Modification of Mallory method for dyeing connective tissue fibers

Abstract

Among the modern methods of differential coloring of connective tissue elements in organs, the Mallory method *) according to the brightness and electivity of the pictures achieved with its help, undoubtedly should be put on one of the first places.

Full Text

Модификація способа Mallory для окраски волоконъ соединительной ткани.

Приватъ-доцента А. Н. Миславскаго.

Среди современныхъ методовъ дифференціальной окраски элементовъ соединительной ткани въ органахъ способъ Mallory ^*) по яркости и элективности достигаемыхъ съ его помощью картинъ безспорно долженъ быть поставленъ на одно изъ первыхъ мѣстъ. Какъ извѣстно, способъ этотъ заключается въ слѣдующемъ:

Освобожденный отъ параффина (или тонкій целлоидиновый) срѣзъ предварительно окрашивается 1—3 минуты въ 0,05%— 0,1% водномъ растворѣ кислаго фуксина, затѣмъ быстро прополаскивается дестиллированной водой и въ теченіе нѣсколькихъ минутъ обрабатывается 1% растворомъ фосфорно - молибденовой кислоты. Далѣе препаратъ опять таки промывается водою и окрашивается отъ 2-хъ до 20 минутъ ^**) смѣсью Mallory.

Anilinblau 0,5

Orange G

 Ac. oxal. cryst. aa 2,0

Aqu. destill. 100,0

Потомъ слѣдуетъ быстрое споласкиваніе краски водой, быстрое обезвоживаніе въ 95° спиртѣ, ol. origani cret. и, наконецъ, бальзамъ.

 На полученныхъ такимъ способомъ препаратахъ волокна соединительной ткани представляются ярко окрашенными въ красивый синій цвѣтъ, даже въ мельчайшихъ ихъ развѣтвленіяхъ; причемъ эта яркая ихъ окраска прекрасно выдѣляется на красно-оранжевомъ фонѣ протопластовъ.

Однако-же только что описанный методъ при всѣхъ его достоинствахъ является нелишеннымъ и нѣкоторыхъ недостатковъ, и притомъ настолько непріятныхъ, что они сильно мѣшаютъ широкому его распространенію въ лабораторной техникѣ. Недостатки эти сводятся, во-первыхъ, къ быстрому выцвѣтанію изъ препарата окраски кислымъ фуксиномъ,—нестойкость, вообще характеризующая эту прекрасную анилиновую краску, и, во-вторыхъ, къ недостаточно контрастной окраскѣ ядеръ и тѣла протопластовъ, принимающихъ различные оттѣнки оранжево-краснаго тона, благодаря чему препараты часто пріобрѣтаютъ какъ бы „смазанный” видъ.

Поэтому мы и находимъ въ послѣднее время въ литературѣ попытки такъ модифицировать способъ Mallory, чтобы возможно было использовать его достоинства, не рискуя его недостатками.

Такъ М. Heidenhain ^*) предлагаетъ замѣнять Fuchsin S введеннымъ имъ въ микроскопическую технику Azo-сагшін’омъ В, краской, съ примѣненіемъ которой достигается тотъ-же эффектъ, что И при кисломъ фуксинѣ, однако-же не такъ выцвѣтающей. Очень красивые препараты М. Heidenhain получаетъ также и при замѣнѣ фуксина борнымъ или квасцевымъ карминомъ, дающими яркій желтовато-розовый оттѣнокъ протопластамъ. Само собой разумѣется, что стойкость такихъ карминовыхъ препаратовъ находится внѣ всякаго сомнѣнія. Самую смѣсь Mallory авторъ разводитъ до 6 разъ дестиллированной водой, находя, что тогда возможно болѣе продолжительное дѣйствіе краски на препаратъ безъ боязни перекрасить и болѣе элективная окраска волоконъ соединительной ткани.

Еще ранѣе въ нашей лабораторіи Софотеровъ ^*), съ цѣлью получить дифференціальную окраску ядеръ клѣточныхъ элементовъ при способѣ Mallory, предварительно прокрашивалъ срѣзы изъ лимфоидныхъ органовъ гематоксилиномъ Делафильда, а затѣмъ уже примѣнялъ къ нимъ окраску Mallory, иногда замѣняя кислый фуксинъ эозиномъ.

Въ этой замѣткѣ я желалъ бы сообщить еще объ одной модификаціи разсматриваемаго нами метода, которую я часто употребляю въ послѣднее время въ нашей лабораторіи.

Дѣло идетъ о комбинаціи окраски волоконъ соединительной ткани по способу Mallory съ предварительной обработкой срѣзовъ желѣзнымъ гематоксилиномъ по M. Heidenhainiy. Препараты окрашиваются сначала обычнымъ способомъ жел. гематоксилиномъ, причемъ дифференцировка ядеръ не доводится до самаго конца. Затѣмъ слѣдуетъ обработка срѣзовъ фосфорно-молибденовой кислотой и жидкостью Mallory. На окрашенныхъ такимъ образомъ препаратахъ ядра протопластовъ представляются черными или коричневыми съ ясно выраженной хроматиновой структурой, тѣла ихъ окрашиваются въ буровато-сѣрый или желтоватый цвѣтъ, а соединительная ткань (волокна), слизь и основное вещество хряща принимаютъ различные оттѣнки синяго цвѣта. Что-же касается, наконецъ, до эластическихъ элементовъ (пленки въ артер., эласт. волокна сѣтчатаго хряща), то они представляются окрашенными въ интензивно-коричневый цвѣтъ.

Вся процедура окрашиванія ведется въ слѣдующей послѣдовательности:

Освобожденый отъ параффина, наклеенный срѣзъ изъ воды переносится въ

1) 2,5 % растворъ желѣзныхъ квасцовъ—отъ 12 до 24 час.

2) Промываніе въ тек. водѣ, споласкиваніе дестиллиров. водой.

3) 0,5°/_о водный растворъ гематоксилина—отъ 12 до 24 час.

4) Дифференцированіе срѣза въ 2,5% раств. жел. квасцовъ подъ контролемъ микроскопа.

5) Тщательное промываніе водопр. водой, споласкиваніе дестиллиров. водой.

6) Обработка 1% воднымъ растворомъ фосфорно-молибденовой кислоты-—10—15 мин.

7) Промыв, въ дестилл. водѣ, окраска смѣсью Mallory отъ 2-хъ до 5 минутъ.

8) Споласкиваніе краски дестилл. водой, быстрое обезвоживаніе спиртомъ, просвѣтленіе въ оригановомъ маслѣ и заключеніе въ бальзамъ.

^*) Мallоrу, Т. В. А contribution to staining methods etetr. Journ. Exp. Med. V. 5. 1900. Цитировано по рефер. Schieferdecker’a въ Zeitschr. fur wissensch. Mikroskopie. 1901.

^**) Обыкновенно отъ 2-хъ до 3-хъ минутъ.

^*) Мallоrу, Т. В. А contribution to staining methods etetr. Journ. Exp. Med. V. 5. 1900. Цитировано по рефер. Schieferdecker’a въ Zeitschr. fur wissensch. Mikroskopie. 1901.

^**) Обыкновенно отъ 2-хъ до 3-хъ минутъ.

^*) М. Heidenhain. fiber die Bearbeitang der Sehnen za Kurszwecken etctr. Zeitschr. far wise. Mikroskopie 1913.

^*) Софотеровъ. Медальная работа относительно етромы почки 1911.