Распознавание мутантных форм натрий-зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b моноклональными антителами в клетках рака яичника

Обложка


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Актуальность. Натрий-зависимый фосфатный транспортёр NaPi2b экспрессируется в ряде опухолей и служит мишенью для терапии моноклональными антителами. В составе транспортёра NaPi2b имеется большой внеклеточный домен, где располагаются 4 цистеина и эпитоп МХ35, распознаваемый соответствующими моноклональными антителами.

Цель. Изучение распознавания эпитопа MX35 в мутантных по цистеинам формах С303 и С350 натрий-¬зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b моноклональными антителами в клетках рака яичника.

Материал и методы исследования. Клетки рака яичника линии OVCAR-8 были трансфицированы плазмидами, кодирующими мутантные формы транспортёра NaPi2b. Распознавание этих форм моноклональными антителами изучали методами вестерн-блота и проточной цитофлуориметрии. Статистическую обработку данных проточной цитометрии проводили с применением χ2 Пирсона с поправкой Йейтса.

Результаты. Вестерн-блот анализ лизатов клеток OVCAR-8, экспрессирующих транспортёр NaPi2b дикого типа, продемонстрировал наличие специфического сигнала только в образцах без добавления дитиотреитола, тогда как во всех образцах с цистеиновыми мутантами NaPi2b, даже без добавления дитиотреитола, специфического сигнала от моноклональных антител выявлено не было. Результаты проточной цитометрии показали, что доля клеток OVCAR-8 с позитивным окрашиванием эпитопа MX35 антителами меньше при экспрессии мутантных форм NaPi2b по сравнению с диким типом.

Вывод. Цистеины С303 и С350 участвуют в образовании дисульфидной связи, имеющей ключевое значение для формирования конформации большого внеклеточного домена натрий-зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b, которая обеспечивает распознавание эпитопа MX35 моноклональными антителами.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Лейсан Фаридовна Булатова

Казанский (Приволжский) федеральный университет

Email: bulatovalef@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-6696-8477

мл. науч. сотрудник, НИЛ «Биомаркёр», Институт фундаментальной медицины и биологии

Россия, г. Казань, Россия

Вера Сергеевна Скрипова

Казанский (Приволжский) федеральный университет

Email: vsskripova@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-6342-0390

мл. науч. сотрудник, НИЛ «Биомаркёр», Институт фундаментальной медицины и биологии

Россия, г. Казань, Россия

Арина Валерьевна Коротаева

Казанский (Приволжский) федеральный университет

Email: ArVKorotaeva@stud.kpfu.ru
ORCID iD: 0000-0002-2253-7488

студент, Институт фундаментальной медицины и биологии

Россия, г. Казань, Россия

Михаил Васильевич Богданов

Казанский (Приволжский) федеральный университет; Научный центр здоровья при Техасском университете

Email: mikhail.v.bogdanov@uth.tmc.edu
ORCID iD: 0000-0002-6093-0926

канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник, НИЛ «Биомаркёр», Институт фундаментальной медицины и биологии; проф., каф. биохимии и молекулярной биологии, Медицинская школа МакГоверн, Центр наук о здоровье Университета Техас

США, г. Казань, Россия; г. Казань, Россия

Рамзия Галлямовна Киямова

Казанский (Приволжский) федеральный университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: kiyamova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2547-2843

докт. биол. наук, проф., каф. биохимии, биотехнологии и фармакологии, глав. науч. сотрудник, НИЛ «Биомаркёр», Институт фундаментальной медицины и биологии

