Применение теста дегрануляции базофилов крови in vitro в диагностике аллергии, вызываемой грибами рода candida

Полный текст

Для диагностики микотической сенсибилизации у работающих в производстве микробиологического синтеза белка применяли модифицированный тест Шелли. Морфологические изменения базофилов оценивали в лейкоконцентрате, в ходе получения которого одновременно осуществляется и специфическая реакция базофильных лейкоцитов с антигеном. Результаты исследований соответствовали клиническим данным. Тест может быть использован и для выявления латентной сен­сибилизации.

Ключевые слова: грибы рода Candida, аллергия, тест дегенерации базофилов. 1 таблица. Библиография: 3 названия.

Базофильный тест Шелли нашел широкое применение в аллергодиагностике. Л. М. Маляр (1966) установила, что при сенсибилизации организма базофилы пери­ферической крови претерпевают морфологические изменения. В связи с этим автор предложила метод дифференциального подсчета базофилов в лейкоконцентрате для диагностики сенсибилизации и степени ее выраженности. Позднее появились работы с модификацией теста Шелли, заключающейся в использовании лейкоконцентрата для реакции специфической дегрануляции базофилов in vitro. Наша модификация базофильного теста отличается тем, что реагирование базофилов с испытуемым аллер­геном осуществляется одновременно с получением лейкоконцентрата в течение 30 мин. Она была применена для диагностики аллергии у работающих в контакте с пе­нициллином и стрептомицином [3].

Настоящая работа проводилась с белковыми и полисахаридными антигенами ив грибов рода Candida нескольких ВИДОВ (albicans, tropicalis, quilliermondii _и др.), из­готовленными в отделе глубоких микозов Лен. ГИДУВа (руководитель — 3. 0. Кара­ев). Оптимальная доза кандидозного антигена в базофильном тесте составляет 0,015 — 0,02 мл цельного раствора на 1 мл крови.

Методика. Готовили ряд пробирок соответственно числу испытуемых аллергенов и одну для контрольной пробы. В каждую из них вносили 6% водный раствор трилона Б (из расчета 1 капля на 1 мл крови), в опытные — кандидозные антигены, в контрольную — физиологический раствор. Затем во все пробирки добавляли веноз­ную кровь, быстро перемешивали и инкубировали 30 мин при З'/^С. Отделившуюся плазму со взвесью лейкоцитов отсасывали пастеровской пипеткой в пробирки и цен­трифугировали 10 мин при 1000 об/мин. Из осадка после тщательного его пипетирования готовили мазки лейкоконцентрата, которые окрашивали по Л. М. Маляр (1966).

Метахроматически окрашивающиеся базофилы (фиолетово-красные) контрастно выделяются на синем фоне лейкоцитарной массы, их морфологические особенности определяются четко (образование псевдоподий, сосредоточение гранул на одном из. полюсов клетки в виде колпачка, выход гранул из клетки и полный ее распад, слия­ние гранул в крупные капли и т. п.

В мазках лейкоконцентрата просматривали 100 базофилов и определяли процент дегранулированных. Тест считали положительным при наличии более 10% морфоло­гически измененных клеток и при превышении этого показателя в опытной пробе по сравнению с контрольной в 1,5 раза.

Настоящее исследование предпринято для выявления микотической сенсибилиза­ции у работающих на предприятиях микробиологического синтеза белка, где в качестве продуцента используются грибы рода Candida.

Обследовано 168 работников производства, в том числе 43 с клинически выра­женными проявлениями аллергии (дерматитом, астмоидным бронхитом, бронхиальной астмой). Всем обследованным и 25 практически здоровым лицам (контрольная груп­па), не имевшим профессионального и бытового контакта с продуктами данного производства, ставили базофильный тест с антигеном из гриба — продуцента белка. По­лученные данные представлены в таблице.

Показатели специфической дегрануляции базофилов у работающих в производстве микробиологического синтеза белка

Группы обследованных	% дегранулированных базо­филов		Достоверность различия, Р
	ф	А	с контрольной группой	с контролем Ф
С клиническими проявлениями аллергии	5,95±1,06	23,60±4,62	<0,001	<0,01
Без клинических проявлений аллергии	4,89±р,75	13,78±0,97	<0,001	<0,001
Контрольная	3,64±0,31	5,16±0,36

 

Примечание: Ф — проба крови с добавлением физиологического раствора вместо антигена (контрольная); А — проба крови с добавле­нием антигена из гриба-продуцента.

Специфическая дегрануляция базофилов оказалась наиболее высокой в группе лиц, имевших клинические признаки аллергии. Закономерное увеличение этого пока­зателя было и в группе практически здоровых работников производства, что рассма­тривалось нами как свидетельство скрытой сенсибилизации организма.

Применение базофильного теста с антигеном из гриба — продуцента белка позво­лило, наряду с другими данными, установить профессиональный генез наблюдаемой патологии у работающих на этих производствах. Объективность получаемых резуль­татов и техническая несложность выполнения данной модификации теста Шелли поз­воляют рекомендовать ее к использованию в практике для выявления сенсибилизации организма, вызываемой грибами рода Candida.

Об авторах

З. Г. Филюшина

Горьковский НИИ гигиены труда и профзаболеваний

Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com

Кандидат биологических наук

Россия

А. В. Литовская

Горьковский НИИ гигиены труда и профзаболеваний

Email: info@eco-vector.com
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы