On the use of antigens from sp. pallida cultures for the sero-diagnosis of syphilis

Abstract

Since the production of pure cultures of sp. pallida, the question arose about the use of these cultures as an antigen in WaR. The possibility of using such an antigen seemed very tempting, since in this case, WaR would methodically fully satisfy the requirements of the Bordet-Gengou complement binding reaction, on the theoretical basis of which the WAR technique was developed by Wassermann, Neisser and Vgisk at the time.

Full Text

С момента получения чистых культур sp. pallida возник вопрос о применении этих культур в качестве антигена при WaR. Возможность применения такого рода антигена казалась весьма заманчивой, так как g этом случае WaR в методическом отношении вполне удовлетворяла бы требованиям реакции связывания комплемента Bordet-Gengou, на теоретической базе которой и была в свое время разработана методика WaR Wassermann’oM, Neisser’oм и Вruск’ом.

Такие опыты были произведены Mllhlen s’om, Hoffmann’ом, Sсhеrеsсhеwsку, Worms’om, Nakano, Noguchi, Kolmer, Williams, L au bоugh и H inklemanп’ом, но результаты не всегда были постоянными: в одних случаях наблюдалось значительное, но все же неполное совпадение с результатом опытов по оригинальному методу WaR, в других случаях для положительных по Wa сывороток совпадение получилось лишь в 50%, а в опытах Noguchi антиген, приготовленный из чистых культур, редко давал положительный результат при первичном или вторичном сифилисе и лишь небольшой % сывороток реагировал при третичном латентном сифилисе положительно. В послед  нее время в связи с работой F. Кlорstоск’а вопрос о возможности применения спирохэтного антигена снова является предметом интенсивного изучения, тем более что и взгляд на природу Wa-реагинов начинает понемногу изменяться в сторону признания главной роли спирохэт в деле образования этих тел. F. Klopstock, применяя алкогольный экстракт из sp. pallida чистых культур (шт. Reiter’a), на большом числе опытов связывания комплемента с сыворотками людей, больных сифилисом пока  зал, что с экстрактом из спирохэт получились лучшие результаты, не  жели с органоэкстрактами, обычно применяемыми при WaR, Эти наблюдения были подтверждены затем Hecht’oм и одним из нас (Р. Р. Гельтцер) совместно с В. И. Поповым. К г о б и Schulze, напротив, по  лучили иные результаты, работая с алкогольным экстрактом из спирохэт выделенной ими чистой культуры. Эти авторы получили положительный результат только в 50% положительных по WaR сывороток. F. Кlорstок объясняет это резкое расхождение недостатком приготовления экстракта, но, быть может, как мы знаем из дальнейших работ Кrоo и Schulze, здесь могли иметь значение и те особенности штамма, которыми этот последний столь резко отличается от шт. Reiter’a.

Gaehtgens, признавая, на основании своих опытов, что спирохетный экстракт Кlорstоск’а представляет собой в общем пригодный антиген, все же не мог подтвердить превосходства этого антигена посравнению с обычными алкогольными Вассермановскими экстрактами Применяя же в качестве антигена взвесь sp. pallida в физиологическом растворе'NaCl с прибавлением 0,3 ас. carbolici, Gaehtgens убедился при исследовании 7000 сывороток в том, что такой антиген является значительно превосходящим обычные алкогольные органоэкстракты. Изучая водные антигены этот автор обратил внимание на следующее обстоятельство: взвесь sp. pallida, убитая нагреванием при 56°, или совершенно не реагирует в опыте связывания комплемента с сыворотками сифилитике в, или же в редких случаях дает положительную реакцию; при добавлении же карболовой кислоты в количестве 0,3% этот антиген становится весьма чувствительным. Стойкость таких водных карболизированных антигенов меньше алкогольных, но все же при хранении на лед  нике втечение нескольких педель реактивная способность их падает лишь немного, сохраняясь в дальнейшем неизмененной па протяжении месяцев; кроме того, по наблюдениям автора, оказывается, что такие анти  гены выдерживали хранение втечение 2 месяцев при t° 37° и при этом не теряли своей реактивной способности. Для работы с этой карболизированной взвесью sp. pallida в качестве антигена автор рекомендует придерживаться след, методики: доза антигена всегда определяется в день опыта; для разведения антигена употребляется физиологический раствор NaCl с 0,3% ас. carbolici, в качестве контрольных сывороток применяют  ся наряду с резко положительными сыворотками еще 2—-3 сыворотки слабо положительные (+ или ±) по WaR, которые однако с pallida- антигеном реагируют резко положительно. Дальнейшая необходимость изучения свойств спирохэтных антигенов диктуется тем, что как WaR в обычной ее постановке, так и осадочные реакции (в частности реакция Sachs-Georgi) оказываются на практике не точными для серо- диагноза сифилиса. Как показывают исследования 2-ой Копенгагенской серологической конференции (1928 г.), положительная WaR при сифилисе наблюдается в 41,8%, а осадочные реакции, хотя и дают положительные результаты в большем количестве случаев (до 63,5%, из них SGR—в 41,9%), все же полностью заменить Вассермановскую реакцию не могут. Оба метода: реакция связывания комплемента и осадочные реакции являются весьма ценными лишь при одновременной постановке, когда они взаимно дополняют друг друга; но и теперь, несмотря на усложненную таким образом методику серодиагноза сифилиса, некоторая часть случаев этого заболевания остается невыясненной.

