Микровезикулы в крови больных острыми лейкозами

Аннотация

Коагулопатия у больных острыми лейкозами, особенно острым промиелоцитарным лейкозом, часто является комплексной и состоит из классического синдрома ДВС [3, 8], системного фиб­ринолиза и гемостатических сосудистых нарушений, вызванных протеолитичес­кими ферментами.

Полный текст

На протяжении ряда лет мы изучали гемокоагуляционную активность цирку­лирующих в кровотоке микрочастиц, происходящих из форменных элементов крови и эндотелия [1, 4, 5, 7]. Удаление микровезикул приводит к снижению гемокоагуляционного потенциала бес­тромбоцитной плазмы крови. Мембраны микровезикул, содержащие фосфати-дилсерин, предоставляют каталитичес­кую поверхность для внутренней “теназы” (надмолекулярный комплекс, состо­ящий из факторов ІХа и ѴШа, а также фосфолипидов) и протромбиназного

комплекса, и способны стимулировать протеолитическую инактивацию факто­ров Va и ѴШа активированным протеи­ном С в соединении с протеином S.

Взаимосвязь между дифференциаци­ей миелоидных клеток у человека и апоптозом остается неясной [13]. По­следние исследования показали, что ко­нечная дифференциация отнюдь не обя­зательно ведет к апоптотической смерти миелоидных клеток. Другие авторы от­мечают, что индукция дифференциации связана с увеличенной резистентностью I к химиотерапии и гамма-излучению, вызывающей апоптоз. В то же время было установлено, что апоптотические лим­фоциты ускоряют свертывание крови ввиду экспрессии на их внешней мемб­ране фосфатидилсерина [11]. Этот про­цесс тесно связан с микровезикуляцией клеточных мембран [14].

Одной из причин, препятствующих успешному лечению больных острыми (^лейкозами, является развитие синдро­ма ДВС [8, 12], поэтому мы поставили задачу изучить выраженность процесса микровезикуляции в периферической крови больных острыми лейкозами. Та­кой аспект решения данной проблемы был выбран нами неслучайно: гемокоа­гуляционный потенциал определяется не только количественным содержани­ем факторов свертывающей и противо­свертывающей систем, но и уровнем микровезикул.

Под нашим наблюдением находились 11 первичных больных, из них у 5 паци­ентов был острый миелобластный лей­коз, у 5 — острый лимфобластный лейкоз и у одного — множественная миелома. Диагноз устанавливали на основании данных клиники, гемограмм, протеинограмм, миелограмм, цитохимии и иммунофенотипирования клеток кост­ного мозга методом проточной цитомет­рии с использованием моноклональных антител к антигенам HLA-DR, CD 10, CD34, CD38, CD71, CD95, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD24, CD72, slgM, slgG, к-цепей, х-цепей, CDllb и ла­зерного проточного цитофлюориметра «EPICS-XL-MCZ, Coulter».

Идентификация микровезикул осу­ществляется электронной микроскопи­ей, по гемокоагуляционной активнос­ти, иммунологическому обнаружению гликопротеина Іb, гликопротеина IIbIIIа, аІІb ß3, Р-селектина и b2-гликопротеина, a-CD41, гемоглобина, ще­лочной фосфатазы, 5’-нуклеотидазы. Одним из наиболее универсальных мар­керов микровезикуляции является пред­ложенный и использованный нами интегральный цитоплазматический фер­мент 5'-нуклеотидаза [6, 10]. Для конт­роля изучена активность 5’-нуклеотида­зы у 9 мужчин и 4 женщин. На основании проведенных исследований установлены следующие ее нормативы в гепарини­зированной плазме крови: у мужчин — 77,9 ± 16,4 нкат/л, у женщин — 78,6 ± ±18,6 нкат/л.

Все обследованные больные остры­ми лейкозами далее получали программ­ную полихимиотерапию «7+3», «5+2» в сочетании цитостатиков (рубомицин, цитозар, вепезид).

Рис. 1. Содержание микровезикул в гепарини­зированной плазме крови у больных острыми лейкозами

Рис. 2. Содержание микровезикул в сыворотке крови у больных острыми лейкозами

У больных острым миелобластным лейкозом на 1—2-й день поступления в клинику до начала курса лечения было установлено повышенное содержание микровезикул в гепаринизированной плазме (283,99 ± 128,26 нкат/л) и в сы­воротке крови (244,31 ± 44,05 нкат/л). Почти такое же содержание микрове­зикул обнаружилось и в крови больных острым лимфобластным лейкозом (в ге­паринизированной плазме — 265,76 ± ±88,61 нкат/л; в сыворотке -210,83 ± ±76,89 нкат/л). Как видно из представ­ленных данных, активность маркерного фермента микровезикул 5'-нуклеотидазы заметно превышает показатели микровезикуляции у здоровых лиц (рис.1).