Россия, г. Казань, Россия

Список литературы

  1. Levi M, Gratton E, Forster IC, Hernando N, Wagner CA, Biber J, Sorribas V, Murer H. Mechanisms of phosphate transport. Nat Rev Nephrol. 2019;15(8):482–500. doi: 10.1038/s41581-019-0159-y.
  2. Rangel LBA, Sherman-Baust CA, Wernyj RP, Schwartz DR, Cho KR, Morin PJ. Characterization of no¬vel human ovarian cancer-specific transcripts (HOSTs) identified by serial analysis of gene expression. Oncogene. 2003;22(46):7225–7232. doi: 10.1038/sj.onc.1207008.
  3. Gryshkova V, Goncharuk I, Gurtovyy V, Khozhayenko Y, Nespryadko S, Vorobjova L, Usenko V, Gout I, Filonenko V, Kiyamova R. The study of phosphate transporter NAPI2B expression in different histological types of epithelial ovarian cancer. Exp Oncol. 2009;31(1):37–42.
  4. Shyian M, Gryshkova V, Kostianets O, Gorshkov V, Gogolev Y, Goncharuk I, Nespryadko S, Vorobjova L, Filonenko V, Kiyamova R. Quantitative analysis of SLC34A2 expression in different types of ovarian tumors. Exp Oncol. 2011;33(2):94–98.
  5. Kopantzev EP, Monastyrskaya GS, Vinogradova TV, Zinovyeva MV, Kostina MB, Filyukova OB, Tone¬vitsky AG, Sukhikh GT, Sverdlov ED. Differences in gene expression levels between early and later stages of human lung development are opposite to those between normal lung tissue and non-small lung cell carcinoma. Lung Cancer. 2008;62(1):23–34. doi: 10.1016/j.lungcan.2008.02.011.
  6. Zhang Z, Ye S, Zhang M, Wu J, Yan H, Li X, He J. High expression of SLC34A2 is a favorable prognostic marker in lung adenocarcinoma patients. Tumor Biol. 2017;39(7):1010428317720212. doi: 10.1177/1010428317720212.
  7. Liu L, Yang Y, Zhou X, Yan X, Wu Z. Solute carrier family 34 member 2 overexpression contributes to tumor growth and poor patient survival in colorectal cancer. Biomed Pharmacother. 2018;99:645–654. doi: 10.1016/j.biopha.2018.01.124.
  8. Kim HS, Kim DH, Kim JY, Jeoung NH, Lee IK, Bong JG, Jung ED. Microarray analysis of papillary thyroid cancers in Korean. Korean J Intern Medicine. 2010;25(4):399–407. doi: 10.3904/kjim.2010.25.4.399.
  9. Yin BWT, Kiyamova R, Chua R, Caballero OL, Gout I, Gryshkova V, Bhaskaran N, Souchelnytskyi S, Hellman U, Filonenko V, Jungbluth AA, Odunsi K, Lloyd KO, Old LJ, Ritter G. Monoclonal antibody MX35 detects the membrane transporter NaPi2b (SLC34A2) in human carcinomas. Cancer Immun. 2008;8:3.
  10. Kiyamova RG, Gryshkova VS, Usenko VS, Khozaenko YS, Gurtovyy VA, Yin B, Ritter G, Old L, Gout IT, Filonenko VV. Identification of phosphate transporter NaPi2b as MX35 cancer antigen by modified SEREX approach. Biopolymers Cell. 2008;24(3):218–224.
  11. Mattes MJ, Look K, Furukawa K, Pierce VK, Old LJ, Lewis JL, Lloyd KO. Mouse monoclonal antibo¬dies to human epithelial differentiation antigens expressed on the surface of ovarian carcinoma ascites cells. Cancer Res. 1987;47(24, Pt 1):6741–6750.
  12. Минигулова Л.Ф., Скрипова В.С., Нургалиева А.К., Савенкова Д.В., Козлова А.С., Акберова Н.И., Решетникова Д.Д., Савинская Л.А., Гарифулин О.М., Богданов М.В., Киямова Р.Г. Распознавание натрий--зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b моноклональными антителами N-NaPi2b в клетках карциномы яичника. Учёные записки Казанского университета. Серия «Естественные науки». 2020;162(4):529–540. doi: 10.26907/2542-064X.2020.4.529-540.
  13. Kiyamova R, Gryshkova V, Ovcharenko G, Lituyev D, Malyuchik S, Usenko V, Khozhayenko Y, Gurtovyy V, Yin B, Ritter G, Old L, Filonenko V, Gout I. Development of monoclonal antibodies specific for the human sodium-dependent phosphate co-transporter NaPi2b. Hybridoma. 2008;27(4):277–284. doi: 10.1089/hyb.2008.0015.
  14. Gryshkova V, Lituiev D, Savinska L, Ovcharenko G, Gout I, Filonenko V, Kiyamova R. Generation of monoclonal antibodies against tumor-associated antigen MX35/sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b. Hybri¬doma. 2011;30(1):37–42. doi: 10.1089/hyb.2010.0064.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Вестерн-блот анализ мутантных форм натрий-зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b c заменами цистеинов на аланин в положениях 303 и 350 в клетках рака яичника OVCAR-8. А. Анализ с моноклональными антителами N-NaPi2b (15/1); Б. Анализ с моноклональными антителами L2(20/3); ДТТ — дитиотреитол; GAPDH — глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

Скачать (33KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Вестерн-блот анализ лизатов клеток рака яичника OVCAR-4 и OVCAR-8. А. Анализ с поликлональными антителами pN-NaPi2b. Б. Анализ с поликлональными антителами pL-NaPi2b; ДТТ — дитиотреитол; GAPDH — глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

Скачать (24KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Анализ мутантных форм натрий-зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b с помощью проточной цитометрии. А–Г. Точечные диаграммы результатов проточной цитометрии клеток рака яичника OVCAR-8, эктопически экспрессирующих NaPi2b дикого типа (А, В) и его мутантную форму (Б, Г) с заменой остатка цистеина С303 на остаток аланина (NaPi2b_C303A). А и Б. Анализ с моноклональными антителами L2(20/3). В и Г. Анализ с моноклональными антителами N-NaPi2b (15/1). Д. Мозаичный плот сравнения распознавания эпитопа MX35 NaPi2b дикого типа и его мутантной формы NaPi2b_C303A антителами L2(20/3). Статистический анализ выполнен с помощью критерия χ2 Пирсона с поправкой Йейтса; ***p <0,001

Скачать (74KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Анализ мутантных форм натрий-зависимого фосфатного транспортёра NaPi2b с помощью проточной цитометрии. А–Г. Точечные диаграммы результатов проточной цитометрии клеток рака яичника OVCAR-8, эктопически экспрессирующих NaPi2b дикого типа (А, В) и его мутантную форму (Б, Г) с заменой остатка цистеина С350 на остаток аланина (NaPi2b_C350A). А и Б. Анализ с моноклональными антителами L2(20/3). В и Г. Анализ с моноклональными антителами N-NaPi2b (15/1). Д. Мозаичный плот сравнения распознавания эпитопа MX35 NaPi2b дикого типа и его мутантной формы NaPi2b_C350A антителами L2(20/3). Статистический анализ выполнен с помощью критерия χ2 Пирсона с поправкой Йейтса; ***p <0,001

Скачать (76KB)
Метаданные

© 2022 Эко-Вектор


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ЭЛ № ФС 77 - 75008 от 01.02.2019.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах