Доказательство олигомерной природы фибриногена б
- Авторы: Литвинов Р.И.1
-
Учреждения:
- Медицинский институт им. С. В. Курашова и Казанскоий ГИДУВ им. В. И. Ленина
- Выпуск: Том 61, № 1 (1980)
- Страницы: 45-47
- Тип: Статьи
- Статья получена: 18.03.2021
- Статья одобрена: 18.03.2021
- Статья опубликована: 31.01.1980
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/63639
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj63639
- ID: 63639
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Исследование с применением хроматографического и иммунохимического методов показало, что фибриноген Б, осаждаемый ß-нафтолом из плазмы крови больных людей, имеет олигомерную природу. Эти данные с учетом химического состава фибриногена Б позволяют утверждать, что фибриноген Б предоставляет собой вариант растворимых комплексов фибрин-мономера. Это определяет клиническое значение пробы с ß-нафтолом как экспресс-метода диагностики тромбинемии.
Ключевые слова
Полный текст
Исследование с применением хроматографического и иммунохимического методов показало, что фибриноген Б, осаждаемый ß-нафтолом из плазмы крови больных людей, имеет олигомерную природу. Эти данные с учетом химического состава фибриногена Б позволяют утверждать, что фибриноген Б предоставляет собой вариант растворимых комплексов фибрин-мономера. Это определяет клиническое значение пробы с ß-нафтолом как экспресс-метода диагностики тромбинемии.
Ключевые слова: фибриноген Б, химическая природа.
2 рисунка. Библиография: 20 названий.
Фибриногеном Б называют белок, который осаждается из патологической плазмы крови при добавлении раствора ß-нафтола в этаноле. Фибриноген Б часто обнаруживается у больных с признаками внутрисосудистой активации свертывания крови [4, 7, 8 и др.], что позволяет использовать реакцию на фибриноген Б для диагностики типеркоагулемии.
Известно, что появление фибриногена Б в крови вызывается действием на фибриноген микроколичеств тромбина [2, 6] и образованием мономерного фибрина [3]. Электрофоретическое- исследование фибриногена Б показало, что его основу составляет фибриноген [5], а анализ полипептидного спектра и N-концевых аминокислот позволил обнаружить в фибриногене Б 13 —18% мономерного фибрина с сохраненными фибринопептидами В.
Исходя из этих результатов, можно предположить, что фибриноген Б — это растворимые производные фибриногена, содержащие фибрин-мономер. Такие производные, известные под названием растворимых комплексов фибрин-мономера (РКФМ), действительно обнаруживаются в крови больных людей [14, 17, 20]. Однако, чтобы окончательно подтвердить идентичность фибриногена Б и РКФМ, необходимо доказать олигомерную природу фибриногена Б, что и сделано в настоящей работе.
Кровь больных острым инфарктом миокарда брали из вены широкой иглой без шприца в пластиковую посуду и смешивали со стабилизатором в отношении 9 : 1 по объему. Состав стабилизатора: 0,1 М цитрат натрия, 0,02 М Nа2-ЭДТА, 500 КІ ед./мл; трасилола (Bayer, ФРГ). Бестромбоцитную плазму получали центрифугированием при 2500 ё в течение 20 мин при комнатной температуре.
Фибриноген Б осаждали из плазмы крови 2% раствором ß-нафтола в 50% этаноле, добавляя к 4 мл плазмы 0,6 мл реактива [12]. Образующийся осадок отделяли центрифугированием (600 g, 5 мин) и ресолюбилизировали в 3 мл фосфатно-цитратного буфера pH 7,2 при 37°С. Нерастворившуюся часть отделяли центрифугированием или фильтрованием через стеклянный фильтр.
Плазму или раствор фибриногена Б подвергали гель-хроматографии на Сефарозе 4В (Pharmacia Fine Chemicals Uppsala, Швеция). Размеры колонки — 2,5 X 90 СМ, объем наносимой пробы — 2 мл, рабочее давление — 30 см вод. ст., скорость тока — 10 мл/час, объем собираемых фракций — 3 мл. Свободный объем колонки, определенный по суспензии Е. coli, равен 81 мл. В качестве элюента использовали фосфатно-цитратный буфер pH 7,2, содержащий 0,05% азида натрия [11].
Анализ фракций проводили по поглощению при 280 нм. Для обнаружения в производных использовали реакцию торможения гемагглютинации таннизированных эритроцитов [18]. Кроличью сыворотку с антителами к фибриногену человека получали по Кискеру и соавт. [16], фибриноген человека для иммунизации — методом Т. В. Варецкой [1]. Количество коагулируемого белка, определенное по методу Атенцио и соавт. [10], составляло 97,6%. В реакции иммунодиффузии в геле агара адсорбированная сыворотка была моноспецифичной (см. рис. 1).
