Monitoring of the activity of antibodies against hantavirus in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome

Cover Page


Cite item

Full Text

Abstract

Aim. To determine the diagnostic significance of antibodies to Hantavirus in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome, depending on the period and the severity of the course of disease. Methods. Studied was the content of specific antibodies (immunoglobulins G) to hantaviruses in blood serum in the rapidly precipitating and slowly precipitating circulating immune complexes by enzyme immunoassay using a test system «Hantagnost» in modification. Studied were 226 patients with hemorrhagic fever with renal syndrome (24 patients with mild form, 105 with moderate and 97 patients with severe form of the disease) in the febrile, oliguric and polyuric periods. Results. Specific antibodies (immunoglobulins G) were present already in the febrile period of the disease in all (100%) patients in the serum and in the rapidly precipitating circulating immune complexes. Antibodies in the slowly precipitating complexes in the febrile period were found only in patients with severe and moderate forms of hemorrhagic fever with renal syndrome, in subsequent periods they were found significantly more frequently in patients with a severe course of disease. Severe forms of hemorrhagic fever with renal syndrome caused the most pronounced serologic response with a maximal content of immunoglobulins G to Hantaviruses in the oliguric period. During the period of polyuria the severe forms of hemorrhagic fever with renal syndrome were accompanied by significantly lower levels of free circulating antibodies and a high level of bound antibodies compared with moderate and mild forms of the disease. Conclusion. In patients with hemorrhagic fever with renal syndrome anti-Hantavirus antibodies (immunoglobulins G) in serum and in the rapidly precipitating immune complexes are detected already at the early stages of the disease in 100% of the cases; the frequency of detection of antibodies in the slowly precipitating circulating immune complexes in the early stages depends on the severity of disease: they are present in 100% of patients with a severe form of the disease, in 50% - with the moderate form, and with the mild form - can not be detected.

Full Text

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) - одно из распространённых природно-очаговых заболеваний. Заболеваемость неуклонно растёт, поражая людей молодого, трудоспособного возраста, что наносит значительный экономический и социальный ущерб. Течение ГЛПС характеризуется большим разнообразием клинических проявлений, поражением многих органов и систем. В связи с этим своевременная диагностика ГЛПС зачастую затруднена, что приводит к диагностическим ошибкам, а следовательно, к поздней госпитализации больных и ухудшению прогноза болезни. Всё это свидетельствует о необходимости разработки новых подходов к специфической диагностике для оценки степени тяжести и прогнозирования течения заболевания. Известно, что ГЛПС сопровождается интенсивным синтезом антител против антигенов хантавируса и образованием иммунных комплексов [4, 5]. Несомненно, иммунные комплексы играют важную роль в патогенезе ГЛПС, особенно при тяжёлом течении заболевания. Существенным фактором повреждения эндотелия сосудов считают циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), оседающие на цитоплазматических мембранах с последующим развитием деструктивного иммунокомплексного панваскулита [5]. Нередко специфические осложнения при ГЛПС в виде формирования почечной недостаточности и хронической патологии у реконвалесцентов оказываются патогенетически связанными с формированием иммунных комплексов [3]. Качественный и количественный состав ЦИК во многом определяет характер и исход иммунологического разрешения ГЛПС. Достоверность обнаружения вирус-специфических антител может быть существенно повышена только при их параллельном выявлении в свободном и связанном виде в ЦИК, потому что не всегда существует корреляция между содержанием свободных и связанных в ЦИК антихантавирусных антител. Однако в доступной литературе мы не нашли работ по изучению специфических антихантавирусных антител в составе ЦИК. Целью настоящего исследования было изучение динамики образования антител к хантавирусам и определение их диагностической значимости у больных ГЛПС различной степени тяжести. В течение 2006-2009 гг. были обследованы 226 больных ГЛПС. В зависимости от тяжести течения болезни все больные были разделены на три группы: первую составили 24 человека с лёгким течением болезни, вторую - 105 человек со среднетяжёлым течением, третью - 97 человек с тяжёлым течением ГЛПС (табл. 1). В контрольную группу вошли 53 практически здоровых человека (добровольные доноры), в анамнезе у которых не было указаний на перенесённую ГЛПС. Достоверных различий по возрасту в группах не было. ГЛПС диагностировали на основании общепринятых клинических, эпидемиологических, лабораторных и инструментальных данных, для верификации диагноза проводили реакцию непрямой иммунофлюоресценции в парных сыворотках. Тяжесть течения ГЛПС оценивали по следующим критериям: лёгкое течение - лихорадка до 38 °С, олигурия до 900 мл/сут, микропротеинурия, микрогематурия, нормальное содержание мочевины плазмы крови, повышение концентрации креатинина до 130 мкмоль/л; среднетяжёлое течение - лихорадка до 39,5 °С, головная боль, частая рвота, интенсивная боль в области поясницы, боли в животе, геморрагическая сыпь, олигурия до 300 мл/сут, концентрация мочевины в плазме крови до 18 ммоль/л, креатинина - до 300 мкмоль/л; тяжёлое течение - осложнения в виде инфекционно-токсического шока и острой сосудистой недостаточности, геморрагический синдром, олигурия менее 300 мл/сут или анурия, концентрация мочевины в плазме крови свыше 18,5 ммоль/л, креатинина - более 300 мкмоль/л (Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 2009). Для определения иммуноглобулинов G (IgG) к хантавирусу в сыворотке крови использовали иммуноферментную тест-систему «Хантагност» (производство Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН). С целью оптимизации метода получения ЦИК из сывороток крови использовали 7% полиэтиленгликоль с молекулярным весом 6000 (ПЭГ-6000 Serva) для определения содержания ЦИК различной молекулярной массы по оптической плотности [1]. При диск-электрофорезе в полиакриламидном геле с 7% раствором полиэтиленгликоля выделено две фракции: быстро преципитирующие (18 ч - ЦИК-1) и медленно преципитирующие (72 ч - ЦИК-2) ЦИК, которые были представлены на электрофореграммах иммуноглобулиновой зоной и не содержали примесей белков плазмы крови. Статистическую обработку данных проводили на персональном компьютере IBM PC «Pentium» с использованием пакета прикладных программ «Statistica 5.5». Изменения признавали статистически значимыми при p <0,05. Специфические антитела выявлялись уже в лихорадочный период заболевания у всех (100%) больных в сыворотке крови и составе ЦИК-1 (рис. 1). Этот факт доказывает, что иммунологический ответ при ГЛПС формируется уже в самом начале заболевания. Антитела в составе ЦИК-2 были выявлены в лихорадочном периоде у 100% больных тяжёлой и у 50% среднетяжёлой формой ГЛПС. В группе больных с лёгким течением заболевания специфические антитела в составе ЦИК-2 выявлялись на более поздних сроках (начиная с олигурического периода) и лишь у 41,6% больных. Вероятно, наличие специфических антител в составе ЦИК-2 связано с формированием более тяжёлого течения ГЛПС. Во всех изучаемых группах больных было проведено количественное определение антихантавирусных антител в сыворотке крови и составе ЦИК. Результаты анализов показали, что содержание антител в разных группах существенно различалось. При изучении свободно циркулирующих специфических антител в сыворотке крови выявлено, что во всех наблюдаемых группах наименьшее их содержание было зарегистрировано в лихорадочном периоде заболевания. Средний уровень антител составил 1,42±0,03 ед. опт. пл. (табл. 2). В олигурическом периоде максимальное содержание антител было отмечено у больных с