To the Neisser's gonococcus staining technique

Abstract

Soon after the appearance of the first message of Neisser about gonococcus as the causative agent of gonorrhea, a number of authors (Krause, Jlirschberg, Ècklund, Gama Pinto, Sternberg, Lustgarten, Hague r, Fränkel, etc.) opposed this doctrine with complete denial virulence and specificity of this microorganism).

Full Text

Уже вскоре после появления в свет первого сообщения Neisser’а о гонококке, как возбудителе триппера, против этого учения выступил целый ряд авторов (Krause, Jlirschberg, Ècklund, Gama Pinto, Sternberg, Lustgarten, Hague r, Fränkel и др.) с полным отрицанием вирулентно­сти и специфичности данного микроорганизма). Причиною возник­шего отсюда спора между Neisseг’ом и названными авторами отчасти являлось то обстоятельство, что тогда не умели красить гонококков, не было такого способа их обнаружения, который диф­ференцировал-бы их от других, похожих на них, микроорганиз­мов, встречающихся в здоровой уретре мужчин, во влагалище жен­щин, в полости рта и пр.

Только в 1886 г., когда Roux2) предложил для нахожде­ния гонококков в мазках из выделений уретры способ Grаm’a, и когда Finger8), Allen3) и Wendt3), в 1887 году, признали за этим способом важное диагностическое значение, со­мнения противников Neisser’а стали рассеиваться, и гонококки получили постепенно общее признание, как возбудители трипнерной заразы.                                                  

В настоящее время свойство гонококков обесцвечиваться по Grаm’y и окрашиваться при дополнительном окрашивании в тот или иной цвет, в зависимости от применяемой при этом краски, прочно установлено и признано всеми. В ряду этого обстоятельства и в силу того, что большинство других коков и диплококов, встречающихся в мужской уретре, по Grаm’y окрашивается, спо­соб Grаm’a считается  теперь более или менее точным и обяза­тельным дифференциально -диагностическим приемом в распознавании триппераого заболевания.                                       .

Как известно, процедура окраски по первоначальному методу Grаm’a слагается из следующих моментов: 1) окрашивания пре­парата свеже-приготовленным анилин, гляциана-виолетом (10 см³ насыщенного алкогольного раствора генциала-виблета на 10 см³ на­сыщенной анилиновой воды, состоящей из 4,0 анилинового масла и 100,0 дестиллированной воды,—по Ehrlich'y), 2) обработки препарата Lugol’eBCKHM раствором (1,0 jodi pari, 2,0 kalii jodatr и 300,0 aq. destill.), 3) обесцвечивания препарата абсолют­ным спиртом до получения стально-серого цвета (О/И. Брон­штейн4), 4) промывания препарата водой и дополнительного (Rоuк2) окрашивания его эозином, сафранином, везувином, или сильно разбавленным фуксином (Steinschneidern Wer­theim6).     

Способ Grаm’a в оригинальном его виде для окрашивания гонококков впервые стал применять Bu mm) в 1885 году, потом Roux2), Allen’) и Wendt’), но первое систематическое иссле­дование в этом направлении принадлежит Steinschneidет’у8), и Gа1ewsк’ому8). Эти авторы оставляли свои препараты под действием анилин-генциана-виолета на 25—30 минут; обработка препарата Lugo 1’евским раствором производилась ими в течение 8—10 минут; после каждого момента окрашивания ими обязатель­но производилось промывание препарата водой.

В дальнейшем выяснилось, что время потребное как для ок­рашивания, так и для обработки препарата раствором Lugo1’я, можно значительно сократить без ущерба для результатов; оказалось, далее, что промывание препарата водой после каждого момента окрашивания совершенно не требуется. Время окрашивания в спо­собе G r a m'a сокращено теперь до минимума, и техника окраши­вания по этому способу в настоящее время сводится (A. Wolff и Р. Мu1zег”) к следующему: тонкие, равномерно размазанные препараты, фиксированные на пламени газовой или спиртовой го­релки, окрашиваются в течение одной минуты свеже-приготовленным анилин- генциапа-виолетом. Эту краску сливают и, не промы­вая препарата водой, обрабатывают его раствором Lugоlʹя в те­чение 2 — 3 минут. Далее сливают и этот раствор и затем, опять без предварительного споласкивания водой, обесцвечивают препарат абсолютным алкоголем до тек пор, пока не будет образоваться более облачка краски. Лишь после этого препарат сильно споласкиваю водой'. Далее он высушивается фильтровальной бумагой и дополни­тельно окрашивается в течение одной минуты или везувином, или разведенным (1/20) фуксином, каковые краски также смываются водой. В заключение препарат высушивается на воздухе, или филь­тровальной бумагой, и рассматривается при помощи иммерсионной системы под микроскопом. Гноеродные кокки и большая часть Диплококков, встречающихся в уретре, окрашиваются при этом в темно-фиолетовый цвет, гонококки же и клеточные ядра, обесцве­тившись под влиянием спирта, воспринимают слегка-бурый или светло-красный цвет в зависимости от того, раствор какой краски применен для дополнительного окрашивания.

