Monitoring of the activity of antibodies against hantavirus in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome

Full Text

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) - одно из распространённых природно-очаговых заболеваний. Заболеваемость неуклонно растёт, поражая людей молодого, трудоспособного возраста, что наносит значительный экономический и социальный ущерб. Течение ГЛПС характеризуется большим разнообразием клинических проявлений, поражением многих органов и систем. В связи с этим своевременная диагностика ГЛПС зачастую затруднена, что приводит к диагностическим ошибкам, а следовательно, к поздней госпитализации больных и ухудшению прогноза болезни. Всё это свидетельствует о необходимости разработки новых подходов к специфической диагностике для оценки степени тяжести и прогнозирования течения заболевания. Известно, что ГЛПС сопровождается интенсивным синтезом антител против антигенов хантавируса и образованием иммунных комплексов [4, 5]. Несомненно, иммунные комплексы играют важную роль в патогенезе ГЛПС, особенно при тяжёлом течении заболевания. Существенным фактором повреждения эндотелия сосудов считают циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), оседающие на цитоплазматических мембранах с последующим развитием деструктивного иммунокомплексного панваскулита [5]. Нередко специфические осложнения при ГЛПС в виде формирования почечной недостаточности и хронической патологии у реконвалесцентов оказываются патогенетически связанными с формированием иммунных комплексов [3]. Качественный и количественный состав ЦИК во многом определяет характер и исход иммунологического разрешения ГЛПС. Достоверность обнаружения вирус-специфических антител может быть существенно повышена только при их параллельном выявлении в свободном и связанном виде в ЦИК, потому что не всегда существует корреляция между содержанием свободных и связанных в ЦИК антихантавирусных антител. Однако в доступной литературе мы не нашли работ по изучению специфических антихантавирусных антител в составе ЦИК. Целью настоящего исследования было изучение динамики образования антител к хантавирусам и определение их диагностической значимости у больных ГЛПС различной степени тяжести. В течение 2006-2009 гг. были обследованы 226 больных ГЛПС. В зависимости от тяжести течения болезни все больные были разделены на три группы: первую составили 24 человека с лёгким течением болезни, вторую - 105 человек со среднетяжёлым течением, третью - 97 человек с тяжёлым течением ГЛПС (табл. 1). В контрольную группу вошли 53 практически здоровых человека (добровольные доноры), в анамнезе у которых не было указаний на перенесённую ГЛПС. Достоверных различий по возрасту в группах не было. ГЛПС диагностировали на основании общепринятых клинических, эпидемиологических, лабораторных и инструментальных данных, для верификации диагноза проводили реакцию непрямой иммунофлюоресценции в парных сыворотках. Тяжесть течения ГЛПС оценивали по следующим критериям: лёгкое течение - лихорадка до 38 °С, олигурия до 900 мл/сут, микропротеинурия, микрогематурия, нормальное содержание мочевины плазмы крови, повышение концентрации креатинина до 130 мкмоль/л; среднетяжёлое течение - лихорадка до 39,5 °С, головная боль, частая рвота, интенсивная боль в области поясницы, боли в животе, геморрагическая сыпь, олигурия до 300 мл/сут, концентрация мочевины в плазме крови до 18 ммоль/л, креатинина - до 300 мкмоль/л; тяжёлое течение - осложнения в виде инфекционно-токсического шока и острой сосудистой недостаточности, геморрагический синдром, олигурия менее 300 мл/сут или анурия, концентрация мочевины в плазме крови свыше 18,5 ммоль/л, креатинина - более 300 мкмоль/л (Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 2009). Для определения иммуноглобулинов G (IgG) к хантавирусу в сыворотке крови использовали иммуноферментную тест-систему «Хантагност» (производство Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН). С целью оптимизации метода получения ЦИК из сывороток крови использовали 7% полиэтиленгликоль с молекулярным весом 6000 (ПЭГ-6000 Serva) для определения содержания ЦИК различной молекулярной массы по оптической плотности [1]. При диск-электрофорезе в полиакриламидном геле с 7% раствором полиэтиленгликоля выделено две фракции: быстро преципитирующие (18 ч - ЦИК-1) и медленно преципитирующие (72 ч - ЦИК-2) ЦИК, которые были представлены на электрофореграммах иммуноглобулиновой зоной и не содержали примесей белков плазмы крови. Статистическую обработку данных проводили на персональном компьютере IBM PC «Pentium» с использованием пакета прикладных программ «Statistica 5.5». Изменения признавали статистически значимыми при p <0,05. Специфические антитела выявлялись уже в лихорадочный период заболевания у всех (100%) больных в сыворотке крови и составе ЦИК-1 (рис. 1). Этот факт доказывает, что иммунологический ответ при ГЛПС формируется уже в самом начале заболевания. Антитела в составе ЦИК-2 были выявлены в лихорадочном периоде у 100% больных тяжёлой и у 50% среднетяжёлой формой ГЛПС. В группе больных с лёгким течением заболевания специфические антитела в составе ЦИК-2 выявлялись на более поздних сроках (начиная с олигурического периода) и лишь у 41,6% больных. Вероятно, наличие специфических антител в составе ЦИК-2 связано с формированием более тяжёлого течения ГЛПС. Во всех изучаемых группах больных было проведено количественное определение антихантавирусных антител в сыворотке крови и составе ЦИК. Результаты анализов показали, что содержание антител в разных группах существенно различалось. При изучении свободно циркулирующих специфических антител в сыворотке крови выявлено, что во всех наблюдаемых группах наименьшее их содержание было зарегистрировано в лихорадочном периоде заболевания. Средний уровень антител составил 1,42±0,03 ед. опт. пл. (табл. 2). В олигурическом периоде максимальное содержание антител было отмечено у больных с тяжёлой формой: в среднем 2,48±0,13 ед. опт. пл. (от 0,38 до 3,45 ед. опт. пл). При лёгкой и среднетяжёлой формах болезни уровень антител не превышал 2,0±0,1 и 2,02±0,1 ед. опт. пл. соответственно (см. табл. 2). В полиурическом периоде болезни во всех группах зарегистрировано достоверное снижение количества антител. Так, при лёгкой и среднетяжёлой формах отмечено достоверное снижение уровня антител до 1,76±0,09 и 1,89±0,08 ед. опт. пл. соответственно. Тяжёлые формы ГЛПС в полиурическом периоде сопровождались более выраженным снижением количества антител, средний уровень которых не превышал 1,2±0,02 ед. опт. пл. и был ниже, чем при лёгком и среднетяжёлом течении (р <0,001; р <0,001). Количество антител в составе ЦИК было значительно ниже по сравнению со свободными антителами (табл. 3). Антитела в составе ЦИК-1 выявлены во всех группах (100%). Их средний уровень в лихорадочном периоде составил 2,1±0,1 ед. опт. пл. без достоверных различий в сравниваемых группах. Количество антихантавирусных антител в составе ЦИК-2 сыворотки крови в лихорадочный период болезни было достоверно выше в группе больных с тяжёлым течением болезни. Сопоставление количественных показателей антихантавирусных антител с долей их участия в формировании ЦИК-1 и ЦИК-2 у больных ГЛПС указало на соответственно высокие уровни их у больных с тяжёлой формой заболевания (см. табл. 3). При лёгком течении ГЛПС содержание антител в составе ЦИК в отличие от количества антител в сыворотке крови в динамике достоверно не менялось. Так, если в олигурический период средний уровень антител в составе ЦИК-1 был 2,18±0,4 ед. опт. пл., то в полиурическом периоде - 1,89±0,1 ед. опт. пл. (р >0,05). В составе ЦИК-2 отмечена аналогичная динамика содержания антител 0,24±0,03 и 0,20±0,032 ед. опт.