Survival of synthomycin-resistant dysentery bacteria in fecal matter

Abstract

In recent years, reports have accumulated in the literature on the frequent isolation of antibiotic-resistant forms of pathogens in patients with dysentery. The percentage of synthomycin-resistant strains isolated from patients is, according to a number of authors (2, 22, 12, 17), from 15.3 to 90. T.B. Gorgiev, L.M. In the foci of dysentery, synthomycin-resistant strains of dysentery bacteria were used on linen, water taps, etc. A number of researchers (22, 14) found synthomycin-resistant strains among dysentery cultures isolated from patients who had not yet been treated with this drug, and even from newborns.

Full Text

За последние годы в литературе накапливаются сообщения о частом выделении у больных дизентерией антибиотикоустойчивых форм возбудителей. Процент синто­мициноустойчивых штаммов, выделяемых от больных, составляет по данным ряда авторов (2, 22, 12, 17) от 15,3 до 90. Т. Б. Горгиев, Л. М. Андреенко и др. (7) на­ходили в очагах дизентерии синтомициноустойчивые штаммы дизентерийных бакте­рий на белье, водопроводных кранах и пр. Ряд исследователей (22, 14) обнаружил синтомицинорезистентные штаммы среди дизентерийных культур, выделенных от боль­ных, еще не леченных этим препаратом, и даже от новорожденных.

С эпидемиологической точки зрения важны появившиеся в литературе указания на связь между лекарственной устойчивостью дизентерийных бактерий и их выжи­ваемостью во внешней среде. Была обнаружена большая резистентность сульфами­доустойчивых дизентерийных бактерий к нагреванию, свету, высушиванию, микроб­ному антагонизму и прочим воздействиям (18, 3, 13, 19, 10). Следовательно, такие штаммы могут дольше сохраняться во внешней среде. Эти данные согласуются с эпи­демиологическими наблюдениями об увеличивающемся значении воды, продуктов и предметов, окружающих больного, в заражении дизентерией (6, 11, 5, 24, 25).

Значительный интерес представляет вопрос о выживаемости во внешней среде синтомицино- и левомицетиноустойчивых дизентерийных бактерий. Однако этот вопрос изучен недостаточно. Известно сообщение В. С. Череватого (1955) о более длительном выживании дизентерийных микробов, повысивших резистентность к синтомицину в пробирочных условиях. По сравнению с антибиотикочувствительными штаммами, они дольше сохранялись в водопроводной воде, высушенных фекалиях, растворе хлора­мина.

В данной работе мы задались целью изучить выживаемость свежевыделенных дизентерийных бактерий, чувствительных и резистентных к синтомицину, в фекальных массах. По литературным данным последних лет, дизентерийные бактерии могут дли­тельно сохраняться в фекалиях больных (1, 9, 4, 15).

При изучении выживаемости дизентерийных бактерий в искусственно инфициро­ванных фекалиях нами поставлены 4 серии опытов с общим количеством 114, в ко­торых изучены сроки жизнеспособности в фекальных массах 76 штаммов дизентерий­ных бактерий, свежевыделенных в бактериологических лабораториях 1-й и 2-й инфек­ционных больниц Казани от больных острой и хронической дизентерией. Из них 40 штаммов относились к виду Флекснера (серотип «с») и 36 — к виду Зонне. По мор­фологическим, культуральным и биохимическим свойствам культуры были типичными. В реакции агглютинации с видовой агглютинирующей сывороткой наблюдались поло­жительные результаты в разведениях выше половины титра. Все штаммы лизирова­лись поливалентным дизентерийным бактериофагом. Чувствительность культур к син­томицину проверялась методом серийного разведения антибиотика. Для работы мы отобрали наиболее чувствительные штаммы, которые росли в бульоне при концентра­ции синтомицина не выше 0,9 гамма/лм, и наиболее резистентные, выраставшие при концентрации препарата выше 70 гамма/лл. В числе указанных штаммов было рав­ное количество синтомициночувствительных и синтомицинорезистентных. Каких-либо различий в свойствах антибиотикочувствительных и резистентных штаммов нам уста­новить не удалось. Как было сказано, все они были типичными. Эти наблюдения со­гласуются с данными ряда авторов (2, 16, 8, 20, 24).

