Microvesiculas in blood of patients with acute leukoses

D M. Zubairov; Зубаиров Д. М.; I. A. Andrushko; Андрушко И. А.; L. D. Zubairova; Зубаирова Л. Д.; G. Yu. Svintenok; Свинтенок Г. Ю.; A. R. Akhmadeev; Ахмадеев А. Р.; V. N. Grigoriev; Григорьев В. Н.; Z. M. Nekhoroshkova; Нехорошкова З. М.

doi:10.17816/kazmj99849

Microvesiculas in blood of patients with acute leukoses

Authors: Zubairov DM., Andrushko I.A., Zubairova L.D., Svintenok G.Y., Akhmadeev A.R., Grigoriev V.N., Nekhoroshkova Z.M.
Issue: Vol 81, No 4 (2000)
Pages: 269-271
Section: Theoretical and clinical medicine
URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/99849
DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj99849
ID: 99849

Cite item

Full Text

Abstract
Full Text
About the authors
References
Supplementary files
Statistics

Abstract

The significant increase of the content of microvesiculas both in the heparinized plasma and in blood serum in patients with acute myeloblastic and acute lymphoblastic leukemia is revealed. Polychemotherapy didn’t show normalizing effect on the microvesiculation manifistation. In contrast to acute leucemia in the multiple myeloma the low level of microvesiculas is found. The possible mechanisms of invoking microvesiculas in the clinical picture of the disseminated intravascular blood coagulability syndrome in leukemia as well as in the regulation of the interaction of leukenic cell with the other blood cell and endothelium are discuss

Keywords

Kazan Medical archive

Full Text

Коагулопатия у больных острыми лейкозами, особенно острым промиелоцитарным лейкозом, часто является комплексной и состоит из классического синдрома ДВС [3, 8], системного фибринолиза и гемостатических сосудистых нарушений, вызванных протеолитическими ферментами.

На протяжении ряда лет мы изучали гемокоагуляционную активность циркулирующих в кровотоке микрочастиц, происходящих из форменных элементов крови и эндотелия [1, 4, 5, 7]. Удаление микровезикул приводит к снижению гемокоагуляционного потенциала бестромбоцитной плазмы крови. Мембраны микровезикул, содержащие фосфати-дилсерин, предоставляют каталитическую поверхность для внутренней “теназы” (надмолекулярный комплекс, состоящий из факторов ІХа и ѴШа, а также фосфолипидов) и протромбиназного

комплекса, и способны стимулировать протеолитическую инактивацию факторов Va и ѴШа активированным протеином С в соединении с протеином S.

Взаимосвязь между дифференциацией миелоидных клеток у человека и апоптозом остается неясной [13]. Последние исследования показали, что конечная дифференциация отнюдь не обязательно ведет к апоптотической смерти миелоидных клеток. Другие авторы отмечают, что индукция дифференциации связана с увеличенной резистентностью I к химиотерапии и гамма-излучению, вызывающей апоптоз. В то же время было установлено, что апоптотические лимфоциты ускоряют свертывание крови ввиду экспрессии на их внешней мембране фосфатидилсерина [11]. Этот процесс тесно связан с микровезикуляцией клеточных мембран [14].

Одной из причин, препятствующих успешному лечению больных острыми (^лейкозами, является развитие синдрома ДВС [8, 12], поэтому мы поставили задачу изучить выраженность процесса микровезикуляции в периферической крови больных острыми лейкозами. Такой аспект решения данной проблемы был выбран нами неслучайно: гемокоагуляционный потенциал определяется не только количественным содержанием факторов свертывающей и противосвертывающей систем, но и уровнем микровезикул.

Под нашим наблюдением находились 11 первичных больных, из них у 5 пациентов был острый миелобластный лейкоз, у 5 — острый лимфобластный лейкоз и у одного — множественная миелома. Диагноз устанавливали на основании данных клиники, гемограмм, протеинограмм, миелограмм, цитохимии и иммунофенотипирования клеток костного мозга методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к антигенам HLA-DR, CD 10, CD34, CD38, CD71, CD95, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD24, CD72, slgM, slgG, к-цепей, х-цепей, CDllb и лазерного проточного цитофлюориметра «EPICS-XL-MCZ, Coulter».

Идентификация микровезикул осуществляется электронной микроскопией, по гемокоагуляционной активности, иммунологическому обнаружению гликопротеина Іb, гликопротеина IIbIIIа, аІІb ß3, Р-селектина и b2-гликопротеина, a-CD41, гемоглобина, щелочной фосфатазы, 5’-нуклеотидазы. Одним из наиболее универсальных маркеров микровезикуляции является предложенный и использованный нами интегральный цитоплазматический фермент 5'-нуклеотидаза [6, 10]. Для контроля изучена активность 5’-нуклеотидазы у 9 мужчин и 4 женщин. На основании проведенных исследований установлены следующие ее нормативы в гепаринизированной плазме крови: у мужчин — 77,9 ± 16,4 нкат/л, у женщин — 78,6 ± ±18,6 нкат/л.

Все обследованные больные острыми лейкозами далее получали программную полихимиотерапию «7+3», «5+2» в сочетании цитостатиков (рубомицин, цитозар, вепезид).

Рис. 1. Содержание микровезикул в гепаринизированной плазме крови у больных острыми лейкозами

Рис. 2. Содержание микровезикул в сыворотке крови у больных острыми лейкозами

У больных острым миелобластным лейкозом на 1—2-й день поступления в клинику до начала курса лечения было установлено повышенное содержание микровезикул в гепаринизированной плазме (283,99 ± 128,26 нкат/л) и в сыворотке крови (244,31 ± 44,05 нкат/л). Почти такое же содержание микровезикул обнаружилось и в крови больных острым лимфобластным лейкозом (в гепаринизированной плазме — 265,76 ± ±88,61 нкат/л; в сыворотке -210,83 ± ±76,89 нкат/л). Как видно из представленных данных, активность маркерного фермента микровезикул 5'-нуклеотидазы заметно превышает показатели микровезикуляции у здоровых лиц (рис.1).

В плазме крови содержание микровезикул было больше, чем в сыворотке (рис. 2). Это обусловлено тем, что они, вовлекаясь в фибриновый сгусток, в сыворотке крови остаются в меньшем количестве.

Полихимиотерапия не оказывает нормализующего влияния на повышенный уровень микровезикул. На рис. 3 показана динамика процесса микровезикуляции у больного Р., 60 лет (диагноз “острый лимфобластный лейкоз”). Программная полихимиотерапия «7+3» была начата на 2-й день после первого исследования состояния микровезикуляции.

По данным Holme et al.[12], микровезикулы проявляют сродство к растворенному и иммобилизованному фибриногену и соагрегируют с тромбоцитами. Тем не менее, по нашим данным, только 23,35% микровезикул связываются сгустком фибрина, 76,65% (P <0,01) — сохраняются в сыворотке крови.

Рис. 3. Содержание микровезикул в плазме и сыворотке крови больного острым лимфобластным лейкозом в процессе лечения.

Несмотря на то что содержание микровезикул в плазме крови, стабилизированной гепарином, больше, чем в сыворотке, исследование последней у больных острыми лейкозами является более перспективным с диагностической точки зрения. Получить сыворотку крови по сравнению со стабилизированной сухим гепарином плазмой крови значительно проще технически.

Выраженная микровезикуляция, отмеченная нами в некоторых случаях на пике цитостатического лечения, является, по всей вероятности, проявлением развивающегося в это время диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, описанного Ф.Э. Файнштейном [8], и, более того, одной из его причин.

Низкий уровень микровезикул был обнаружен в крови больной X., 48 лет, страдающей множественной миеломой (II Б стадия, иммунохимический тип G/k). Активность маркерного фермента микровезикул 5’-нуклеотидазы в гепаринизированной плазме у этой больной составляла лишь 29,94 нкат/л и в сыворотке — 17,96 нкат/л. Как известно, множественная миелома является дифференцирующейся В-клеточной опухолью.

Для данного заболевания характерен синдром повышенной вязкости крови |2], обусловленный циркулирующим в крови высокомолекулярным парапротеином. Сниженную активность 5’-нуклеотидазы при этом синдроме, резко отличающуюся от высокого показателя у больных острыми лейкозами, можно объяснить двумя механизмами: 1) иммунокомплексной блокадой фермента, скрадывающей истинное содержание микровезикул; 2) подлинным подавлением процесса микровезикуляции под действием парапротеина.

Ранее было экспериментально показано, что микровезикулы, происходящие из тромбоцитов, через 24 часа после воздействия на эндотелиальные клетки из вены пупочного канатика человека увеличивают адгезию к ним лейкозных промоноцитарных клеток U-937 [9]. На моноцитах и лейкозных клетках при стимуляции микровезикулами увеличивалось количество адгезивных антигенов, связанных с функцией лимфоцитов (CD11a/CD18), и макрофагов (CD11b/CD18), но возрастало количество аm/b2, CDllc/CD18, а экспрессии очень поздних внутриклеточных адгезивных антигенов ІСАМ-1 не происходило. Подобно арахидоновой кислоте, микровезикулы индуцировали хемотаксис этих видов клеток. GF 109203Х — специфический ингибитор протеинкиназы С — в значительной мере ослаблял хемотаксис лейкозных клеток.

На основании этих данных можно предположить, что впервые обнаруженный нами феномен усиления выраженности микровезикуляции при острых лимфобластном и миелобластном лейкозах является существенным патофизиологическим механизмом регуляции взаимодействия лейкозных клеток с эндотелием и другими клетками крови.

В целом, полученные результаты показывают, что активация гемостаза протекает не только в жидкой фазе плазмы крови и на поверхности клеток эндотелия, тромбоцитов, лейкоцитов, эритроцитов, но также на поверхности образований промежуточного размера от 0,1 до 0,9 мкм, причем у больных острыми лейкозами количество их значительно увеличено. Дальнейшее изучение механизма усиления микровезикуляции при острых лейкозах позволит уточнить патогенез синдрома ДВС при данных заболеваниях и определить значение этого процесса для клиники, диагностики и прогноза ряда других болезней крови.