Считая возможным допущение, что возникновение Wa-реагинов обязано антигенному раздражению самих спирохэт (о соответствующих опытах нами было сообщено в работе „Zur Frage über das Wesen der Wa- Reaktion) и рассматривая таким образом WaR в случае применения спирохэгного антигена, как истинную реакцию иммунитета в смысле Bordet-Gengоn, мы считаем весьма важным вести дальнейшие исследования в области серодиагноза сифилиса в направлении практического изучения антигенов из sp. pallida, тем более что уже имеются данные о высокой чувствительности таких антигенов.

Настоящее исследование является естественным продолжением выше  упомянутой работы, имея теперь целью выяснить на большем ряде случаев пригодность спирохэтных антигенов для практических целей в деле серологического диагноза сифилиса, полагая в случае превосходства этих: антигенов над обычными органоэкстрактамн видеть в этом косвенное доказательство нашего мнения о специфичности WaR.

Для постановки реакции связывания комплемента в качестве спирохэтных антигенов нами был взят алкогольный pallida экстракт, взвесь ар. pallida в физиол. растворе NaCl, карболизированная взвесь sp. pallida и взвесь sp. pallida с прибавлением формалина. Все эти спирохэтные антигены готовились из спирохэт чистых культур наших I и 1.1 штаммов. Реакция связывания комплемента с этими антигенами ставилась параллельно с обычной WaR и SGR, причем для постановки WaR применялись: экстракт из сердца теленка по Bordet-Ruelens’y и алкогольный экстракт из сифилитической печени. Испытуемыми сыворотками служили сыворотки, поступающие в наш Институт для WaR; часть сывороток сифилитиков и лиц, не больных сифилисом, была нам предоставлена ассистентом Университетской клиники кожных и венерических болезней д-ром М. Н. Ашаниным, за что мы, пользуясь здесь случаем, приносим нашу благодарность.

I. Р. связывания комплемента с алкогольным pallida экстрактом. Алкогольный экстракт из sp. pallida готовился по F. Кlорstock’y следующим образом: богатые культуры спирохэт центрофугировались, полученный осадок, состоящий сплошь из одних спирохэт, промывался физиологическим раствором NaCl путем повторного центрофугирования, высушивался и растирался в мельчайший порошок. Экстрагиро  вание производилось абсолютным алкоголем (из расчета 1 часть порошка на 100 частей алкоголя) втечение 2 недель при 60°, причем временами производилось встряхавание в Schüttelapparat’e. По окончании экстрагирования—фильтрование через бумажный фильтр. Полученный фильтрат и представляет собой готовый антиген. При испытании наименьшей самозадерживающей дозы ряда таких антигенов оказалось, что она соответствует обычно разведению 1:3 или 1:4. Рабочая доза колебалась в раз  ведениях от 1:10 до 1:12. Надо отметить, что приблизительно через месяц величина рабочей дозы обычно несколько падала (до 1:8—1:10), а затем уже не изменялась по крайней мере втечение 10 месяцев (у нас имеются наблюдения пока только за этот период времени). Согласно указаниям Klopstock’a следует сохранять экстракты из sp. pallida, во избежание их ослабления, при t° 35°—37°. Желая убедиться, в какой мере происходит ослабление экстрактов при хранении их при комнатной температуре, мы протитровали параллельно экстракты, сохранявшиеся втечение 6 месяцев при обычной комнатной t° и при t° 35⁹—37°; при этом оказалось, что оба экстракта обладали одной и той же высотой титра. 'Таким образом возможно допустить, что если свежеприготовленные алкогольные pallida-экстракты в течение первого месяца несколько ослабевают, то при дальнейшем хранении они являются вполне стойкими.

Убедившись в том, что алкогольные экстракты, приготовленные из спирохэт I и II штаммов и шт Reiter’a, совершенно не отличаются между собою в опытах связывания комплемента, мы стали в дальнейшем применять только смесь экстрактов из спирохэт наших I и II штаммов. Параллельному исследованию на реакцию связывания комплемента с раl- lida-экстракт (серия № 3), специфич. печеночн. антигеном и антигеном Bord.-Ruе1., с одновременной постановкой реакции Saclis-Georgi было подвергнуто 1017 сывороток и 18 спинно-мозговых жидкостей, т. е. всего 1035 сл. Полное совпадение результатов но всем 4 .методам получено у 815 сывороток, т. е. в 78,5%. Случаев, где хота бы один из методов давал иной результат, было всего 220, т. е. 21,5%.