Хроматография на геле агарозы стала распространенным методом выявления высокомолекулярных производных фибриногена и их препаративного выделения. В наших опытах хроматографии в стандартных условиях подвергались: 1) плазма, содержащая фибриноген Б; 2) фибриноген Б, осажденный из этой плазмы; 3) плазма, оставшаяся' после осаждения фибриногена Б; 4) контрольная плазма, не содержащая фибриногена Б. Результаты опытов представлены на рис. 2.
На рис. 2 А отчетливо видно, что исходная плазма больного инфарктом миокарда содержит производные фибриногена с большой молекулярной массой (пик 2), объем элюции которых меньше объема элюции фибриногена (соответственно 120 и 144 мл). Профиль элюции этой плазмы сходен с хроматографической кривой, полученной для
Именно эти производные являются наиболее важным компонентом фибриногена Б, определяющим его пониженную растворимость в присутствии этанола и ß-нафтола. С учетом данных о присутствии мономерного фибрина в составе фибриногена Б, а также об иммунологическом родстве обнаруженных производных с фибриногеном, можно заключить, что фибриноген Б — это растворимые комплексы фибрин-мономера, имеющие олигомерную природу.
В надосадке плазмы, остающемся после отделения фибриногена Б, РКФМ не обнаруживаются (см. рис. 2 В). Количество фибриногена, по данным РТГА, значительно уменьшается, а большая его часть осаждается с фибриногеном Б. Это подтверждает наши данные о вовлечении фибриногена в осадок под действием этанола и ß-нафтола [5]. Важно подчеркнуть, что в ходе реакции происходит полное осаждение РКФМ и только частичное осаждение фибриногена. Это говорит о специфичности пробы с ß-шафтолом по отношению к РКФМ, хотя специфичность эта относительна.
Полученные данные в сочетании с результатами изучения молекулярного состава фибриногена Б позволяют однозначно определить природу фибриногена Б и установить его идентичность с РКФМ. Растворы этих комплексов, имеющих олигомерное строение и большую молекулярную массу, обладают наименьшей термодинамической устойчивостью. При добавлении денатурирующих веществ (этанола, ß-нафтола) в концентрации, не достаточной для осаждения фибриногена и других белков плазмы, РКФМ выпадают в осадок. При этом они увлекают за собой другие плазменные белки, которые взаимодействуют с РКФМ через нековалентные связи. Образование этих связей в условиях гидрофобизации водного раствора и уменьшения его диэлектрической константы существенно облегчается. Это приводит к соосаждению плазменных белков с РКФМ. Таким представляется механизм осаждения фибриногена Б, вытекающий из его олигомерной природы.
Об авторах
Р. И. Литвинов
Медицинский институт им. С. В. Курашова и Казанскоий ГИДУВ им. В. И. Ленина
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Кафедра биохимии; кафедра терапии № 1
РоссияСписок литературы
- Варецкая Т. В. Укр. биохим. ж., 1960, 32.
- Вубаиров Д. М. Казанский мед. ж., 1962, 5.
- Зубаиров Д. М., Литвинов Р. И., Соболева И. В., Субханку лов а Ф. Б. Там же, 1975, 3.
- Кузьмук В. В., Репин А. В., Тарасов М. С. Лабор. дело, 1973, 9.
- Литвинов Р. И. Там же, 1977, 8.
- Мачабели М. С., Безарашвили Л. Г. Plsen. lik. Shorn., 1967, 18, suppl.
- Надырова Г. Г., Хабибуллина С. X. Казанский мед. ж., 1974, 3.
- Смолянский Д. Я., Шумбалина Л. Ф. Лабор. дело, 1974, 8.
- Änауa-Gа1indo R., Shattil S. J., Shelburne J. С., Colman R. W. Thrombos. Res., 1976, 9, 2.
- Atencio A. С., Bierdick D. C., Reeve E. В. Д. Lab. Clin. Med., 1965, 66, 1.
- Carvalho A., Ellman Z. Blood, 1976, 47, 4.
- Cummine H., Lyons R. N. Brit. J. Surg., 1948, 25, 140.
- Edgar W., McKillop C., Howie P. W., Prentice C. R. M. Throm¬bos. Res., 1977. 10, 4.
- Hafter R., Müller-Berghaus G., Hugo R. von, Graeff H. Thrombos. Res., 1977, 10, 5.
- Hugo R. von, Hafter R., Stemberger A., Graeff H. Thrombos. Diathes. haemorrh.? 1975, 34, 1.
- Kisker C. T., Plummer G., Taylor B., Rush R. J. Lab. Clin. Med., 1977. 89. 3.
- Lipinski B., Wo rowski K. Thrombos. Diathes. haemorrh., 1968, 20, 1.
- Merskey C., Lalezari J., Johnson A. J. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1969. 131, 3.
- Reinicke R., Matthias F. R., Lasch H. G. Thrombos Res., 1977, 11, 3.
- Shainoff J. R., Page I. H. J. Exp. Med., 1962, 73, 574.
![](/img/style/loading.gif)