Способ Grаm’a при исследовании секретов на гонококки даже в том его виде, в котором время окрашивания сокращено до минимума, является все же,—в силу необходимости в каждом слу­чае готовить (проф. Н. В. Петров10) свежий раствор анилин- генциана-виолета,—слишком громоздким, кропотливым и отнима­ющим много времени и материала. Отсюда понятно стремление авторов к дальнейшему усовершенствованию этого метода. Этим последним обстоятельством и можно объяснить обилие и разнообразие в способах окраски, которые описаны различными авторами в разное время для обнаружения гонококков. Можно утверждать, что ни для одного из известных в настоящее время патогенных, микробов не предложено такого большего количества, способов окраски, как для гонококков. При этом различные авторы пытались видо­изменить Grаm’овский способ в том направлении, чтобы он отни­мал меньше, времени при- пользовании им и не ..требовал частого приготовления свежего анилин-генцпана-виолета; и этнх видах прежде всего были сделаны попытки заменить быстро портящийся анилип-генциана-виолет другими, не Портящимися от времени, ра­створами.                                

Täs, Nicolle11) анилиновую воду заменил 1 % раствором карболовой кислоты, составляя раствор генциана-виолета так, что- на 10 см3 насыщенного раствора -этой, краски в ,95% спирте бе­рется, 100 см3 1% раствора карболовой кислоты.

Czaplewski12) предложил свою модификацию метода Grаm’а для окрашивания гонококков, заменяя анилиновый генциава-виолет. карболовым гецциава-Виолетом по „такой цропнеи: 10 см3 крепкого алкогольного раствора этой краски, 2,5 см3 кар­боловой кислоты и 100 см3 дестиллированной воды. Раствор этот не портится в течение многих месяцев, почему модификация Czapiewsk ’ого и была одобрена Steinschneide г’ом1 ), Jаdаssоh п’ом33), Weinrich’ом13). и другими авторами, а Schölt z’ex14) горячо рекомендована для практических врачей. Однако широкого распространения эта модификация все же не по­лучила, так как препараты, окрашенные этим способом, имеют (Фон-Bаль) грязный мутноватый вид, протоплазма и слизь при нем плохо обесцвечиваются, что сильно мешает быстрому и точному исследованию.

Наиболее удачная модификация метода Grаm’a для диаг­ностики гонококков была предложена в последнее время V. lеnsеn’ом”). Известно, что в методе Gram’a анилиновая вода бе­рется в качестве протравы для более форсированного окрашивания, причем действие протрав вообще сводится к тому, чтобы разрых­лить оболочку микробов и тем облегчить проникновение краска внутрь. Этот весьма интересный вопрос о роли протравы при ок­рашивании микроорганизмов по Gram’y и изучался lеnsеn’ом”), который на основании своих исследований пришел к выводу, что m методе Grаm’a можно, в качестве протравы, пользоваться кар­боловой кислотой, или даже вовсе обходиться без протравы, ибо большинство G г а m-отрицательных бактерий весьма хромофильно и быстро воспринимает краску даже из слабых ее растворов.

Основываясь на этом свойстве бактерий и принимая во вни­мание, что анилиновая вода—вовсе не необходимый аттрнбут при окрашивании, бактерий по способу Gram’a, lensen и предло­жил свою модификацию метода G г а m’a для окрашивания гоно­кокков. Необходимыми реагентами здесь являются: 1) ½% водный раствор уметил-виолета, 2)водный раствор иод-иодистоѵо калия в пропорции: jodi puri 1,0, kalii jodati 2,0, aq. destillätae 100,0, 8) абсолютный или по крайней мере 99% алкоголь и 4) Neu- tralroth в 1% водном растворе для дополнительного окрашивания.

