Lymphocyte-platelet adhesion and aggregation of platelets in patients with erysipelas

Full Text

В патогенезе рожи важную роль играют вторичный иммунодефицит и гиперкоагуляционный синдром [1, 4, 5]. Известно, что иммунитет и гемостаз составляют единую клеточно-гуморальную систему защиты [6, 7]. При этом тромбоциты вовлекаются не только в реакции системы гемостаза, но и в иммунологическую защиту, взаимодействуя с лимфоцитами [2, 3, 10]. Тромбоциты способствуют миграции лимфоцитов и их фиксации на повреждённой поверхности сосудистой стенки, принимая участие в развитии воспаления, тромбоза, иммунных реакций, репарации [8, 9, 11]. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия (ЛТА) служит показателем иммунологической реактивности при патологических процессах [2]. Целью настоящего исследования стало изучение ЛТА у больных различными формами рожи в процессе лечения. В работе представлены результаты обследования и лечения 90 больных рожей. Диагноз выставлен на основании клинико-анамнестических данных согласно классификации В.Л. Черкасова (1986). У 20 пациентов диагностирована эритематозно-буллёзная форма рожи, у 20 - эритематозная. У всех больных было среднетяжёлое течение первичной рожи с локализацией на нижних конечностях в пределах одной анатомической области. Критериями исключения служили распространённость процесса, осложнённое течение рожи, возраст старше 55 лет, тяжёлая сопутствующая соматическая патология. Контрольную группу, сопоставимую по полу и возрасту, составили 55 здоровых человек. Больных по кратности заболевания разделили на две группы: основную (40 человек с первичной формой рожи) и сравнения (50 человек с рецидивирующей рожей). У 20 пациентов основной группы была диагностирована эритематозно-буллёзная форма рожи, у 20 - эритематозная. Распределение больных по полу: 24 (60%) женщины и 16 (40%) мужчин; по возрасту: 45-48 лет - 6 (14%) человек, 49-52 года - 7 (18%), 53-54 года - 27 (68%) больных. Среди пациентов с эритематозной формой рожи мужчин было 9 (45%), с эритематозно-буллёзной - 8 (40%), женщин соответственно было 11 (55%) и 12 (60%). В группу сравнения вошли 50 пациентов с рецидивирующей рожей, по 25 человек с эритематозно-буллёзной и эритематозной формами заболевания, в возрасте 45-55 лет, на долю мужчин приходилось 42%. В обеих группах больные госпитализированы в течение 1-3-х суток от начала клинических проявлений болезни. Все получали традиционную базисную терапию с учётом формы и тяжести заболевания, включавшую бензилпенициллин (в суточной дозе 6 млн ЕД внутримышечно) или цефалоспорины I поколения. В качестве патогенетической терапии применяли дезинтоксикационные, противовоспалительные и десенсибилизирующие средства. Местно проводили ультрафиолетовое облучение, при наличии обширных эрозий поражённого участка накладывали повязки с нитрофуралом. Для оценки гемостаза исследовали кровь, стабилизированную 3,8% раствором натрия цитрата в соотношении 1:9. Для агрегации применяли цитратную плазму, богатую тромбоцитами. В работе использовали агрегометр «БИОЛА» (РГНЦ, Москва). Агрегацию тромбоцитов проводили турбодиметрическим методом с использованием в качестве индукторов агрегации аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 2,5 мкМ. Кривую агрегации оценивали по флюктуации светоотражения агрегатов и светопропусканию суспензии. В агрегатограмме определяли амплитуду и наклон кривой агрегации. Определение показателя ЛТА осуществляли по методу Ю.А. Витковского и соавт. (1999). Свежую гепаринизированную кровь обследуемых больных наслаивали на градиент фиколл-урографин (плотность 1,077), и выделяли лимфоциты. Собирали интерфазное кольцо, содержащее клетки и тромбоциты, однократно промывали фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3-4 мин. Надосадочную жидкость сливали, осадок микроскопировали в камере Горяева. Подсчитывали количество лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов на 100 клеток. Степень адгезии определяли как количество тромбоцитов, адгезированных на поверхности одного лимфоцита. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента, вычислен показатель статистической значимости различий. Обработка параметров выполнена программой «Microsoft Exсel». Мы не выявили у больных рожей существенных изменений в содержании абсолютного количества лимфоцитов в начале заболевания по сравнению с нормой (табл. 1). Однако показатель ЛТА уже в эти сроки резко снижался. Уменьшение способности лимфоцитов к адгезии тромбоцитов особенно сильно проявлялось при рецидидивирующем течении заболевания. Так, у больных с эритематозно-буллёзной формой показатель уменьшался до 2,0±0,3%, с эритематозной - до 3,0±0,3%, тогда как у здоровых он составлял 14,0±1,0% (р1 <0,001). Соответственно этому изменялось абсолютное количество лимфоцитов, присоединивших к себе тромбоциты: у больных 0,10±0,02±109/л и 0,16±0,03±109/л, а у здоровых 0,69±0,02±109/л (р1 <0,001). Одновременно с этим уменьшалось среднее количество тромбоцитов, адгезированных на поверхности лимфоцита (степень адгезии) в контроле с 3,2±0,1 до 1,2±0,05 при эритематозно-буллёзной форме и до 1,3±0,06 при эритематозной форме заболевания (р1 <0,001). На 12-е сутки лечения мы также не заметили достоверных изменений абсолютного количества лимфоцитов по сравнению с началом заболевания и со здоровыми лицами (р1 >0,05, р2 >0,05). В то же время существенно увеличивался показатель ЛТА у больных с эритематозной формой рожи до 8,0±1,0%, или 0,33±0,06±109/л, и в меньшей степени у пациентов с эритематозно-буллёзной формой болезни - до 5,0±0,4%, или 0,19±0,04±109/л (р2 <0,001). При этом степень адгезии также увеличивалась до 1,8±0,07 и 2,2±0,09 соответственно (р2 <0,001). При обследовании пациентов с рецидивирующей рожей выявлено значительное снижение способности лимфоцитов к взаимодействию с тромбоцитами по сравнению с первичной рожей, более выраженное при эритематозно-буллёзной форме. Для изучения возможной прогностической ценности ЛТА мы сравнивали значения, полученные перед выпиской из стационара, у больных первичной и рецидивирующей рожей. Выявлено, что более высокие показатели ЛТА зарегистрированы у больных, перенёсших первичную форму рожи. При этом степень адгезии также увеличивалась более значимо относительно группы больных с рецидивирующей рожей. У пациентов с первичной рожей при поступлении повышалась спонтанная агрегация тромбоцитов по сравнению со здоровыми лицами, которая подтверждалась изменением кривой по степени агрегации и светопропускания (p1 <0,05) (табл. 2). Однако на 7-е сутки наблюдения параметры кривой агрегации тромбоцитов максимально приблизились к таковым у здоровых людей, что повторялось на 12-е сутки (p1 >0,05). У пациентов с первичной эритематозной рожей при поступлении увеличивалась не только спонтанная, но и АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов. При этом подъём максимальной амплитуды и максимального наклона одинаково повторялись для кривой, зарегистрированной по степени агрегации и степени светопропускания (p1 <0,05). К концу 1-й недели наблюдения характер агрегатограмм пациентов соответствовал здоровым людям (p1 >0,05). У больных с рецидивирующей рожей признаки гиперагрегации тромбоцитов были более выражены. Это относится не только к показателям спонтанной и АДФ-индуцированной агрегации, но и к продолжительности самого синдрома гиперагрегации тромбоцитов. Так, усиление спонтанной и АДФ-индуцированной агрегации было отмечено в течение более продолжительного периода времени (p1 <0,05), чем у пациентов с первичной формой (табл. 3). У больных рожей в первые дни от начала клинических проявлений развивается гиперагрегация тромбоцитов, характер и продолжительность которой зависят от формы заболевания. При первичном течении рожи она появляется в течение 1-й недели от начала заболевания, а при рецидивирующем - в течение 2 нед. Какова же природа ЛТА и её биологическое значение при роже? Как установлено Ю.А. Витковским и соавт. [3], Т-хелперы (CD4+) способны к спонтанному розеткообразованию с интактными тромбоцитами, а интерлейкин-2 и интерлейкин-1b повышают эту способность у Т-хелперов и индуцируют её у натуральных киллеров (CD16+). Уменьшение показателя и степени ЛТА при роже - ранний признак развития вторичной иммунологической недостаточности, когда количество клеток ещё остаётся в пределах нормальных значений, а его повышение - свидетельство восстановления функций иммунной системы. Таким образом, изменения лейкоцитарно-тромбоцитарной адгезии при роже служат ярким примером тесной взаимосвязи ведущих патогенетических звеньев - иммунитета и гемостаза. ВЫВОДЫ 1. При роже снижается способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты. Тяжёлое течение (эритематозно-буллёзная форма) сопровождается большими сдвигами параметров ЛТА, а их динамика позволяет оценить эффективность лечения. 2. У больных рожей в первые дни от начала клинических проявлений развивается гиперагрегация тромбоцитов, характер и продолжительность, которой зависят от формы заболевания. При первичном течении рожи она выявляется в течение 1-й недели от начала заболевания, а при рецидивирующем - в течении 2 нед. Таблица 1 Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных рожей (M±m) Наблюдаемые группы До лечения После лечения Лимфоциты, ×109/л ЛТА Степень адгезии Лимфоциты, ×109/л ЛТА Степень адгезии отн., % абс., ×109/л отн., % абс., ×109/л Здоровые (n=55) 2,04±0,4 14,0±1,0 0,69±0,02 3,2±0,1 - - - - Первичная рожа, эритематозно-буллёзная форма (n=20) 1,95±0,4, р1 >0,05 2,0±0,3, р1 <0,001 0,10±0,02, р1 <0,001 1,2±0,05, р1 <0,001 2,57±0,3, р1 >0,05, р2 >0,05 5,0±0,4, р1 <0,001, р2 <0,001 0,19±0,04, р1 <0,001, р2 <0,001 1,8±0,07, р1 <0,001, р2 <0,001 Первичная рожа, эритематозная форма (n=20) 1,89±0,4, р1 >0,05 3,0±0,3, р1 <0,001 0,16±0,03, р1 <0,001 1,3±0,06, р1 <0,001 2,44±0,4, р1 >0,05, р2 >0,05 8,0±1,0, р1 <0,001, р2 <0,001 0,33±0,06, р1 <0,001, р2 <0,001 2,2±0,09, р1 <0,001, р2 <0,001 Примечание: ЛТА - лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия; р1 - статистическая значимость различий по сравнению со здоровыми; р2 - статистическая значимость различий по сравнению с больными. Таблица 2 Характеристика кривых агрегации тромбоцитов у больных первичной рожей (М±m) Показатель Здоровые, n=55 Пациенты с первичной рожей, n=40 При поступлении 7-е сутки 12-е сутки Спонтанная агрегация Максимальная амплитуда, отн. ед. 0,68±0,10 1,3±0,16, p1 <0,05 0,78±0,11, p1 >0,05, р2 <0,05 0,72±0,13, p1 >0,05, р2 <0,05 Максимальный наклон, отн. ед. в минуту 0,21±0,01 0,51±0,04, p1 <0,05 0,24±0,03, p1 >0,05, p2 <0,05 0,22±0,01, p1 >0,05, р2 <0,05 АДФ-индуцированная агрегация Максимальная амплитуда, отн. ед. 4,4±1,5 8,6±1,2 p1 <0,05 5,4±1,3 p1 >0,05 р2 <0,05 4,6±1,2 p1 >0,05 p2 <0,05 Максимальный наклон, отн. ед. в минуту 11,0±1,9 18,6±2,1 p1 <0,05 13,1±1,8 p1 >0,05 p2 <0,05 12,4±2,5 p1 >0,05 p2 <0,05 Примечание: p1 - статистическая значимость различий по сравнению со здоровыми людьми; p2 - статистическая значимость различий по сравнению исходным уровнем; АДФ - аденозиндифосфат. Таблица 3 Характеристика кривых агрегации тромбоцитов у больных рецидивирующей рожей (М±m) Показатель Здоровые волонтёры, n=55 Пациенты с рецидивирующей формой рожи, n=50 При поступлении 7-е сутки 12-е сутки Спонтанная агрегация Максимальная амплитуда, отн. ед. 0,68±0,10 1,5±0,18, p1 <0,05 1,22±0,13, p1 <0,05, р2 >0,05 0,79±0,15, p1 >0,05, р2 <0,05 Максимальный наклон, отн. ед. в минуту 0,21±0,01 0,64±0,05, p1 <0,05 0,48±0,04, p1 <0,05, p2 >0,05 0,28±0,01, p1 >0,05, р2 <0,05 АДФ-индуцированная агрегация Максимальная амплитуда, отн. ед. 4,4±1,5 9,8±1,9, p1 <0,05 7,5±1,6, p1 <0,05, р2 >0,05 4,9±1,5, p1 >0,05, p2 <0,05 Максимальный наклон, отн. ед. в минуту 11,0±1,9 19,7±2,6, p1 <0,05 16,8±1,9, p1 <0,05, p2 >0,05 12,8±2,7, p1 >0,05, p2 <0,05 Примечание: p1 - статистическая значимость различий по сравнению со здоровыми людьми; p2 - статистическая значимость различий по сравнению исходным уровнем; АДФ - аденозиндифосфат.

About the authors

A N Emel’yanova

Chita State Medical Academy, Chita, Russia

Email: alvina1963@yandex.ru

Yu A Vitkovskiy

Chita State Medical Academy, Chita, Russia

References

Supplementary files