тяжёлой формой: в среднем 2,48±0,13 ед. опт. пл. (от 0,38 до 3,45 ед. опт. пл). При лёгкой и среднетяжёлой формах болезни уровень антител не превышал 2,0±0,1 и 2,02±0,1 ед. опт. пл. соответственно (см. табл. 2). В полиурическом периоде болезни во всех группах зарегистрировано достоверное снижение количества антител. Так, при лёгкой и среднетяжёлой формах отмечено достоверное снижение уровня антител до 1,76±0,09 и 1,89±0,08 ед. опт. пл. соответственно. Тяжёлые формы ГЛПС в полиурическом периоде сопровождались более выраженным снижением количества антител, средний уровень которых не превышал 1,2±0,02 ед. опт. пл. и был ниже, чем при лёгком и среднетяжёлом течении (р <0,001; р <0,001). Количество антител в составе ЦИК было значительно ниже по сравнению со свободными антителами (табл. 3). Антитела в составе ЦИК-1 выявлены во всех группах (100%). Их средний уровень в лихорадочном периоде составил 2,1±0,1 ед. опт. пл. без достоверных различий в сравниваемых группах. Количество антихантавирусных антител в составе ЦИК-2 сыворотки крови в лихорадочный период болезни было достоверно выше в группе больных с тяжёлым течением болезни. Сопоставление количественных показателей антихантавирусных антител с долей их участия в формировании ЦИК-1 и ЦИК-2 у больных ГЛПС указало на соответственно высокие уровни их у больных с тяжёлой формой заболевания (см. табл. 3). При лёгком течении ГЛПС содержание антител в составе ЦИК в отличие от количества антител в сыворотке крови в динамике достоверно не менялось. Так, если в олигурический период средний уровень антител в составе ЦИК-1 был 2,18±0,4 ед. опт. пл., то в полиурическом периоде - 1,89±0,1 ед. опт. пл. (р >0,05). В составе ЦИК-2 отмечена аналогичная динамика содержания антител 0,24±0,03 и 0,20±0,032 ед. опт.пл. соответственно (р >0,05). При среднетяжёлом течении ГЛПС в динамике заболевания произошло достоверное снижение количества антител в составе ЦИК-1 (2,21±0,8 и 1,97± ±0,08 ед. опт. пл.), тогда как в составе ЦИК-2 уровень антител не имел достоверных отличий в разные периоды болезни (р >0,05) (см. табл. 3). При тяжёлом течении ГЛПС в отличие от больных со среднетяжёлыми и лёгкими формами в период олигурии количество хантавирусных антител, циркулирующих в свободном виде, было достоверно выше, чем в составе ЦИК (р <0,001). В период полиурии при тяжёлом течении происходило снижение количества свободно циркулирующих антител, тогда как в составе ЦИК-1 и ЦИК-2 их содержание не изменялось (ЦИК-1 - 2,08±0,06 и 2,12±0,22 ед. опт. пл.; ЦИК-2 - 0,52±0,06 и 0,56± 0,06 ед. опт. пл.). Таким образом, тяжёлые формы ГЛПС вызывали наиболее выраженный серологический ответ с максимальным уровнем антител в олигурический период как в сыворотке крови, так и в составе ЦИК. В период полиурии у больных тяжёлой формой происходило достоверное снижение содержания специфических антител в сыворотке крови с сохранением их высокого уровня в составе ЦИК. Наличие большого количества специфических антител в составе ЦИК-1 и ЦИК-2 в период полиурии у больных с тяжёлой формой ГЛПС может быть связано с сохраняющейся репликацией вируса и/или уровнем циркулирующих антигенов. ВЫВОДЫ 1. У больных ГЛПС антихантавирусные антитела класса IgG в сыворотке крови и составе ЦИК-1 появляются уже на ранних стадиях заболевания в 100% случаев. 2. Частота выявления антител в составе ЦИК-2 на ранних сроках заболевания зависит от тяжести течения: они присутствуют у 100% больных с тяжёлой формой, у 50% - со среднетяжёлой, а при лёгкой форме не выявляются. 3. Наличие специфических антител в составе ЦИК-2 указывает на формирование тяжёлого течения ГЛПС. Таблица 1 Распределение больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в зависимости от пола, возраста, дня госпитализации и степени тяжести Степень тяжести заболевания Количество Средний возраст, годы День поступления в стационар от начала заболевания мужчин женщин абс. % абс. % Лёгкая (n=24) 12 50 12 50 37,5±0,95 5,5±0,36 Средняя (n=105) 87 82,9 18 17,1 34,71±0,97 5,28±0,21 Тяжёлая (n=97) 88 90,7 9 9,3 37,47±0,98 4,41±0,198 Всего (n=226) 187 82,7 39 17,2 36,19±0,68 4,93±0,13 шакир.tif Рис. 1. Частота выявления хантавирусных антител класса IgG у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом методом иммуноферментного анализа. Таблица 2 Уровень хантавирусных антител класса IgG в сыворотке крови у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ед. опт. пл.) Период болезни Степень тяжести Всего (n=226) р Лёгкая (n=24) Средняя (n=105) Тяжёлая (n=97) 1 2 3 4 5 6 А Лихорадочный 1,38±0,03 1,47±0,0,8 1,49±0,14 1,42±0,03 >0,05 Б Олигурический 2,0±0,1 2,02±0,1 2,48±0,13 2,11±0,08 р2-3 >0,05; р2-4 <0,04; р3-4 <0,04 В Полиурический 1,76±0,09 1,89±0,08 1,2±0,02 1,8±0,076 р2-3 <0,01; р2-4 <0,001; р3-4 <0,001 р рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,05 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,04 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В >0,05 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,04 Таблица 3 Уровень хантавирусных антител в составе циркулирующих иммунных комплексов в крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ед. опт. пл.) Период болезни Степень тяжести Всего (n=226) р Лёгкая (n=24) Средняя (n=105) Тяжёлая (n=97) 1 2 3 4 5 6 А ЦИК-1, лихорадочный 1,95±0,3 1,98±0,08 2,18±0,1 2,1±0,1 >0,05 Б ЦИК-1, олигурический 2,18±0,4 2,21±0,8 2,08±0,06 2,18±0,07 >0,05 В ЦИК-1, полиурический 1,89±0,1 1,97±0,08 2,12±0,22 2,02±0,08 р2-3 >0,05; р2-4 <0,03; р3-4 <0,03 р >0,05 рА-Б >0,05; рА-В >0,05; рБ-В <0,04; >0,05 >0,05 А ЦИК-2, лихорадочный 0 0,28±0,05 0,49±0,04 0,21±0,1 р2-3 <0,01; р2-4 <0,01; р3-4 <0,01 Б ЦИК-2, олигурический 0,24±0,03 0,32±0,08 0,52±0,06 0,36±0,04 >0,05 В ЦИК-2, полиурический 0,20±0,03 0,28 ±0,05 0,56±0,06 0,33±0,05 р2-3 >0,05; р2-4 <0,03; р3-4 <0,03 р >0,05 >0,05 >0,05 >0,05
×

About the authors

V G Shakirova

Kazan State Medical Academy, Kazan, Russia

Email: Vene-shakirova@yandex.ru

I M Khaertynova

Kazan State Medical Academy, Kazan, Russia

K S Khaertynov

Republican Centre for Prevention and Control of AIDS, Kazan, Russia

References

  1. Герасимов И.Г., Зоркова Е.В. Оптимизация метода определения концентрации циркулирующих иммунных комплексов различной величины // Клин. лабор. диагност. - 2001. - №7. - С. 48-49.
  2. Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н.Д. Ющука, Ю.Я. Венгерова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 1056 с.
  3. Комисарова М.М., Мохова О.Т., Гришкин И.Г. Характер поражения почек у детей в острый и реконвалесцентный период геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Дальневост. мед. ж. - 2002. - №3. - С. 62-64.
  4. Магазова Р.Ш. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (актуальные проблемы эпидемиологии, патогенеза, диагностики, лечения и профилактики) / Под ред. Р.Ш. Магазова - Уфа: Гилем. - 2006. - 250 с.
  5. Морозов В.Г., Иванов А.П., Деконенко А.Е. и др. Концентрация специфических иммуноглобулинов класса М в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в зависимости от сроков и характера течения болезни // Дальневост. мед. ж. - 2003. - №3. - С. 107-108.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML

© 2012 Shakirova V.G., Khaertynova I.M., Khaertynov K.S.

Creative Commons License

This work is licensed
under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.





This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies