Application of thiamine-cystine-glutamine agar with feed yeast extract for the cultivation and isolation of meningococci

Abstract

Microbiological diagnosis of meningococcal infection is difficult because of the sensitivity of meningococcus to cultivation conditions [4, 5a].

Full Text

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции трудна из-за чувствительности менингококка к условиям культивирования [4, 5а]. В связи с повышенной чувствительностью менингококков к составу питательных сред и недостаточной изученностью их потребностей в широкой практике до настоящего времени для культивирования менингококков применяют следы на основе полноценных пищевык продуктов: мяса [6] и рыбы [1, 7]. В этих средах в качестве факторов роста чаще всего используют сыворотку [5а, 8] и кровь животных. В то же время известно, что при подборе оптимального соотношения аминокислот, минерального состава и факторов роста возмозжно выращивание менингококков на средах без добавления сыворотки животных [9а, Ь, 10].

Г. Р. Гаджиева (1975) предложила сухую полусинтетическую среду тиамин-цистин-глутаминовый агар (ТЦГА). Ее испытания в очагах менингококковой инфекции по сравнению со средой Тайера—Мартина, широко используемой в зарубежных странах, показали пригодность ТЦГА для выделения менингококка [3, 8]. Однако на этой среде свежевыделенные штаммы менингококков растут в виде мелких пылевидных колоний.

Целью настоящей работы было изучение тиамин-цистин-глутаминового агара, в состав которого включен экстракт кормовых дрожжей как источник факторов роста. В работе были использованы тиамин-цистин-глутаминовый агар, выпускаемый Дагестанским НИИ питательных сред, и полужидкие варианты, полученные от* Г. Р; Гаджиевой (ДагНИИПС), а также кровезаменитель с истекшим сроком' годности — аминопептид, представляющий собой ферментативный гидролизат крови животных. В качестве стимулятора роста нейссерий применяли экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) производства Центрального НИИВС им. И. И. Мечникова. Контрольной средой служил 20% сывороточный агар Хеттингера: плотный — при изучении плотных экспериментальных сред и 0,1% агар — при исследовании транспортных сред.

Среды испытаны с 9 музейными (получены из ГИСК им. Л. А. Тарасевича), 40 свежевыделенными штаммами менингококков и 10 штаммами непатогенных нейссерий. Качество сред оценивали по среднему числу и размерам выросших колоний, чувствительности, эффективности сред, параметрам роста? микроорганизмов в процессе их культивирования, сохранению биологических свойств тест-штаммов, по высеваемости. При испытаниях ТЦГА с ЭКД установлено, что оптимальной концентрацией является 0,5% ЭКД. Добавление ЭКД в состав ТЦГА в концентрации 0,5% и 0,25% увеличивало количество выросших колоний в 1,5 (Р<0,01) и 1,2 (P<Z 0,05) раза соответственно и приближало биологические показатели к контрольным на сывороточном агаре (табл. 1)«

Таблица1

Культивация менингококков на тиамин-цистин-глутаминовом агаре с 0,5% экстрактом кормовых дрожжей

	Среды	Число колоний	Эффективность, млн/л	Чувствительность среды	Размеры колоний, мм
ТЦГА+ЭКД Сывороточный	(опыт) . ... . агар Хеттингера	436±66	3,9±0,1	10—6	2,2±0,1
(контроль)		445±64	3,9±0,3	10—6	2,3±0,1

Примечание. Приведены средние данные опытов с 5 штаммами менингококков в 3 повторностях.

Менингококки на ТЦГА с добавлением ЭКД вырастали в S-форме и сохраняли типичные культуральные, морфологические, биохимические и серологические свойства. При испытании ТЦГА с ЭКД в очагах менингококковой инфекции для выявления бактерионосительства менингококков среди контактных высеваемость на опытной среде составила 2,8±0,7%, на контрольной — 3,5±0,8%. Разница статистически недостоверна.

Полужидкий ТЦГА с ЭКД и полужидкий ТЦГА с заменой пептона на аминопептид с ЭКД обеспечивали рост культур на одном уровне с полужидким сывороточным агаром Хоттинг,ера. Предложенные полужидкие среды на основе ТЦГА были апробированы в бактериологических лабораториях г. Казани при обследовании контактных лиц на . бактерионосительство в . очагах менингококковой инфекции. Время от забора до доставки в лабораторию составляло 3—5 ч. Высевы делали через 20—24 ч инкубации, при температуре 37°.

Как видно из табл. 2 и 3, высеваемость менингококков с испытуемых сред была на одно1ч уровне с контрольными. Параллельных положительных находок на ТЦГА, в котором пептон был заменен на аминопептид с ЭКД, оказалось больше, чем при использовании ТЦГА с ЭКД. По биологическим свойствам выделенные нейссерии не отличались от таковых из контрольных сред.

Таким образом, показана целесообразность применения тиамин-цистин-глутаминового агара с экстрактом кормовых дрожжей для выделения и* культивирования менингококков, а также возможность замены пептона на аминопептид с истекшим сроком годности в 0,1% полужидком ТЦГА для транспортировки первичного материала.

Таблица 2

Результаты посева материала из носоглотки на полужидкий тиамин-цистин-глутами-
новый агар с экстрактом кормовых дрожжей и сывороточный агар Хоттингера

Выделенные культуры	Количество анализов	Количество выделенных культур	Выделено на средах				Число параллельных находок		Р
			контрольной		испытуемой
			абс. *	%	абс.	%	абс.	%
Менингококки	389	23	19	4,9±1,1	17	4,4±1,0	13	56,5±2,5	>0,05
Непатогенные нейссерии .	494	J25	119	24,1 ±1,9	102	20,6±1,8	96	76,8±1,9	>0,05

Таблица 3

Результаты посева материала из носоглотки на полужидкий тиамин-цистин-глутаминовый агар, в котором пептон заменен на аминопептид с экстрактом кормовых дрожжей, и контрольную среду

Выделенные культуры	Количество анализов	Количество выделенных культур	Выделено на средах				Число параллельных находок		Р
			контрольной		испытуемой
			абс.	%	абс.	%	абс.	%
Менингококки	494“	59	54	10,9±1,4	50	10,1 ±1,4	47	79,6±1,8	>0,05
Непатогенные нейссерии .	494	125	119	24,Ъ±1,9	102	20,6±1,8	96	76,8±1,9	>0,05

Примечание. Контрольной средой служил сывороточный агар Хоттингера.