пл. соответственно (р >0,05). При среднетяжёлом течении ГЛПС в динамике заболевания произошло достоверное снижение количества антител в составе ЦИК-1 (2,21±0,8 и 1,97± ±0,08 ед. опт. пл.), тогда как в составе ЦИК-2 уровень антител не имел достоверных отличий в разные периоды болезни (р >0,05) (см. табл. 3). При тяжёлом течении ГЛПС в отличие от больных со среднетяжёлыми и лёгкими формами в период олигурии количество хантавирусных антител, циркулирующих в свободном виде, было достоверно выше, чем в составе ЦИК (р <0,001). В период полиурии при тяжёлом течении происходило снижение количества свободно циркулирующих антител, тогда как в составе ЦИК-1 и ЦИК-2 их содержание не изменялось (ЦИК-1 - 2,08±0,06 и 2,12±0,22 ед. опт. пл.; ЦИК-2 - 0,52±0,06 и 0,56± 0,06 ед. опт. пл.). Таким образом, тяжёлые формы ГЛПС вызывали наиболее выраженный серологический ответ с максимальным уровнем антител в олигурический период как в сыворотке крови, так и в составе ЦИК. В период полиурии у больных тяжёлой формой происходило достоверное снижение содержания специфических антител в сыворотке крови с сохранением их высокого уровня в составе ЦИК. Наличие большого количества специфических антител в составе ЦИК-1 и ЦИК-2 в период полиурии у больных с тяжёлой формой ГЛПС может быть связано с сохраняющейся репликацией вируса и/или уровнем циркулирующих антигенов. ВЫВОДЫ 1. У больных ГЛПС антихантавирусные антитела класса IgG в сыворотке крови и составе ЦИК-1 появляются уже на ранних стадиях заболевания в 100% случаев. 2. Частота выявления антител в составе ЦИК-2 на ранних сроках заболевания зависит от тяжести течения: они присутствуют у 100% больных с тяжёлой формой, у 50% - со среднетяжёлой, а при лёгкой форме не выявляются. 3. Наличие специфических антител в составе ЦИК-2 указывает на формирование тяжёлого течения ГЛПС. Таблица 1 Распределение больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в зависимости от пола, возраста, дня госпитализации и степени тяжести Степень тяжести заболевания Количество Средний возраст, годы День поступления в стационар от начала заболевания мужчин женщин абс. % абс. % Лёгкая (n=24) 12 50 12 50 37,5±0,95 5,5±0,36 Средняя (n=105) 87 82,9 18 17,1 34,71±0,97 5,28±0,21 Тяжёлая (n=97) 88 90,7 9 9,3 37,47±0,98 4,41±0,198 Всего (n=226) 187 82,7 39 17,2 36,19±0,68 4,93±0,13 шакир.tif Рис. 1. Частота выявления хантавирусных антител класса IgG у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом методом иммуноферментного анализа. Таблица 2 Уровень хантавирусных антител класса IgG в сыворотке крови у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ед. опт. пл.) Период болезни Степень тяжести Всего (n=226) р Лёгкая (n=24) Средняя (n=105) Тяжёлая (n=97) 1 2 3 4 5 6 А Лихорадочный 1,38±0,03 1,47±0,0,8 1,49±0,14 1,42±0,03 >0,05 Б Олигурический 2,0±0,1 2,02±0,1 2,48±0,13 2,11±0,08 р2-3 >0,05; р2-4 <0,04; р3-4 <0,04 В Полиурический 1,76±0,09 1,89±0,08 1,2±0,02 1,8±0,076 р2-3 <0,01; р2-4 <0,001; р3-4 <0,001 р рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,05 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,04 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В >0,05 рА-Б <0,04; рБ-В <0,04; рА-В <0,04 Таблица 3 Уровень хантавирусных антител в составе циркулирующих иммунных комплексов в крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ед. опт. пл.) Период болезни Степень тяжести Всего (n=226) р Лёгкая (n=24) Средняя (n=105) Тяжёлая (n=97) 1 2 3 4 5 6 А ЦИК-1, лихорадочный 1,95±0,3 1,98±0,08 2,18±0,1 2,1±0,1 >0,05 Б ЦИК-1, олигурический 2,18±0,4 2,21±0,8 2,08±0,06 2,18±0,07 >0,05 В ЦИК-1, полиурический 1,89±0,1 1,97±0,08 2,12±0,22 2,02±0,08 р2-3 >0,05; р2-4 <0,03; р3-4 <0,03 р >0,05 рА-Б >0,05; рА-В >0,05; рБ-В <0,04; >0,05 >0,05 А ЦИК-2, лихорадочный 0 0,28±0,05 0,49±0,04 0,21±0,1 р2-3 <0,01; р2-4 <0,01; р3-4 <0,01 Б ЦИК-2, олигурический 0,24±0,03 0,32±0,08 0,52±0,06 0,36±0,04 >0,05 В ЦИК-2, полиурический 0,20±0,03 0,28 ±0,05 0,56±0,06 0,33±0,05 р2-3 >0,05; р2-4 <0,03; р3-4 <0,03 р >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

About the authors

V G Shakirova

Kazan State Medical Academy, Kazan, Russia

Email: Vene-shakirova@yandex.ru

I M Khaertynova

Kazan State Medical Academy, Kazan, Russia

K S Khaertynov

Republican Centre for Prevention and Control of AIDS, Kazan, Russia

References

Supplementary files