Application of the in vitro blood basophil degranulation test in the diagnosis of allergy caused by candida fungi

Abstract

To diagnose mycotic sensitization in workers in the production of microbiological protein synthesis, a modified Shelley test was used. The morphological changes of basophils were assessed in leucoconcentrate, during the preparation of which the specific reaction of basophilic leukocytes with the antigen is simultaneously carried out. The research results were consistent with clinical data. The test can also be used to detect latent sensitization.

Full Text

Для диагностики микотической сенсибилизации у работающих в производстве микробиологического синтеза белка применяли модифицированный тест Шелли. Морфологические изменения базофилов оценивали в лейкоконцентрате, в ходе получения которого одновременно осуществляется и специфическая реакция базофильных лейкоцитов с антигеном. Результаты исследований соответствовали клиническим данным. Тест может быть использован и для выявления латентной сен­сибилизации.

Ключевые слова: грибы рода Candida, аллергия, тест дегенерации базофилов. 1 таблица. Библиография: 3 названия.

Базофильный тест Шелли нашел широкое применение в аллергодиагностике. Л. М. Маляр (1966) установила, что при сенсибилизации организма базофилы пери­ферической крови претерпевают морфологические изменения. В связи с этим автор предложила метод дифференциального подсчета базофилов в лейкоконцентрате для диагностики сенсибилизации и степени ее выраженности. Позднее появились работы с модификацией теста Шелли, заключающейся в использовании лейкоконцентрата для реакции специфической дегрануляции базофилов in vitro. Наша модификация базофильного теста отличается тем, что реагирование базофилов с испытуемым аллер­геном осуществляется одновременно с получением лейкоконцентрата в течение 30 мин. Она была применена для диагностики аллергии у работающих в контакте с пе­нициллином и стрептомицином [3].

Настоящая работа проводилась с белковыми и полисахаридными антигенами ив грибов рода Candida нескольких ВИДОВ (albicans, tropicalis, quilliermondii _и др.), из­готовленными в отделе глубоких микозов Лен. ГИДУВа (руководитель — 3. 0. Кара­ев). Оптимальная доза кандидозного антигена в базофильном тесте составляет 0,015 — 0,02 мл цельного раствора на 1 мл крови.

Методика. Готовили ряд пробирок соответственно числу испытуемых аллергенов и одну для контрольной пробы. В каждую из них вносили 6% водный раствор трилона Б (из расчета 1 капля на 1 мл крови), в опытные — кандидозные антигены, в контрольную — физиологический раствор. Затем во все пробирки добавляли веноз­ную кровь, быстро перемешивали и инкубировали 30 мин при З'/^С. Отделившуюся плазму со взвесью лейкоцитов отсасывали пастеровской пипеткой в пробирки и цен­трифугировали 10 мин при 1000 об/мин. Из осадка после тщательного его пипетирования готовили мазки лейкоконцентрата, которые окрашивали по Л. М. Маляр (1966).

Метахроматически окрашивающиеся базофилы (фиолетово-красные) контрастно выделяются на синем фоне лейкоцитарной массы, их морфологические особенности определяются четко (образование псевдоподий, сосредоточение гранул на одном из. полюсов клетки в виде колпачка, выход гранул из клетки и полный ее распад, слия­ние гранул в крупные капли и т. п.

В мазках лейкоконцентрата просматривали 100 базофилов и определяли процент дегранулированных. Тест считали положительным при наличии более 10% морфоло­гически измененных клеток и при превышении этого показателя в опытной пробе по сравнению с контрольной в 1,5 раза.

Настоящее исследование предпринято для выявления микотической сенсибилиза­ции у работающих на предприятиях микробиологического синтеза белка, где в качестве продуцента используются грибы рода Candida.

Обследовано 168 работников производства, в том числе 43 с клинически выра­женными проявлениями аллергии (дерматитом, астмоидным бронхитом, бронхиальной астмой). Всем обследованным и 25 практически здоровым лицам (контрольная груп­па), не имевшим профессионального и бытового контакта с продуктами данного производства, ставили базофильный тест с антигеном из гриба — продуцента белка. По­лученные данные представлены в таблице.

Показатели специфической дегрануляции базофилов у работающих в производстве микробиологического синтеза белка

Группы обследованных	% дегранулированных базо­филов		Достоверность различия, Р
	ф	А	с контрольной группой	с контролем Ф
С клиническими проявлениями аллергии	5,95±1,06	23,60±4,62	<0,001	<0,01
Без клинических проявлений аллергии	4,89±р,75	13,78±0,97	<0,001	<0,001
Контрольная	3,64±0,31	5,16±0,36

Примечание: Ф — проба крови с добавлением физиологического раствора вместо антигена (контрольная); А — проба крови с добавле­нием антигена из гриба-продуцента.

Специфическая дегрануляция базофилов оказалась наиболее высокой в группе лиц, имевших клинические признаки аллергии. Закономерное увеличение этого пока­зателя было и в группе практически здоровых работников производства, что рассма­тривалось нами как свидетельство скрытой сенсибилизации организма.

Применение базофильного теста с антигеном из гриба — продуцента белка позво­лило, наряду с другими данными, установить профессиональный генез наблюдаемой патологии у работающих на этих производствах. Объективность получаемых резуль­татов и техническая несложность выполнения данной модификации теста Шелли поз­воляют рекомендовать ее к использованию в практике для выявления сенсибилизации организма, вызываемой грибами рода Candida.