A new method for the laboratory diagnosis of whooping cough

Full Text

До настоящего времени предварительная и окончательная диагностика коклюша основывается на клинико-эпидемиологических данных, ибо бактериологическая диагностика остается несовершенной. Последнее связано, возможно, с плохим качеством коммерческой среды КУА и в большинстве своем с поздними сроками обследования, а серодиагностика проводится поздно.

В работе представлены результаты апробации нового метода лабораторной диагностики коклюша по выявлению противококлюшных антител в слюне с помощью реакции пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютинации (РПОЛМА).

Под наблюдением находились 32 ребенка, госпитализированные в инфекционную больницу по поводу коклюша. Из них 14 больных были в возрасте от 2 мес до одного года, 3 — от одного года до 3 лет, 4 — от 3 до 7 лет и один — в возрасте 14 лет. Все дети были не привитыми против коклюша. У 8 (25%) больных была легкая форма коклюша, у 20 (62,5%) —среднетяжелая форма, у 4 (12,5%) —абортивное течение болезни. Только у половины детей был выявлен тесный и продолжительный контакт с коклюшными или длительно кашляющими больными. Больные в стационар поступали преимущественно в судорожном периоде болезни, один ребенок — в начальном периоде и 3 — в инкубационном (по эпидемическим показаниям) как контактные по коклюшу.

У всех детей первоначально участковым педиатром была диагностирована ОРВИ. Основным симптомом начальной стадии болезни был простой нарастающий кашель, не поддающийся лечению. Нарушения самочувствия не наблюдались, температура оставалась у большинства (87,8%) больных нормальной, и лишь у 4 из 8 детей в возрасте до 6 мес отмечались кратковременное незначительное повышение температуры и насморк.

Лечение больных коклюшем было комплексным: антибиотики, иммуноглобулины, гипосенсибилизирующие препараты, бронхолитики, пребывание на свежем воздухе, массаж грудной клетки, 1 % хлоралгидрат или аминазин per os в возрастных дозировках.

Всех наблюдаемых больных обследовали с помощью бактериологического и иммунологических методов — реакции агглютинации (РА) с сывороткой крови и реакции пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютинации (РПОЛМА) со слюной больных.

Бактериологическое обследование проводили однократно на 2-й день после поступления больного в стационар. У 4 детей это совпало с абортивным течением болезни на 1-й неделе, у остальных — через 2—8 нед от начала заболевания. Все результаты были отрицательными. Это объясняется, по-видимому, ранним назначением антибиотикотерапии, плохим качеством коммерческой среды КУА и в ряде случаев высокой высеваемостью бордетелл, связанной с поздними сроками обследования.

Иммунологические исследования проводили через 2—9 нед болезни. РПОЛМА в слюне ставили на стекле по методике, описанной в наших предыдущих исследованиях [1, 2], с помощью разработанного на кафедре микробиологии КГМИ коклюшного латексного диагностикума. Последний представляет собой полистироловый монодисперсный латекс с диаметром частиц 0,5 мкм, сенсибилизированный дезинтегратом коклюшных бактерий и содержащий 975 мкг/мл белка (по Лоури). Слюну в количестве 0,5—1,0 мл брали утром натощак или через 2,5—3 ч после еды, разводили ее в 2 раза глициновым буфером (pH 8,2), центрифугировали при 3 000 об./мин в течение 5 мин, после чего вновь ее двукратно разводили начиная с соотношения 1:5. В качестве контроля были обследованы 4 группы детей (табл. 1).

 

Титры антител по РПОЛМА в слюне и по РА в сыворотке крови в контрольных группах детей

Группы детей	Возраст	Средние титры антител в слюне по РПОЛМА	Средние титры антител в сыворотке крови по РА
Больные ОРВИ, не привитые против коклюша и не болевшие им (неорганизованные)
1-я (24 чел.)	от 6 мес до 2 лет	4,0±0,3	11,5±1,2
2-я (6)	до одного года	3,7±0,8	10,0±4,7
3-я (18)	от одного года до 2 лет	4,1±0,4	12,2±1,8
Дети, не привитые против коклюша (здоровые, организованные)
4-я (46)	от 2,5 до 3,5 лет	5,3±0,3	—

Примечание. Здесь и далее титры антител представлены в обратных величинах.

 

У 14 из 32 больных коклюшем (у 10 — с типичной клиникой, у 4 — с абортивным течением) слюну и сыворотку крови исследовали двукратно с интервалом в 6—15 дней. Высокие титры противококлюшных антител в слюне по РПОЛМА (1:20 и более) наблюдали при первом или втором исследованиях во всех случаях, кроме одного. У 6 детей было отмечено нарастание титров антител в 4 и более раз, у 2 — в 2 раза, у 2, напротив— снижение титров в 4 и более раз, у 2 — в 2 раза, у одного ребенка титры держались на одном уровне (1:40). Средние арифметические титров антител по РПОЛМА в слюне при первом и втором исследовании составляли соответственно 26,0 ± 5,2 и 44,6±10,1 (Р>0,05). Отсутствие статистически достоверной разницы между ними объясняется, по-видимому, поздними сроками первичного взятия материала (через 2—9 нед болезни), так как уже со 2-й недели титры антител в слюне существенно превышали уровень антител у детей 1 и 4-й контрольной групп (табл. 2). По РА при обследовании парных сывороток крови больных коклюшем отмечалось нарастание титров антител в 4 и более раз у 11 больных, в 2 раза — у одного (1:40 — 1:80): снижение титров антител в 2 раза было у 2 детей (1 : 640 — 1 : 320 и 1 : 80 — 1 : 40). Средние титры антител по РА в сыворотке крови при первом и втором исследовании составили соответственно 27,6 ± 5,3 и 147,1 ± 16,5 (Р<0,001).