Полученные данные при детальной обработке представляются в следующем виде:

Полное совпадение—в 815 случаях, из них:

положительных сывороток 115, 

в том числе: резко положительных—73 

и с различи, степей, полож. результ.-42                                                  

отрицательных 700; из них от лиц, не больных сифилисом 101 сыв., которые распределяются по след, заболеваниям:

Lupus vulgar.-46, lup. erythemat.—2. eczema—17, гоноррея—5, ulcus mol  le—1, ulc. rodens—3, psorias. vulg.—2_r sarkoid-1 и проч,—24 случ.

Расхождения в результатах—в 220 случаях, из них: р. положительная о pallida-экстракт, антиг. B.-Ruel., сифил. печ. и отрицат. по SG—10 сл.

(L. Ill lat.-—4 сл., L 1—1 сл., psych, org. —1 сл.);

р. положительная с pall, экстракт., сифил. печ., по SG и отрицательн. е антиш по B.-R uelens.—20 сл.

(L. Ш lat.—Зел., L. II lat.—4, L III. 1, L congen—1, neurolues—1):  p. положительная с раl.-экстракт и с сифил. печ. и отрицат. с антиг. по B.-Ruек.  и по SG.—7 сл.

(L. III lat.—2, parai, progr.—1);

положительная c pal l.-экстракт и no SG и отрицат. с антиг. В. по Ruel, и сиф. печ.—12 сл.

(L. Ш lat.—8, L. II recens—1, L. heredit. t. 2, L. 11 lat. —1);  p. положительная c pall.-экстр. и отрицательная с антиг. по В. Ruel, и сифил.  печ. и по SG—168 сл.;

из них р. ++++ в 10 случ. (L. III lat.—3 и L?—6)

"               +++ „ 26 „        (L. III lat.- 3, L. II lat.—2, L. bered.—1 и L?—16}

„                  ++ „ 64 „        (L.III lat.—14, L II lat—9 и L?—22)

„                   + ,, 68  „        (L. lat.—11, L. Il lat.—8, neurolues—2,  L?—22 и lupus vulgaris—4);

р.отрицательная no SG. c раll.-экстракт, сифилит. печ. и слабоположительная (+-+) с экстр, по В. Rue len.— 1 сл. (L. viscer?);

р. отрицательная c pall.-экстр. сифил. печ. c антиг. по В. Ruel, и слабо положительная (+) по SG. в 2 случ. (в одном из этих случаев сыворотка желтушная).

Если принять во внимание, что при постановке WaR антиген из. сифилитической печени считается до сих пор наиболее чувствительным, то в вопросе о диагностической ценности антигена из культур бледной спирохэты, особое значение приобретает число совпадений в результатах реакции именно со специфическим печеночным антигеном. Из общего числа 220 случаев неполного совпадения мы выделили 40 сывороток, которые реагировали одинаково со специфическим печеночным антигеном и алкогольным pallida-extract’oм, давая расхождения с результатами опытов с антигеном по Bordet RuеIепs'y, или по S. G., или одновременно п с тем и другим. Таким образом общее число- исследований, где специфический печеночный антиген и алкогольный pallida-extract дали совершенно тождественные результаты, будет равняться—855. Число случаев расхождения при выделении упомянутых сывороток уменьшается до 180 случаев. Однако из этих 180 случаев при строгом учете необходимо исключить все те случаи, которые остались совершенно невыясненными в отношении характера заболевания, и тогда останется 132 случая установленного люэса п L?, в которых антигены WaR оказались недостатки-ними, а алкогольный pallida-экстракт дал положительный результат т. е. в этих случаях он оказался чувствительнее.

Относительно этих случаев нужно отметить, что положительный результат был получен в большем числе случаев леченного сифилиса, причем, с одной стороны, по окончании лечения реакция с pallida-экстрактом оставалась еще положительной, в то время как WaR и SGR становились уже отрицательными, а с другой—положительная реакция с pallida-экстрактом при отрицательной WaR и SGR наблюдалась в случаях сифилиса, когда последнее лечение было проведено несколько лет (до 12 и даже 20) тому назад и заставило теперь больных вследствие ухудшения состояния здоровья обратиться за помощью. В последнем случае большая ценность алкогольного pallida-экстракта в силу своей высокой чувствительности является несомненной; при помощи такого антигена рецидив заболевания обнаруживается, по-видимому, значительно раньше. Что ясе касается тех случаев, когда после окончания лечения прошло еще немного времени, то здесь мы могли иметь дело или с тем обстоятельством, что реакция с pallida-экстрактом дольше держится положительной в силу своей большей чувствительности, т. е. способности обнаружить даже минимальные количества реактивных тел, а затем с течением времени эта положительная реакция само собой исчезает, или же, быть может, здесь нужно считать лечение еще недостаточным и тогда под влиянием лишь продолжения лечения эта реакция перейдет в отрицательную. Решить это возможно только при изучении алкогольного pallida-экстракта в тес  ной связи с тщательными клиническими наблюдениями.

