The comparision of two diagnostic methods for detection of Helicobacter pylori in gastric mucosa

V. V. Krasin; Красин В. В.; R. Sh. Chasanov; Хасанов Р. Ш.; R. I. Garifullin; Гарифуллин Р. И.; P. A. Maksimov; Максимов П. А.; A. P. Kiassov; Киясов А. П.

doi:10.17816/kazmj83568

Сравнительная характеристика двух методов выявления helicobacter pylori (де-нол тест и иммуноцитохимия)

Авторы: Красин В.В.¹^,2, Хасанов Р.Ш.¹^,2, Гарифуллин Р.И.¹^,2, Максимов П.А.¹^,2, Киясов А.П.¹^,2
Учреждения:
1. Клинический онкоцентр МЗ РТ
2. Казанский государственный медицинский университет
Выпуск: Том 78, № 5 (1997)
Страницы: 339-340
Тип: Статьи
Статья получена: 22.10.2021
Статья одобрена: 22.10.2021
Статья опубликована: 15.10.1997
URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/83568
DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj83568
ID: 83568

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Полный текст
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Для выявления Helicobacter pylori были опробованы два диагностических метода. Первый - де-нол-тест, основанный на выявлении активности уреазы. Второй - иммуноцитохимический метод с использованием поликлональных антител против Helicobacter pylori. При проведении фиброгастроскопии у пациентов с заболеваниями желудка (20 человек) были взяты небольшие кусочки слизистой желудка. Последние использовались для приготовления мазков, а затем для де-нол-теста. 18 пациентов получили положительные анализы de-nol, а анализы двух пациентов были отрицательными. Однако во всех случаях были обнаружены Helicobacter pylori с помощью иммуноцитохимического окрашивания поликлональными антителами против этой бактерии. На основании этих результатов мы предположили, что иммуноцитохимическое окрашивание Helicobacter pylori является более информативным и точным, чем тест de-nol.

Ключевые слова

Казанский медицинский архив

Полный текст

Со времен открытия австралийскими исследователями В. Marshall и ЛС Warren микроорганизмов группы Hhelicobacter pylori (HP) доказана их ведущая роль в патогенезе гастрита, а также язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [2, 4, 5]. Последнее обстоятельство послужило толчком для разработки методов диагностики, позволяющих быстро и с высокой долей достоверности выявлять HP. К таким методам по праву можно отнести следующие: 1) выявление бактерий в антральных биоптатах рутинными гистологическими методами [9]; 2) микробиологические методы культивирования «Микроорганизмов [6]; 3) иммуноферментный анализ, позволяющий обнаружить антитела IgG, IgA и IgM классов в сыворотке крови, а также секреторные IgG и IgM в слюне и содержимом желудка, образующиеся у всех больных, инфицированных HP [1, 4]; 4) де-нол тест сдвигающего pH среды в щелочную сторону и соответственно изменяющего цвет индикатора от желтого к малиновому. HP является единственным из колонизирующих слизистую оболочку желудка видов бактерий, который вырабатывает уреазу в количествах, достаточных для разложения мочевины в условиях этого теста. Слизь же, полученную после соскоба, помещали на предметные стекла и после высушивания фиксировали в течение 10 минут в абсолютном ацетоне. После этого препараты вымачивали в забуференном физиологическом растворе (0,1 М трис-буфер, pH 7,4), инкубировали 20 минут с неиммунизированной сывороткой свиньи, а затем в течение 30 минут с кроличьими поликлональными антителами против HP. Препараты трижды отмывали в том же буферном растворе по 3 минуты и инкубировали 30 минут со вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена иммуноглобулины свиньи против иммуноглобулинов кролика (Dako, разведение 1:100). Далее препараты отмывали так же, как и после обработки первичными антителами. В качестве субстрата пероксидазной реакции использовали раствор амино-этилкарбозола и перекиси водорода в ацетатном буфере (pH 5,0). Ядра подкрашивали гематоксилином, препараты заключали в глицерогель (Dako, Denmark). Контроль специфичности иммуноцитохимической реакции проводили путем замены первичных антител неиммунной сывороткой кролика.

При исследовании биоптатов, взятых у больных, цвет де-нол теста в разных случаях менялся в промежутках времени от 1 до 5 часов и более. В аннотации же, приложенной к тесту, было указано, что изменение цвета среды должно

происходить в течение 20 минут или максимум часа. В 18 случаях реакция оказалась положительной и в 2 случаях, когда цвет индикатора не изменился, — отрицательной.

Иммуноцитохимически НР-инфицирование было диагностировано у всех 20 обследованных нами пациентов. При микроскопии препаратов были видны красные спиралевидные и S-образные бактерии (см. рис.), по количеству которых в полях зрения можно оценивать степень обсемененности слизистой оболочки желудка HP. На основании изложенного реакция де-нол теста в упомянутых выше 2 случаях была расценена как ложноотрицательная. Мы предполагаем, что ложноотрицательная реакция может быть следствием использования пациентом для лечения лекарственных препаратов, способных видоизменить статус HP (антибиотики, антимикробные средства, препараты висмута), а также по причине небольшого количества бактерий на единице площади слизистой оболочки желудка.

Рис. 1. Мазок со слизистой желудка, окрашенный антителами против Helicobacter pylori. Продукт иммуноцитохимической реакции локализован в бактериях (стрелки), х 900.

Для диагностики HP оптимально применение иммуноцитохимического метода, поскольку он имеет ряд преимуществ. Во-первых, для проведения исследования необходим лишь соскоб со слизистой оболочки желудка, что менее травматично, чем бранш-биопсия. Во-вторых, возможна количественная оценка инфицированности HP, что немаловажно в выборе адекватных доз препаратов при последующем лечении хеликобактериоза. В-третьих, требуется стабильное и сравнительно небольшое время приготовления иммуноцитохимического

препарата (около 2 часов); в-четвертых, этот метод обладает 100%-й чувствительностью.

Возможность хранения препаратов, в свою очередь, позволит изучать динамику процессов лечения и рецидивирования хеликобактериоза.

Авторы выражают глубокую признательностъ за техническую и методическую помощь в проведении лабораторных исследований С. Г. Галямовой и А.А. Гумеровой.