получения отчетливых препаратов необходимо прежде всего, чтобы исследуемый секрет был распределен на предметных стеклах равномерно, тонким слоем. Сделанные мазки высушиваются на воздухе и. фиксируются обычным образом на пламени газовой пли спиртовой горелки. Фиксирование нужно производить осторожно, не перегревая препарата, чтобы не ослабить способности гонококков быстро вое принимать краску. ‘
После фиксирования, выждав охлаждения препарата (в случаях, когда краска наливается на теплый еще препарат, обесцвечивание спиртом идет медленно, и на препарате часто остается %садок от краски), приступаем к окраске, для чего прежде всего наливаем на препарат 2—3 капли карболового раствора генциана виолета и держим его 1/4— ½ минуты. Этот раствор сливаем и часть его, приставшую к препарату, смываем несколькими каплями раствора йод-йодистого калия (1:2:50,0), держа препарат под некоторым углом к горизонтальной плоскости, чтобы жидкость свободно стекала с него. Далее опять наливаем на препарат несколько капель раствора йод-йодистого калия и оставляем его действовать на ¼—⅓ минуты после чего сливаем и этот раствор и остатки его смываем несколькими каплями чистого 95% resP- абсолютного s спирта. Затем наливаем на препарат несколько капель этого же спирта и, покачивая стекло, чтобы спирт переливался на поверхности мазка, производим обесцвечивание последнего до стально- серого цвета. Чтобы достигнуть этого, иногда,—именно, в случаях, когда мазки сделаны из слизисто-гнойной массы,—приходится 1—2 раза сливать спирт, с препарата, и снова наливать. После того мы споласкиваем препарат водой, высушиваем его фильтровальной бумагой и докрашиваем краской Unnа-Рарреuhеim’a в течение ½ минуты, потом смываем эту краску водой, высушиваем препарат фильтровальной бумагой, наносим на него каплю кедрового масла и последуем при помощи иммерсионной системы микроскопа.
В общем итоге, значит, вся процедура окрашивания сводится у нас к такой схеме: 1) намазывание исследуемого секрета тонким слоем на предметное стекло, 2) высушивание мазка на воздухе, 3) осторожное фиксирование на пламени горелки, 4) окрашивание карболовым раствором генциана-виолета в течение ¼—1/2 минуты, 5) споласкивание раствором йод-йодистого калия (1:2:50,0), 6) нанесение на препарат нескольких капель раствора йод-йодистого калия па 1/4—1/2 минуты, 7) смывание раствора, йод-йодистого калия чистым 95% или абсолютным спиртом, 8) обесцвечивание чистым 95% или абсолютным спиртом, 9) споласкивание препарата водопроводной водой, 10) окрашивание смесью Unna-Paрpenheim’a в течение 1/2 минуты, 11) споласкивание водой и высушивание фильтровальной бумагой.
При этом подчеркиваю, что, если после обесцвечивания спирт удален с препарата не полностью, то при дополнительном окрашивании препарата смесью Unna-Pappenheim’a гонококки могут не. окраситься, а если и окрасятся при более продолжительном действии этой смеси, то в неясный, мутно-розовый цвет. Во избежание этого следует после обесцвечивания смывать спирт с препарата водой.
Необходимо также иметь в виду, что при дополнительном окрашивании препаратов продолжительное (2—3 минуты) действие смеси Unnа-Рappenheim’a перекрашивает препараты и дает менее демонстративные картины их. Лучшие картины получаются при действии смеси на препарат в течение ½ минуты
Кстати отмечу здесь еще и то, что препараты, сделанные из слизисто-гнойной массы, где над гноем преобладает слизь, долины окрашиваться карболовым раствором генциана-виолета не менее одной минуты. Иначе может случиться, что Grаm-положительные микроорганизмы, располагающиеся в массе слизи, вовсе не окрасятся (это происходит благодаря тому, что слизь слишком жадно воспринимает краску), В подобных случаях указанные микроорганизмы при дополнительном окрашивании воспринимают из смеси Unna-Pappenheim’a красный цвет пиронина.
Что касается теперь картины препаратов, окрашенных по предлагаемой мною модификация, то здесь мы прежде всего должны отметить элективность окраска форменных «элементов и контрастность окраски гонококков сравнительно с общим фоном препарата. Рассматривая препарат, окрашенный, этим способом, мы видим в нем разнообразные оттенка двух цветом—фиолетового и розового. В частности, ядра гнойных клеток представляются окрашенными в фиолетовый цвет, а их протоплазма кажется слегка розоватой с сероватым оттенком; ядра эпителиальных клеток принимают фиолетовый цвет с некоторым розоватым оттенком, протоплазма же их, восприняв нежно-розовый цвет, s представляется в виде резко очерченного- красивого ореола; Grаm-положительные микроорганизмы, не отдавшие при обесцвечивании' своей первоначальной окраски, имеют темно-фиолетовый, иногда почти черный цвет; наконец, гонококки, восприняв из смеси Unnа - Pарреnhеim’a красный цвет пиронина, представляются окрашенными в насыщенно-малиновый цвет, резко выступая на общем фиолетовом фоне ядер лейкоцитов.