Из 3-х случаев расхождения отрицательных результатов реакции с pallida-экстрактом в одном случае сыворотка реагировала отрицательно как с pallida-экстрактом, так и с экстрактом из сифилитической печени и по Sachs-Georgi, а с экстрактом по Вordet-Ruelens’y дала слабо-положительный результат (++) В этом случае сыворотка принадлежала больному с подозрением на люэс внутренних органов (hies vis  ceral.?). Нужно заметить, что на все 1035 исследований это единственный случай, когда антиген по Вoгdе t-Ruеlеn s’y в отличие от другого, более чувствительного антигена, как сифилитическая печень и реакции SG, реагировавших отрицательно, дал слабо положительную реакцию и кроме того, как увидим ниже, эта же сыворотка при испытании с антигенами, состоящими из взвеси sp. pallida дала тоже отрицательный результат. Остальные два случая касаются слабо положительной реакции (+) по SG и отрицательной с Wa-антигенами и с алкогольным pallida- экстрактом. Данных о характере заболеваний лиц, от которых были по  лучены эти сыворотки, к сожалению не удалось получить, но и в этих 2-х случаях подобно предыдущему при постановке реакции с антигенами из взвеси sp. pallida (см. ниже) реакция получилась тоже отрицательной. В связи с тем, что во всех этих 3 случаях мы не располагаем определенными клиническими данными, мы не в состоянии дать точную оценку результатов этих реакций. Но во всяком случае считаем нужным под  черкнуть, что и здесь результаты реакции с алкогольным pallida-экстрактом совпала с результатом реакции с антигеном из сифилитической печени.

Что касается сывороток лиц, не больных сифилисом, то все они дали с pallida-экстрактом отрицательный результат за исключением 4-х случаев с lupus vulgaris, которые дали сомнительный результат (+)(всего было исследовано 48 сывороток от больных волчанкой). Из этих же 4 случаев сомнительный (+) результат был получен (см. ниже) с антигеном из простой взвеси sp. pallida в 1 случае. Такой результат реакций в этих случаях мог зависеть, как нам кажется, от трех причин: или здесь эта реакция с алкогольным pallida-экстрактом обнаружила действительно имевшееся заболевание сифилисом в силу своей высокой чувствительности, или же мы имеем здесь дело с групповой реакцией, или же, наконец, в данном случае такой результат получился вследствие выраженной лабильности сыворотки больных волчанкой, подобно тому как иногда наблюдаются с сывороткой таких больных неспецифические реакции с Wa - антигенами. Решить эти вопросы, по независящим от нас обстоятельствам, не представлялось возможным.

Итак, на основании опытов р. связывания комплемента сыворотками людей больных сифилисом с алкогольным pallida-экстрактом, мы вправе сказать, что этот pallida-экстракт может не только заменить взаимно дополняющие друг друга WaR и SGR, но в ряде случаев реагирует положительно с сыворотками несомненных люэтиков, в то время как анти  гены, применяемые при WaR и SGR, остаются недеятельными.

При выяснении количества положительных реакций с Wa-антигенами по отношению ко всем исследованным нами случаям (т. е. к 1035) мы получаем положительный результат WaR в 14,9%, а положительный результат с алкогольным pallida-экстрактом по самому минимальному подсчету [взяты случаи с диагнозом L или L? и отброшены случаи L? с сомнительным (+) результатом реакции] в 25,6%, т. е. отсюда следует, что чувствительность реакции с алкогольным pallida - экстрактом почти в 2 раза (1,74) выше чувствительности обычной реакции Was  sermаnа. Те же данные мы имели в отношении реакции Sachs-Georgi.

II. Р. связывания комплемента с антигенами из взвеси sp. pallida. Еще в первоначальных наших наблюдениях (Гельтцер Р. Р. и В. И. Попов 1928 г.) и затем последующих наших опытах по изучению Wa-реагинов было установлено, что антиген из взвеси отмытых sp. pallida и убитых нагреванием при 60° втечение 24 часов является более чувствительным, чем алкогольный pallida-экстракт.

Под влиянием этих наблюдений, а также и результата исследований Gaehtgens'a, установившего, что антиген из взвеси sp. pallida с прибавлением 0,3% ас. carbolici в опытах связывания комплемента с сыворотками людей, больных сифилисом, оказывается значительно чувствительнее алкогольного pallida-экстракта, мы применили для этой реакции анти  ген из взвеси спирохэт наших I и II штаммов. Эти реакции ставились одновременно как с простой взвесью спирохэт, так и с прибавлением к ней 0,3% ас. carbolici.