Методика. Суточная дизентерийная культура на агаре смывалась стерильным физиологическим раствором и разводилась по оптическому стандарту до 1 млрд, ми­кробных тел в 1 мл. Навески испражнений по 25,0, помещенные в стерильные бюксы, заражались этой взвесью с таким расчетом, чтобы на 1,0 приходилось в первой серии опытбв около 20000, во второй — 40000, в третьей— 100000 и в четвертой—1 млн. бактерий. В 1 и 2 сериях было взято по 8 чувствительных к синтомицину штаммов и 8 резистентных вида Флекснера и по 7 тех и других — вида Зонне, в 3 серии — соот­ветственно по 8 и 6 тех и других, и в 4 — по 7 и 6. Фекалии тщательно перемешива­лись стерильной стеклянной лопаточкой и сохранялись в темном месте при комнат­ной температуре (18—22°). Высевы испражнений производились ежедневно на диф­ференциально-диагностические среды. 0,5 г фекалий эмульгировалось в 5 мл стериль­ного физиологического раствора, 0,1 мл этой эмульсии наносилась на агар Плоски- рева и распределялась при помощи шпателя. Остатком материала на шпателе засе­валась вторая чашка с средой Плоскирева, а затем среда Левина. После суточной инкубации в термостате производилась идентификация выросших лактозодефективных колоний; изучались вид колоний, морфология микробов, их биохимические и сероло­гические свойства, а также чувствительность к поливалентному дизентерийному бак­териофагу.

Несмотря на одинаковую методику высевов, результаты бактериологических ана­лизов были непостоянными. При высеве фекалий, содержащих около 20000 бактерий в 1,0, возбудитель выделялся регулярно первые 2 дня посевов, в дальнейшем получа­лись то отрицательные, то положительные результаты. При высеве фекалий с 40000 бактерий в 1,0, как правило, положительные результаты были первые 3 дня, затем отрицательные чередовались с положительными. В опытах с испражнениями, обсеме­ненными около 100000 и 1 млн. микробами, высеваемость бактерий была постоянной в течение первых 4—6 дней, в последующие дни находки возбудителя были менее регулярными. Чем большей была обсемененность фекалий бактериями, тем меньше было отрицательных высевов на протяжении всего срока исследования. На основании этих наблюдений гибель бактерий в наших опытах регистрировалась только при 12-кратном отрицательном анализе.

Средняя выживаемость (в днях) дизентерийных бактерий, чувствительных и ре­зистентных к синтомицину, представлена в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что длительность сохранения возбудителя зависит от сте­пени обсемененности.

Таблица 1

Штаммы		Количество дизентерийных микробов в 1,0 фекалий
		20 000	40 000	100 000	1 000 000
Флекснер	Чувствительные	8,7	9,6	11,5	13,8
	Резистентные	13,3	13,8	14,8	17,8
Зонне	Чувствительные	14,8	15,2	16,0	18,6
	Резистентные	17,5	18,0	20,6	24,5

Бактерии Зонне обнаруживались в фекалиях более длительно, чем бактерии Флекснера, причем синтомицинорезистентные штаммы обладают большей выживае­мостью. Это закономерно наблюдалось с обоими видами возбудителя.

Достоверность результатов подтверждена статистическим методом дисперсионного анализа, предложенным Р. А. Фишером.

По-видимому, имеется сходство между сульфамидорезистентными и синтомици­норезистентными дизентерийными бактериями. И те и другие могут выживать в фе­калиях дольше, чем лекарственночувствительные штаммы возбудителя.

На протяжении всего периода исследований ни один из синтомицинорезистентных штаммов дизентерийных бактерий не показал каких-либо существенных изменений свойств. Четыре штамма бактерий Флекснера, чувствительные к антибиотику, к 16— 20 дню пребывания в фекалиях перестали ферментировать манит, шесть других по­теряли агглютинабильность. Три штамма бактерий Зонне, чувствительные к синтоми­цину, примерно в такие же сроки перестали агглютинироваться специфической сыво­роткой.

Результаты исследований с 76 штаммами дизентерийных бактерий позволяют сде­лать следующие выводы:

1. Высеваемость дизентерийных бактерий из фекалий зависит от степени инфи­цирования. Чем выше концентрация возбудителей, тем дольше сроки выделения.
2. Бактерии Зонне значительно дольше сохраняются в испражнениях, чем бак­терии Флекснера.
3. Синтомициноустойчивые штаммы дизентерийных бактерий, выделенные от боль­ных, длительнее выживают в искусственно инфицированных фекалиях, нежели анти­биотикочувствительные.