Отметим еще теперь отношение данного способа окраски к бактериям, не красящимся по Grаm’y. Отношение это весьма своеобразно: Grаm-отрицательные микроорганизмы при дополнительном окраіпивании смесью Unna-Pappenheim’a, окрасившись пиронином смеси в розоватый цвет, воспринимают также,– по-видимому, и небольшую часть Methylgrûn’a, в силу чего они представляются окрашенными в розоватый цвет с оттенком или сероватым, или синеватым—в зависимости от вида микроорганизмов; так, кокки и диплококки имеют обычно бледно-розовый цвет с синеватым оттенком, бациллы-же представляются розоватыми с сероватым оттенком.
Испытывая свою модификацию метода Grаm’a, я имел в своем распоряжении довольно большой материал, для исследования: число обследованных мною препаратов, сделанных из выделений больной уретры, достигает 470, причем во всех этих препаратах гонококки неизменно представлялись окрашенными в насыщенно- малиновый цвет. В течение почти 5 месяцев работы мне не удалось найти никаких других Grаm-отрицательных микроорганизмов, которые тоже воспринимали-бы, этот характерный для гонококков цвет,—ни в уретральных секретах мужчин, ни во влагалищных выделениях женщин, ни в полости рта, ни в различных воспаленных, загрязненных, с гнойным отделением частях тела больных, обращавшихся в клинику. Я пробовал, да. ее, окрашивать мазки из культур некоторых видов Grаm-отрицательных палочек, в различные дни их существования, и во всех таких препаратах, - число которых равнялось 245,—можно было констатировать, что находившиеся в них микроорганизмы окрашивались в розоватый цвет с оттенком или сероватым, или синеватым. Таким образом предлагаемая мною модификация метода Grаm’a, окрашивая гонококков в насыщенно-малиновый цвет, обособляет их от других, не красящихся по Grаm’y, микроорганизмов уретры.
Испытывая свою модификацию, я вместе с тем производил сравнительную оценку ее по отношению к способу lensen’a, 5 представляющему лучшее видоизменение метода Grama. Оценка эта производилась мною с 2 точек зрения: 1) с точки зрения а кости и быстроты нахождения гонококков в препаратах и 2) с точки зрения надежности распознавания гонококков.
Выгоды предлагаемой мною модификации в смысле более быстрого и легкого нахождения гонококков в препаратах не замедлили сказаться уже при первых же исследованиях больных. Уже в первых случаях исследования, как и во всех остальных, можно было заметить, что гонококки обнаруживались быстрее в препаратах, окрашенных по предлагаемой мною модификации, чем в препаратах, окрашенных по lensen’у. И это вполне понятно: при lensen’овской окраске на красном фоне ядер форменных элементов, а иногда и слизи, часто бывает трудно уловить в такой же цвет окрашенных гонококков; нужно медленно двигать препарат под микроскопом и внимательно рассматривать каждое поле зрения, чтобы не оставить незамеченными группирующихся у ядер лейкоцитов возбудителей гонореи, и на это иногда уходит немало времени. В препаратах же, окрашенных по предлагаемой мною модификации, гонококки, имея насыщенно-малиновый цвет, резко выступают на общем фиолетовом фоне ядер форменных элементов; в силу этого обстоятельства можно двигать препарат под микроскопом довольно быстро, без риска пропустить незамеченными попадающихся в поле зрения гонококков.
Что касается теперь вопроса о надежности предлагаемой модификации в деле распознавания гонорреи, то на основании исследованных случаев я могу установить, что этот способ по надежности и точности распознавании Гонококков нисколько не уступает методу lensen’а: во всех случаях, мною исследованных, получалась полное тождество результатов.
Итак, резюмируя все сказанное, мы находим, что предлагаемая мною модификация G г а mа’овского метода для окраски гонококков, имея все достоинства модификации Iеusen’а. а именно, а) быстроту окраски, б) легкость выполнения ее, в) свойство реагентов не портиться от времени, г) надежность способа в смысле точного распознавания гонококков,—дает еще: 1) избирательность окраски форменных элементов исследуемого секрета, 2) контрастность окраски гонококков по сравнению с общим фоном препарата и,, наконец, 3) дифференцировку гонококков от других, не красящихся по G г а m’у. микроорганизмов уретры, что дает возможность быстро и легко ориентироваться в микробной флоре исследуемого секрета. В заключение считаю своим приятным долгом принести искреннюю благодарность моему глубокоуважаемому учителю, профессору Владимиру Федоровичу Бургсдорфу, за ценные указания и советы при выполнении этой работы.
About the authors
N. p Krivosheev
Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation
References
Supplementary files
![](/img/style/loading.gif)