Антигены из взвеси спирохэт готовились нами следующим образом: полученный при центрифугировании богатых культур осадок промывался физиологическим раствором NaCl и приготовлялась взвесь, по густоте своей соответствующая бактерийному стандарту в 4 миллиарда; затем взвесь эта нагревалась при 60° втечение 24 часов. Для получения карболизированного антигена по Gaehtgens’y к приготовленной таким образом взвеси прибавлялось 0,3% ас. carbolici.

Убедившись первоначально в том, что антигены из культур I и II штаммов мало чем отличаются друг от друга, мы стали в дальнейшем применять антиген, приготовленный поровну из смеси спирохэт 1 и II штаммов. После небольшого ряда опытов применения антигена из про  стой взвеси спирохэт мы получили неожиданные результаты, резко противоречащие данным Gаеtgеns’a и состоящие в том, что такая взвесь реагировала с сыворотками сифилитиков аналогично Wa антигенам и алкогольному pallida-экстракту, а в некоторых случаях оказалась даже чувствительнее карболизированной.

Имея такие результаты, мы в дальнейшем поставили 2 серии опытов: а) с простой взвесью спирохэт и б) с карболизированной взвесью спирохэт, причем все эти реакции всегда производились параллельно с алкогольным pallida-экстрактом, с WaR и SGR.

а) Р. связывания комплемента с антигеном из взвеси спирохэт в физиологическом растворе NaCl.

Минимальная самозадерживающая доза такого антигена обычно соответствовала разведению 1:3 и 1:4, рабочая же доза соответствовала разведению от 1:10 до 1:15. Эта доза при сохранении антигена на ходу обычно втечение 2—3 недель оказывалась неизмененной.

Всего было исследовано 291 сыворотка (в том числе 3 спин. мозг, жидкости). Полное совпадение результатов получено в 234 случаях и расхождение в 54 случаях.

Все эти данные распределяются следующим образом;

Полное совпадение в 234 случаях, из них:

положительные - 35,

в том числе резко положит - 22

результ - 13

отрицательные - 199,

из них от лиц, не больных сифилисом, 24 сыворотки, которые распределяются по заболевай, следующим образом: Lupus vulgar.—19, Inpus erythem.—1, eczema—1 и проч.—3.

Расхождение в результатах—в 57 случаях, из них:

р. положительная со взвесью sp. pallida, алкогольн. pallida-экстр., сиф. печ., по SG и отрицат. с В. Ruelens—3 сл. (L. III lat.—1);

р. положительн. со взв. sp. pallida, алкогольн. pallida-экстр., по SG и отрицат. с В. Ruеlеns и сиф. печен,—2 сл. (L. III lat.—1, hemiparesis—1);

-р, положительн. со взв. sp. pallida, алкогольн. pallida-экстр., сиф. печ. и отрицат. с Bord. Ruelens и по SG—2 сл.

р. положительная со взв. sp. pallida, алког. pall, экстр, и отриц. с В. R u е I. сиф. печ. и по SG-21.

(L III lat.—3, L II lat.—1, neurolues—1, L?—4, psyh. org.—1. lup. vulgar.—1) p. положительная со взв. sp. pallida и отриц. с алког. pall.-экстр., В. R uеі., сифил. печ. и по SG в 17 сл.;

из них: р. + + + в 3 случаях (L? — 1)

"                    ++ „3 „ L (III lat..—1, L?—1, орг. забол. нервн. сист.—1)

 „                    + „ 11  „ (L III lat.—1, L 11 lat. 2, L?-1, parai. progr.?-l, lu n. vulgar,—2);

р. отрицательная со взв. sp. pallida, B. R u e 1., сифил. печ., no SG и положительн. с алког. pall -экстр, в 8 случ. (L II lat.—1, L III lat—1, L? -6);

р. отрицательная со взв. sp. pall. B. R u e 1., сифил. печ. и резко положительная (++++) с алкогольн. pall.-экстр. и сл. пол. (4-) по SG в 1 сл. (L. heredit. t.?);

р. отрицательн. со взв. sp, pall., алког. pall.-экстр., В. Rue len., сифил. печ. и слабо положит. (+) по SG в 2 случ. (в одном из этих случ. сыв. желтушная)

р. отрицательная со взв. sp. pall., алкогольн. pall.-экстр., сифилит. печен., по SG и слабо положит. (++) с В. Ruel, в 1 сл. (Lues viscer.?).