В плазме крови содержание микро­везикул было больше, чем в сыворотке (рис. 2). Это обусловлено тем, что они, вовлекаясь в фибриновый сгусток, в сыворотке крови остаются в меньшем количестве.

Полихимиотерапия не оказывает нормализующего влияния на повышен­ный уровень микровезикул. На рис. 3 показана динамика процесса микровезикуляции у больного Р., 60 лет (диаг­ноз “острый лимфобластный лейкоз”). Программная полихимиотерапия «7+3» была начата на 2-й день после первого исследования состояния микровезикуляции.

По данным Holme et al.[12], микро­везикулы проявляют сродство к раство­ренному и иммобилизованному фибри­ногену и соагрегируют с тромбоцитами. Тем не менее, по нашим данным, толь­ко 23,35% микровезикул связываются сгустком фибрина, 76,65% (P <0,01) — сохраняются в сыворотке крови.

Рис. 3. Содержание микровезикул в плазме и сыворотке крови больного острым лимфо­бластным лейкозом в процессе лечения.

Несмотря на то что содержание микровезикул в плазме крови, стаби­лизированной гепарином, больше, чем в сыворотке, исследование последней у больных острыми лейкозами является более перспективным с диагностичес­кой точки зрения. Получить сыворотку крови по сравнению со стабилизирован­ной сухим гепарином плазмой крови значительно проще технически.

Выраженная микровезикуляция, от­меченная нами в некоторых случаях на пике цитостатического лечения, явля­ется, по всей вероятности, проявлением развивающегося в это время диссеми­нированного внутрисосудистого сверты­вания крови, описанного Ф.Э. Файнштейном [8], и, более того, одной из его причин.

Низкий уровень микровезикул был обнаружен в крови больной X., 48 лет, страдающей множественной миеломой (II Б стадия, иммунохимический тип G/k). Активность маркерного фермента мик­ровезикул 5’-нуклеотидазы в гепарини­зированной плазме у этой больной со­ставляла лишь 29,94 нкат/л и в сыворот­ке — 17,96 нкат/л. Как известно, мно­жественная миелома является диффе­ренцирующейся В-клеточной опухолью.

Для данного заболевания характерен синдром повышенной вязкости крови |2], обусловленный циркулирующим в крови высокомолекулярным парапроте­ином. Сниженную активность 5’-нуклеотидазы при этом синдроме, резко отли­чающуюся от высокого показателя у больных острыми лейкозами, можно объяснить двумя механизмами: 1) им­мунокомплексной блокадой фермента, скрадывающей истинное содержание микровезикул; 2) подлинным подавле­нием процесса микровезикуляции под действием парапротеина.

Ранее было экспериментально пока­зано, что микровезикулы, происходя­щие из тромбоцитов, через 24 часа пос­ле воздействия на эндотелиальные клетки из вены пупочного канатика че­ловека увеличивают адгезию к ним лей­козных промоноцитарных клеток U-937 [9]. На моноцитах и лейкозных клетках при стимуляции микровезикулами уве­личивалось количество адгезивных ан­тигенов, связанных с функцией лимфо­цитов (CD11a/CD18), и макрофагов (CD11b/CD18), но возрастало коли­чество аm/b2, CDllc/CD18, а экспрес­сии очень поздних внутриклеточных ад­гезивных антигенов ІСАМ-1 не проис­ходило. Подобно арахидоновой кислоте, микровезикулы индуцировали хемотак­сис этих видов клеток. GF 109203Х — специфический ингибитор протеинкиназы С — в значительной мере ослаб­лял хемотаксис лейкозных клеток.

На основании этих данных можно предположить, что впервые обнаружен­ный нами феномен усиления выражен­ности микровезикуляции при острых лимфобластном и миелобластном лей­козах является существенным патофи­зиологическим механизмом регуляции взаимодействия лейкозных клеток с эн­дотелием и другими клетками крови.

В целом, полученные результаты по­казывают, что активация гемостаза про­текает не только в жидкой фазе плазмы крови и на поверхности клеток эндоте­лия, тромбоцитов, лейкоцитов, эритро­цитов, но также на поверхности обра­зований промежуточного размера от 0,1 до 0,9 мкм, причем у больных острыми лейкозами количество их значительно увеличено. Дальнейшее изучение меха­низма усиления микровезикуляции при острых лейкозах позволит уточнить па­тогенез синдрома ДВС при данных заболеваниях и определить значение этого процесса для клиники, диагнос­тики и прогноза ряда других болезней крови.