У 18 остальных детей слюну и сыворотку крови исследовали однократно, так как материал брали на поздних сроках (через 2—9 нед) болезни, а через 3 — 8 дней после исследования дети были выписаны из стационара. По РПОЛМА в слюне высокие титры противококлюшных антител (1:20 и выше) отмечались у 15 больных. У 3 детей титры были низкими (1:5 — 1:10), что можно объяснить поздним (на 5-й и более неделях болезни) взятием слюны. По РА в сыворотке крови высокие титры противококлюшных антител регистрировались также у 15 детей. У 3 больных при взятии материала на 2—3-й неделе от начала заболевания титры были низкими (1:20), повторного же исследования не проводилось.

Таким образом, у 28 (87%) из 32 обследованных по РПОЛМА в слюне были выявлены высокие титры противококлюшных антител. У 29 (90,6%) детей по РА в сыворотке крови было обнаружено либо четырехкратное нарастание титров антител при исследовании парных сывороток крови, либо титры, существенно превышали фоновый уровень, имевшийся у детей 1-й контрольной группы (11,5±1,2). Следовательно, метод РПОЛМА по выявляемое™ больных коклюшем не уступает серологическому (Р>0,05). Более того, он имеет ряд преимуществ по сравнению с серологическим: нетравматичен, исключает возможность связанного со взятием крови инфицирования через медицинский инструментарий вирусами СПИДа и гепатита В.

В динамике заболевания титры противококлюшных антител в слюне больных коклюшем распределялись следующим образом: на 2-й неделе от начала болезни уровень антител был существенно выше, чем в 1 и 4-й контрольных группах. На последующих сроках, включая 5-ю неделю болезни, они сохранялись на таком же высоком уровне (Р<0,05). На более поздних сроках (на 6—9-й неделях болезни) отмечалось достоверное снижение титров антител (56,7 ± 13,5 и 25,0 ± 7,0; Р<0,05), однако их уровень был значительно выше, чем у детей 1 и 4-й контрольных групп (Р<0,01).

При распределении в динамике болезни титров антител по РА в сыворотке крови больных коклюшем было констатировано достоверное нарастание их уровня по сравнению с фоновым лишь к 3-й неделе от начала заболевания (Р<0,01). На 2-й неделе болезни уровень противококлюшных антител в сыворотке крови по РА существенно не отличался от такового у детей 1-й контрольной группы (23,0 ± 7,2 и 11,5 ± 1,2; Р>0,05). На последующих сроках обследования (4—9-я недели болезни) титры противококлюшных антител в сыворотке крови оставались такими же высокими (Р>0,05) и существенно превышали аналогичные показатели у детей 1-й контрольной группы.

Сравнение средних титров антител по РПОЛМА в слюне у детей в возрасте до одного года и у детей старше одного года показало достоверную разницу в результатах — соответственно 38,0 ± 5,2 и 55,5 ± 6,3 (Р<0,05). То же было выявлено и при сопоставлении средних титров антител по РА в сыворотке крови — соответственно 76,9 ± 20,9 и 157,6 ± 34,0 (Р<0,05). Это свидетельствует, по-видимому, о более зрелом характере иммунной системы у детей старше одного года. При сопоставлении средних титров противококлюшных антител у больных с осложненными и неосложненными формами коклюша по РПОЛМА в слюне и по РА в сыворотке крови обнаружено отсутствие достоверной разницы в том и другом случае — соответственно 44,5 ± 4,4 и 47,7 ± 2,7 (Р>0,05) и 114,0 ± 27,2 и 120,0 ± 2,8 (Р>0,05). Достоверная разница в результатах констатирована при сравнении средних титров антител у больных всех групп с контролем.

About the authors

N. F. Amfiteatrova

Kazan Institute for the Improvement of Doctors named after V. I. Lenin; Kazan Order of the Red Banner of Labor Medical Institute named after S. V. Kurashov; Infectious Diseases Hospital No. 1

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com

Department of Infectious Diseases, Department of Microbiology, Head — prof.

Russian Federation, Kazan; Kazan; Kazan

D. K. Bashirova

Kazan Institute for the Improvement of Doctors named after V. I. Lenin; Kazan Order of the Red Banner of Labor Medical Institute named after S. V. Kurashov; Infectious Diseases Hospital No. 1

Email: info@eco-vector.com

Head – Prof., Department of Infectious Diseases, Department of Microbiology

Russian Federation, Kazan; Kazan; Kazan

R. K. Galeeva

Kazan Institute for the Improvement of Doctors named after V. I. Lenin; Kazan Order of the Red Banner of Labor Medical Institute named after S. V. Kurashov; Infectious Diseases Hospital No. 1

Email: info@eco-vector.com

Department of Infectious Diseases, Department of Microbiology

Russian Federation, Kazan; Kazan; Kazan

A. O. Kiselev

Kazan Institute for the Improvement of Doctors named after V. I. Lenin; Kazan Order of the Red Banner of Labor Medical Institute named after S. V. Kurashov; Infectious Diseases Hospital No. 1

Email: info@eco-vector.com

Department of Infectious Diseases, Department of Microbiology

Russian Federation, Kazan; Kazan; Kazan

References

Supplementary files