И здесь мы можем применить относительно случаев совпадения результатов реакций со взвесью sp. pallida и с антигеном из сифилитической печени при одновременном расхождении с результатами опытов с антигеном по Bordet-Ruе1епsу и по SG те же рассуждения, которые приведены при рассмотрении аналогичных же случаев применения алкогольного pallida-экстракта; тогда из группы расхождений в 57 случаях мы можем выделить 8 сывороток и таким образом общее число исследований, где антиген из сифилитической печени и взвесь sp. pallida дали одинаковый результат, будет равняться 242. Если из числа случаев расхождений отбросить все случаи с невыясненным характером заболевания, то в пользу этого антигена остается 17 случаев. Все эти случаи падают на сыворотки от больных сифилисом или подозрительных на сифилис. Во всех, этих случаях антиген из взвеси спирохэт оказался несомненно чувствительнее Wa-антигенов (чувствительность выше в 1,4 раза) Что касается: расхождений результатов реакции со взв. sp. pallida и с алкогольным pallida-экстрактом, то мы имеем здесь всего 9 случаев. Из них 8 случаев распределяются следующим образом: L III lat. - 1, L II lat.—I в L?—6 сл. Здесь была получена отрицательная реакция со всеми анти  генами, кроме алкогольного pallida-экстракта. Далее в 1 случае, когда при резко положительной реакции с алкогольным pallida-экстрактом и слабо положительной SGR, наряду с отрицательной реакцией с экстрактом В. Ruslens’a и сифилитическ. печеночн. отрицательной оказалась реакция и со взвесью спирохэт.

В этом случае сыворотка принадлежала больному L. lieredit. T? Относительно всех этих отрицательных результатов в 9-ти случаях с антигеном из взвеси sp. pallida можно сказать, что они наблюдались, к концу наших исследований с этим антигеном, т. е. такому моменту, когда вследствие увеличения антикомплементарных свойств антиген приходилось применять в дозах, несомненно влияющих на чувствительность реакции в сторону ее понижения. Остальные 3 случая расхождения отрицательных реакций с антигеном из взвеси спирохэт касаются тех сывороток, о которых была речь выше при разборе случаев расхождения отрицательных результатов реакций с алкогольным pallida-экстрактом.

При исследовании сывороток лиц, не больных сифилисом, взвесь sp.: pallida дала сомнительный результат реакции в 3 случаях сывороток от больных с lupus vulgaris при отрицательном результате со всеми другими антигенами и по SGR, за исключением 1 случая, когда сыворотка дала сомнительный (+) и с алкогольным pallida-экстрактом. Объяснение возможности появления таких результатов при lupus vulgaris может быть то же, какое мы дали, разбирая аналогичные же случаи при реакциях с алкогольным pallida-экстрактом.

б) Р. связывания, комплемента с антигеном из взвеси sp.- pallida с 0,3 % ас. carbolici. Самозадерживающая и рабочая дозы карболизированной взвеси спирохэт почти не отличались от доз антигена их простой взвеси спирохэт, но при хранении этого антигена на холоду рабочую дозу приходилось увеличивать уже через 10—14 дней вследствие его ослабления. С карболизированной взвесью спирохэт было исследовано всего 274 сыворотки (в том числе 3 спин, мозгов, жидкости). Полное совпадение результатов получено в 229 случаях, а расхождение—в 45 сл.

Результаты всех этих опытов распределяются следующим образом:

Полное совпадение—в 229 случаях, из них:

положительные—29, отрицательные—200,

в том числе резко положительн.—14, из них от лиц не больных сифилисом 25

и с различной степ, положит, р—15, сывороток, кот. распр. след, обр.: lupus vulgaris 20, lup. erythem—1, eczema— и пр.—3.

Расхождения в результатах —в 45 случ., из них: р. положит, с карб. взв. sp. pallida, алког. pall.-экстр., сифилит. печен, по SG и отрицательн. с В. Rue 1.—2 сл. (L. III lat—1);

р. полож. с кар. взв. sp. pall., алког. pall.-экстр, и отриц. с В. Ruel., сифилит печ. и по SG—в 15 сл. (L. Ill lat.—2, L?—5, psych. org.—1).

р.положит, с карб. взв. sp. pallida, алког. pall, экстр., no SG и отриц. с В. Ruel.- и сиф. печ. в 1 сл. (L. III lat.);

р. положит, с карб. взв. sp. pall, и отриц. с алког. pall, экстр., В. Ruel., сиф. печ. и по SG в 6 случ.;

из них: p.++в 4 случ.

р. + в 2 сл. (L. Ill lat.—1);

р. отрицательная с карб. взв. sp. pallida, В. Ruel., по SG и положит, с алк. pall.-- экстракт и сиф. печ. в 2 случ.;

р. отрицательная с карб. взв. sp. pall., В. Ruel., сиф. печ., по SG и полож. с- раіі.’экстр. в 14 сл. (L. 111 lat.—4, L. 11 lat.—2, psychos, epil.— 1, neurolues?—1 lup. vulg—1);

p. отрицательн. с карб. взв. sp. pall., B. R u e, сиф. печ. и положит, с алк. раіі,- экстр. и no SG в 2 сл. (L. heredit. t.?—1, hemiparesis—1),

р. отрицательная с карб. взв. sp. pall., В. Ruel., сиф. печ. и алк. pall.-экстр. и слабо положит. (+) по SG в 2 сл. (в одном из этих случаев сыворотка желтушная) р. отрицательная с карб. взв. sp. pall., В. R u e L, алког. pall, экстр., сиф. печ. по

SG и слабо положительная (++) с В. Ruеl. в 1 сл. (Lues visceral.?).