Техника окрашивания по Tensen’y сводится к следующему: сделанные мазки предварительно высушиваются па воздухе, затем осторожно фиксируются на пламени газовой или спиртовой горелки.

После фиксирования,-—подчеркивает автор,—до охлаждения пре­парата наливать на него краску нельзя; только по. охлаждении на него наливается на ½—1 минуту несколько капель ½ % водного раствора метил-виолета. Эта краска потом сливается, а излишек ее  смывается несколькими каплями раствора йод-йодистого калия. После этого па препарат снова наливается несколько капель раствора йод-йодпетого -калия, и оставляется действовать на минуту. Далее препарат споласкивается спиртом и обесцвечивается абсолютным алкоголем, после чего промывается еще несколькими каплями чистого спирта, и на влажный еще мазок наносятся 2—3 капли 1% раствора Neutra Jroth’a на  ¼— ½ мин. Краска эта смывается водопроводной водой, препарат высушивается или на воздухе, или фильтровальной бумагой, и рассматривается под ми­кроскопом. При этом гонококки представляются в виде светло-крас­ных образований; ядра клеточных элементов лейкоцитов и эпите­лиальных клеток) и слизь окрашиваются также в светло-красный цвет, протоплазма же лейкоцитов и эпителиальных клеток окраши­вается лишь слегка в слабо-заметный розоватый цвет; что касается микроорганизмов, красящихся по Grаm’у,  они представляются , окрашенными в тёмно-фиолетовой, почти черный цвет, микробы же Grаm-отрицательные принимают такой же светло-красный цвет, в какой, окрашиваются гонококки и ядра клеточных элементов.

Способ Iеnsеn’а, не уступая в своей надежности оригинальному методу Grаm’a и имея пред ним такие преимущества, как быстрота окраски, легкость выполнения ее, свойство реагентов не портиться от времени,—представляет значительный шаг вперед в развитии бактериологической техники окрашивания гонококков. В настоящее время эта модификация получила весьма широкое рас­пространение в деле распознавания трапперного воспаления уретры. Тем не менее и она не лишена некоторых недостатков, которые несколько умаляют ее значение.

Одним из таких недостатков данной модификации является от­сутствие контрастности окраски гонококков по сравнению с фоном препарата. Все части препарата—и ядра клеточных элементов, и слизь, и гонококки—окрашиваются при этом способе в одинаковый светло-красный цвет. Эго обстоятельство весьма сильно мешает быстрому нахождению гонококков в препарате. Вторым недостатком модификации lensen’a ’является то, что все Grаm отрица­тельные микроорганизмы окрашиваются при дополнительном окра­шивании Neutralroth’oM в одинаковый светло-красный цвет. В силу этого обстоятельства отличить гонококков от других диплококков, не красящихся по Grаm’y, по цвету совершенно не представ­ляется возможным, особенно в мазках из выделений мочеиспускатель­ного канала, где имеется несколько видов [по Fоulеrtоn’у’7) —5 видов, по Таnо”)—даже 7 обесцвечивающихся по Grаm’y диплококков и кокков, которые способом Grаm’a и его модифи­кацией по Iеnsеn’у окрашиваются в такой же светло-красный цвет, какой воспринимают и гонококки, но ничего общего, в смысле специфичности, с последними не имеют, хотя своей формой и ве­личиной весьма близко к ним подходят.

Таким образом пи оригинальный метод Grаm’a, ни его луч­шая модификация по lensen’у не являются верным орудием в деле микроскопического распознавания гонорреи. Спрашивается, каким же требованиям должен удовлетворять тот надежный способ окраска для обнаружения гонококков, к которому авторы стремятся, уже давно?

Этот способ, конечно, должен прежде всего: 1) окрашивать, гонококков в один цвет, а всех других .уретральных микроорганиз­мов, Grаm-положительных и Grаm-отрицательных,—в дру­гой; 2) он должен давать отчетливую избирательную окраску раз­личных элементов, исследуемого секрета и в частности окрашивать, гонококков в цвет контрастный .сравнительно с цветом фона из ядер форменных элементов и слизи, наконец, 3) он должен иметь дос­тоинства метода lensôn'a: быстроту окрашивания, лег­кость выполнения окраски, свойство реагентов не портиться от времени.

Стремясь достигнуть этой цели, я с начала весны 1921 года начал, в лаборатории клиники проф. В. Ф, Бургсдорфа, ис­пытывать для окраски гонококков различные красящие вещества в разных их концентрациях, причем порядок окрашивания Grаm’овского метода, как метода для гонококков дифференциального, мною не нарушался. После довольно продолжительной работы мне уда­лось подойти к такому изменению этого метода, которое дает весь­ма демонстративные препараты и, что особенно ценно, позволяет дифференцировать гонококков по цвету от многих других обесцве­чивающихся по Grаm’y микроорганизмов,—палочек, кокков и диплококков,—встречающихся в уретре и на различных воспален­ных и загрязненных частях человеческого тела.

Вот те реагенты, которые нужны для моей модификации: 1) раствор генциана-виолета для первоначального окрашивания пре­парата по прописи-—gentiana-violett 1,0, alcohol absolut. 10,0, sol. ас. carbol, puriss. 1% 100,0; 2) раствор иод-иодистого калия по прописи—jôdi purl 1,0, kalii jodati 2,0, aq. destillatae 50,0, 3) абсолютный или обыкновенный продажный чистый спирт 95% крепости и, наконец 4) краска Unnа-Раррenliеïm’a (пиронин и Méthylgrün.) ля дополнительного окрашивания.

Надо заметить, что генциана-виолет в растворе карболовой ки­слоты в иной несколько прописи, как уже отмечено выше, был предложен для Grаm’овского метода окраски гонококков Ni­collе’ем и Czaplewskі’м, по краска Czaplewsk’ого, как я уже указал, дает, по наблюдениям Фон-Валя, мутные, грязные препараты, что обусловливается, по-видимому, большим содержанием в растворе генциана-виолета Карболовой кислоты (ВД.)-

Взятый, мною более концентрированный раствор йод-йодистого калия (1:2:50,0), чем это берется для - оригинального метода Grаm’a (1:2:300,0), сильно сокращает время обработки препара­та. Оказывается, бывает достаточно лишь смыть им краску с пре­парата и тотчас же после того начать обесцвечивание спиртом,— за это короткое время раствор уже успевает создавать в телах микробов, красящихся по Grаm’y, такие условия, что они при дальнейшей обработке препарата спиртом не отдают своей краски. Между тем при Iensеn’овском растворе (1:2:100,0) подобный эффект получается не раньше, как через 1 минуту, а оригиналь­ный раствор Lugol’a (1:2:300,0) дает его лишь через 3 мин.

Что касается теперь спирта, то абсолютный спирт произво­дит обесцвечивание быстрее, чем 95%, по картины препарата не изменяет.

Краска Unnа-Раррenheim’a которую я предлагаю для дополнительного окрашивания препаратов, предложена для окраски гонококков одновременно и независимо друг от друга Unna-—для срезов и Pappen11еіt’ом—для мазков. Препараты, окрашен­ные этой смесью, очень красивы и весьма демонстративны: гоно­кокки окрашиваются при этом в тёмно-красный цвет, протоплазма клеток—в розовый, ядра гнойных клеток—в светло-зелёный, эпи­телиальные клетки—в тёмно-розовый цвет, а ядра эпителия—в сине-фиолетовый (E. Finger).

В предлагаемой мною модификации для получения отчетливых препаратов необходимо прежде всего, чтобы исследуемый секрет был распределен на предметных стеклах равномерно, тонким слоем. Сделанные мазки высушиваются на воздухе и. фиксируются обыч­ным образом на пламени газовой пли спиртовой горелки. Фикси­рование нужно производить осторожно, не перегревая препарата, чтобы не ослабить способности гонококков быстро вое принимать краску.              ‘

После фиксирования, выждав охлаждения препарата (в слу­чаях, когда краска наливается на теплый еще препарат, обесцве­чивание спиртом идет медленно, и на препарате часто остается %садок от краски), приступаем к окраске, для чего прежде всего наливаем на препарат 2—3 капли карболового раствора генциана виолета и держим его 1/4— ½ минуты. Этот раствор сливаем и часть его, приставшую к препарату, смываем несколькими каплями раствора йод-йодистого калия (1:2:50,0), держа препарат под не­которым углом к горизонтальной плоскости, чтобы жидкость сво­бодно стекала с него. Далее опять наливаем на препарат несколько капель раствора йод-йодистого калия и оставляем его действовать на ¼—⅓ минуты после чего сливаем и этот раствор и остатки его смываем несколькими каплями чистого 95% resP- абсолютного s спирта. Затем наливаем на препарат несколько капель этого же спирта и, покачивая стекло, чтобы спирт переливался на поверх­ности мазка, производим обесцвечивание последнего до стально- серого цвета. Чтобы достигнуть этого, иногда,—именно, в случаях, когда мазки сделаны из слизисто-гнойной массы,—приходится 1—2 раза сливать спирт, с препарата, и снова наливать. После того мы споласкиваем препарат водой, высушиваем его фильтровальной бума­гой и докрашиваем краской Unnа-Рарреuhеim’a в течение  ½ минуты, потом смываем эту краску водой, высушиваем препарат фильтровальной бумагой, наносим на него каплю кедрового масла и последуем при помощи иммерсионной системы микроскопа.

В общем итоге, значит, вся процедура окрашивания сводится у нас к такой схеме: 1) намазывание исследуемого секрета тонким слоем на предметное стекло, 2) высушивание мазка на воздухе, 3) осторожное фиксирование на пламени горелки, 4) окрашивание карболовым раствором генциана-виолета в течение  ¼—1/2 минуты, 5) споласкивание раствором йод-йодистого калия (1:2:50,0), 6) на­несение на препарат нескольких капель раствора йод-йодистого калия па 1/4—1/2 минуты, 7) смывание раствора, йод-йодистого калия чистым 95% или абсолютным спиртом, 8) обесцвечивание чистым 95% или абсолютным спиртом, 9) споласкивание препа­рата водопроводной водой, 10) окрашивание смесью Unna-Paрpenheim’a в течение 1/2 минуты, 11) споласкивание водой и высушивание фильтровальной бумагой.  

При этом подчеркиваю, что, если после обесцвечивания спирт удален с препарата не полностью, то при дополнительном окраши­вании препарата смесью Unna-Pappenheim’a гонококки могут не. окраситься, а если и окрасятся при более продолжительном действии этой смеси, то в неясный, мутно-розовый цвет. Во избе­жание этого следует после обесцвечивания смывать спирт с пре­парата водой.            

Необходимо также иметь в виду, что при дополнительном ок­рашивании препаратов продолжительное (2—3 минуты) действие смеси Unnа-Рappenheim’a перекрашивает препараты и дает менее демонстративные картины их. Лучшие картины получаются при действии смеси на препарат в течение ½ минуты

Кстати отмечу здесь еще и то, что препараты, сделанные из слизисто-гнойной массы, где над гноем преобладает слизь, долины окрашиваться карболовым раствором генциана-виолета не менее од­ной минуты. Иначе может случиться, что Grаm-положительные микроорганизмы, располагающиеся в массе слизи, вовсе не окра­сятся (это происходит благодаря тому, что слизь слишком жадно воспринимает краску), В подобных случаях указанные микроорганизмы при дополнительном окрашивании воспринимают из смеси Unna-Pappenheim’a красный цвет пиронина.

Что касается теперь картины препаратов, окрашенных по предлагаемой мною модификация, то здесь мы прежде всего должны отметить элективность окраска  форменных «элементов и контра­стность окраски гонококков сравнительно с общим фоном препарата. Рассматривая препарат, окрашенный, этим способом, мы видим в нем разнообразные оттенка двух цветом—фиолетового и розового. В частности, ядра гнойных клеток представляются окрашенными в фиолетовый цвет, а их протоплазма кажется слегка розоватой с сероватым оттенком; ядра эпителиальных клеток принимают фио­летовый цвет с некоторым розоватым оттенком, протоплазма же их, восприняв нежно-розовый цвет, s представляется в виде резко очер­ченного- красивого ореола; Grаm-положительные микроорганизмы, не отдавшие при обесцвечивании' своей первоначальной окраски, имеют темно-фиолетовый, иногда почти черный цвет; наконец, го­нококки, восприняв из смеси Unnа - Pарреnhеim’a красный цвет пиронина, представляются окрашенными в насыщенно-мали­новый цвет, резко выступая на общем фиолетовом фоне ядер лей­коцитов.

Отметим еще теперь отношение данного способа окраски к бактериям, не красящимся по Grаm’y. Отношение это весьма своеобразно: Grаm-отрицательные микроорганизмы при дополни­тельном окраіпивании смесью Unna-Pappenheim’a, окра­сившись пиронином смеси в розоватый цвет, воспринимают также,– по-видимому, и небольшую часть Methylgrûn’a, в силу чего они представляются окрашенными в розоватый цвет с оттенком или се­роватым, или синеватым—в зависимости от вида микроорганизмов; так, кокки и диплококки имеют обычно бледно-розовый цвет с си­неватым оттенком, бациллы-же представляются розоватыми с серо­ватым оттенком.

Испытывая свою модификацию метода Grаm’a, я имел в своем распоряжении довольно большой материал, для исследования: число обследованных мною препаратов, сделанных из выделений больной уретры, достигает 470, причем во всех этих препаратах гонококки неизменно представлялись окрашенными в насыщенно-  малиновый цвет. В течение почти 5 месяцев работы мне не уда­лось найти никаких других Grаm-отрицательных микроорга­низмов, которые тоже воспринимали-бы, этот характерный для го­нококков цвет,—ни в уретральных секретах мужчин, ни во вла­галищных выделениях женщин, ни в полости рта, ни в различных воспаленных, загрязненных, с гнойным отделением частях тела больных, обращавшихся в клинику. Я пробовал, да. ее, окрашивать мазки из культур некоторых видов Grаm-отрицательных пало­чек, в различные дни их существования, и во всех таких препа­ратах, - число которых равнялось 245,—можно было констатиро­вать, что находившиеся в них микроорганизмы окрашивались в ро­зоватый цвет с оттенком или сероватым, или синеватым. Таким образом предлагаемая мною модификация метода Grаm’a, окра­шивая гонококков в насыщенно-малиновый цвет, обособляет их от других, не красящихся по Grаm’y, микроорганизмов уретры.

Испытывая свою модификацию, я вместе с тем производил сравнительную оценку ее по отношению к способу lensen’a, 5 представляющему лучшее видоизменение метода Grama. Оценка эта производилась мною с 2 точек зрения: 1) с точки зрения а кости и быстроты нахождения гонококков в препаратах и 2) с точки зрения надежности распознавания гонококков.

Выгоды предлагаемой мною модификации в смысле более быстрого и легкого нахождения гонококков в препаратах не замед­лили сказаться уже при первых же исследованиях больных. Уже в первых случаях исследования, как и во всех остальных, можно было заметить, что гонококки обнаруживались быстрее в препара­тах, окрашенных по предлагаемой мною модификации, чем в пре­паратах, окрашенных по lensen’у. И это вполне понятно: при lensen’овской окраске на красном фоне ядер форменных эле­ментов, а иногда и слизи, часто бывает трудно уловить в такой же цвет окрашенных гонококков; нужно медленно двигать препа­рат под микроскопом и внимательно рассматривать каждое поле зрения, чтобы не оставить незамеченными группирующихся у ядер лейкоцитов возбудителей гонореи, и на это иногда уходит немало времени. В препаратах же, окрашенных по предлагаемой мною  модификации, гонококки, имея насыщенно-малиновый цвет, резко выступают на общем фиолетовом фоне ядер форменных элементов; в силу этого обстоятельства можно двигать препарат под микроско­пом довольно быстро, без риска пропустить незамеченными попадаю­щихся в поле зрения гонококков.        

Что касается теперь вопроса о надежности предлагаемой мо­дификации в деле распознавания гонорреи, то на основании исследо­ванных случаев я могу установить, что этот способ по надежности и точности распознавании Гонококков нисколько не уступает методу lensen’а: во всех случаях, мною исследованных, получалась пол­ное тождество результатов.

Итак, резюмируя все сказанное, мы находим, что предлагаемая мною модификация G г а mа’овского метода для окраски гонококков, имея все достоинства модификации Iеusen’а. а именно, а) быстроту окраски, б) легкость выполнения ее, в) свойство реагентов не портиться от времени, г) надежность способа в смысле точного распознавания гонококков,—дает еще: 1) избирательность окраски форменных элементов исследуемого секрета, 2) контрастность ок­раски гонококков по сравнению с общим фоном препарата и,, на­конец, 3) дифференцировку гонококков от других, не красящихся по G г а m’у. микроорганизмов уретры, что дает возможность быстро и легко ориентироваться в микробной флоре исследуемого секрета.                                                                                      В заключение считаю своим приятным долгом принести ис­креннюю благодарность моему глубокоуважаемому учителю, профес­сору Владимиру Федоровичу Бургсдорфу, за цен­ные указания и советы при выполнении этой работы.