И здесь мы можем к группе совпавших реакций, подобно тому как это было сделано при рассмотрении результатов реакции с алкогольным pallida-экстрактом и со взвесью sp. pallida, отнести те случаи, которые дали совпадение реакций с экстрактом из сифилитической печени и рас  хождение с антигеном по Bordet-Ruel en s’y и по SG (всего 5 случаев), тогда число расхождений результатов уменьшится до 40. В'пользу антигена из карболизированной взвеси, как видно из приведенных данных, мы имеем 9 случаев с точно установленным сифилисом или подозрением на сифилис. Во всех этих случаях карболизированная взвесь  спирохэт оказалась чувствительнее Wa-антигенов (в 1, 2 раза), но, с дру  гой стороны, этот антиген является слабее простой взвеси спирохэт.

О расхождении результатов не в пользу реакций с карболизирован  ной взвесью (10 случаев—из них положительн. с алког. pall.-экстр. и сифилитич. печ.—2 сл., положит, с алког. pall.-экстр.—7 сл. с установ  ленным сифилисом или с подозрением на это заболевание и 1 случай L. heredit. t.? положительн. с алког. pall.-экстр. и по SG) нужно сказать, что они наблюдались также к тому моменту, когда вследствие нарастания антикомплементарных свойств антигена приходилось применять дозы, резко уменьшающие чувствительность реакции. Об остальных 3 случаях расхождения отрицательных реакций с карболизированпой взвесью спи  рохэт (2 случая слабо положительной (4-) реакции исключительно по SG и 1 случай слабо положительный (4—4) р. с антигеном' по В. Rue-lens’y) было уже упомянуто выше при разборе случаев расхождения в результатах опытов с алкогольным pallida-экстрактом и простой взвесью sp, pallida. С сыворотками лиц, не больных сифилисом, этот антиген во всех случаях дал отрицательный результат.

Для того чтобы резче подчеркнуть меньшую чувствительность карболизированной взвеси спирохэт по сравнению с простой взвесью спирохэт. мы приводим сравнительные данные, полученные при исследовании сывороток с этими двумя антигенами. Одновременно исследованы с обоими антигенами 271 сыворотка. Совпадение результатов: положительных 43, отрицательных 195, расхождение результатов—33, из них:

положительных со взвесью sp. pallida и отрицательн. с карболизир. взв. sp- pallida в26сл. (L. III lat.—2, L. II lat.—4, L?—3, neurolues—2, parai, progr.?—1, lup. vulg.—3).

отрицательн. со вз. sp. pallida и положительн. с карболизир. взв. sp. pallida в 7 случ. (L. III lat.—2).

Из приведенных опытов мы видим, что расхождение в результатах получено в 33 случаях, причем, если из 26 случаев положительных ре  акций с антигеном из простой взвеси sp. pallida отбросить 11 случаев с неизвестным для нас заболеванием и 3 случая с сомнительным результатом (+) реакций с сыворотками от больных с lupus vulgaris, то все же остается 8 случаев с несомненным заболеванием сифилисом п 4 случая подозрительных на это заболевание, которые дали положительную реакцию с простой взвесью sp. pallida и отрицательную с карболизированным антигеном. Эти случаи таким образом говорят ясно в пользу анти  гена из простой взвеси sp. pallida. Не останавливаясь более подробно на всех приведенных данных, так как уже указанные случаи достаточно подчеркивают большую чувствительность взвеси sp. pallida по сравнению -с антигеном из карболизированной взвеси, мы видим, таким образом, что эти наши опыты по своим результатам являются диаметрально противоположными данным Gaehtgens’a, которые были нами вкратце приведены в литературном обзоре. Кроме того мы не можем согласиться на основании наших наблюдений с оценкой Gaehtgens’a о пригодности такого рода антигенов из взвеси спирохэт для практических целей—серо- диагноза сифилиса. Дело в том, что, несмотря на большую чувствительность этих антигенов по сравнению с Wa-антигенами, применение их все же ограничено, так как начиная с 4 недели хранения, хотя бы и на холоду, эти антигены приобретают ясно выраженные антикомплементарные свойства, благодаря чему рабочая доза резко уменьшается—обычно до дозы, соответствующей разведению 1:35 и 1:40, что конечно резко отражается на чувствительности антигена, делая его непригодным для реакции связывания комплемента.

Предполагая, что нарастание антикомплементарных свойств у таких антигенов из взвеси спирохэт в большой степени зависит от веществ, по  являющихся в результате лизиса спирохэт, мы с целью устранения яв ления скорого растворения спирохэт применили для опытов связывания комплемента взвесь sp. pallida с формалином. Этим мы думали придать таким образом большую стойкость антигену из взвеси спирохэт.

в) Р. связывания комплемента с антигеном из взвеси sp. pallida с формалином. К обычной взвеси sp. pallida прибавлялся 40% формалин в количестве 0,5 ссm. на 100,0 ссm. взвеси и затем эта смесь нагревалась при 60° втечение 24 часов.

Всего было исследовано параллельно с WaR, SGR и с алкогольным pallida-экстрактом 541 сыворотка (в том числе 10 спинно-мозгов. жидк.)^? и получено полное совпадение результатов с WaR и по SG в 411 случ., а расхождение в 130 случ. Из 411 случаев полного совпадения мы имели:

положительных—52, отрицательных—359,

из них: резко положительных р.—27 из них от лиц не больных сифисом—40 сыв.

и с различ. степени положит, р.—25         

Не останавливаясь детально как на перечислении случаев расхождения, так и на разборе полученных данных с этим антигеном, так как и он оказался тоже не лишенным тех недостатков, о которых мы говорили в отношении простой и карболизированной взвеси спирохэт, мы можем все же указать на то, что этот антиген из взвеси спирохэт с формалином оказался чувствительнее предыдущих двух антигенов из взвеси спирохэт и чувствительнее Wa-аптигенов в 1,72 раза. Таким образом взвесь спирохэт с формалином по своей чувствительности в опытах связывания комплемента с сыворотками люэтиков оказывается почти одинаковой с алкогольным pallida-экстрактом. Однако и этот антиген из взвеси спирохэт с формалином оказался мало пригодным для серодиагноза сифилиса, так как в этом случае, несмотря на прибавление формалина, антикомплементарные свойства такой взвеси проявились также на 4 неделе хранения и в такой же степени, как это было установлено в отношении описанных уже 2 антигенов.

Итак на основании всех наших опытов с антигенами из взвеси sp. pallida наших I и II штаммов мы приходим, в противоположность заключению Gaelitgens’a, к выводу, что такого рода антигены могут быть применены для серодиагноза сифилиса лишь свежими и при хранении на холоду не более 3 недель, что для практической цели, конечно, является крайне сложным, а потому эти антигены, по нашему мнению, останутся для широкого применения непригодными. Другое дело—алкогольный pal- lida-экстракт I и II штаммов; здесь мы имеем ряд положительных свойств, которые дают основания надеяться, что такой антиген может быть широко применен и в повседневной практике серодиагноза сифилиса. Этот анти  ген значительно чувствительнее Wa-антигенов и SGR, благодаря чему реакции с этим pallida-экстрактом могут вполне заменить реакцию с 2—3 Wa антигенами и SGR. Так как этот антиген представляет собой экстракт из sp. pallida, то более высокая чувствительность его может быть объяснена, принимая во внимание и прежние наши наблюдения с истощением сывороток люэтиков. специфичностью этого антигена. Благодаря этим свойствам, как нам кажется, может быть обнаружено больше случаев сифилиса, требующих лечения. В отношении стойкости этот антиген, по-видимому, не обладает недостатками. Само собой разумеется, необходимо еще дальнейшее подробное изучение ценности такого алкогольного спирохэтного антигена, в особенности увязывая результаты исследований с тщательными клиническими наблюдениями.

Кроме всего сказанного, наблюдения над всеми спирохэтнымяанти  генами в наших многочисленных опытах связывания комплемента с сыворотками люэтиков и не больных сифилисом дают дополнительное доказательство в пользу специфичности реагинов в отношении sp. pallida_r г. е. они говорят с большой вероятностью за то, что в образовании реактивных тел играют роль одни спирохэты.

Выводы.

1. Антиген из взвеси sp. pallida в опытах связывания комплемента с сыворотками людей, больных сифилисом, оказались чувствительнее Wa-антигенов, но слабее алкогольного pallida-экстракта.
2. Простая взвесь sp. pallida является таким ясе хорошим антигеном, как и карболизированная взвесь. Это наблюдение резко противоречит данным Gaelitgens'a.
3. Антигены из взвеси sp. pallida не стойки, а потому мало при годны для практических целей—серодиагноза сифилиса.
4. Алкогольный pallida-экстракт в значительной степени чувствительнее оргапоэкстрактов. применяемых при Wall и SGR.
5. В виду своей большей чувствительности и стойкости алкогольный pallida-экстракт может быть рекомендован для серодиагноза сифилиса.
6. Положительные результаты опытов связывания комплемента сыворотки люэтиков со всеми антигенами из sp. pallida и большая чувствительность этих антигенов говорят за то, что в образовании Wa-реэгинов играют роль, по-видимому, одни спирохэты.