Вторая межинститутская конференция по бактериофагии

Аннотация

На конференции было заслушано 69 докладов из Советского Союза, а также Китая, Польши и Болгарии. Следует отметить, что вопрос о природе бактериофага до последнего времени был дискуссионным. Большим тормозом для признания живой природы его была авизуальность бактериофага, не дававшая возможности подтвердить его корпускулярность. Лишь с внедрением электронной микроскопии, электрофореза, хроматографии, использованием радиоактивных изотопов получены данные, не только доказывающие корпускулярность фага, но и открыты многие детали его строения, обмена веществ химического состава и т. д. Большинство современных исследователей признает живую природу бактериофага, считая его вирусом, паразитом бактерий, поражающим микробные клетки.

Полный текст

(Тбилиси, 18—21/XII-59 г.)

На конференции было заслушано 69 докладов из Советского Союза, а также Китая, Польши и Болгарии.

Следует отметить, что вопрос о природе бактериофага до последнего времени был дискуссионным. Большим тормозом для признания живой природы его была авизуальность бактериофага, не дававшая возможности подтвердить его корпускулярность. Лишь с внедрением электронной микроскопии, электрофореза, хроматографии, использованием радиоактивных изотопов получены данные, не только доказывающие корпускулярность фага, но и открыты многие детали его строения, обмена веществ химического состава и т. д. Большинство современных исследователей признает живую природу бактериофага, считая его вирусом, паразитом бактерий, поражающим микробные клетки.

О том, что корпускулы бактериофага представляют собой своеобразно организованные формы жизни и могут быть отнесены к вирусам, свидетельствуют и данные электронной микроскопии фаголизиса стафилококков, представленные А. Г. Музыченко (Москва). Вывод был сделан на основании анализа обширного материала (800 снимков), иллюстрирующего морфологию стафилококкового бактериофага на разных стадиях адсорбции и лизиса бактерий. Фаговые частицы имеют сперматозоидоподобную форму с круглой головкой и отростком, с несколько утолщенным концом. При помощи отростка активный бактериофаг прикрепляется к бактерии уже после 5—10-минутного контакта. После адсорбции происходит внедрение корпускул бактериофага отростком и проникновение в бактериальную клетку субстанции бактериофага.

Многочисленными экспериментальными работами советских и зарубежных ученых убедительно продемонстрирована изменчивость бактериофагов. В целом ряде сообщений содержался материал по изучению изменчивости бактериофага, еще раз характеризующий их живую природу (А. С. Кривиский, Я. И. Раутенштейн, Москва). Исходя из живой природы бактериофага, многие используют путь направленного изменения его свойств, учитывая тесную взаимосвязь фага и культуры, на которой он развивается. В частности, использование метода направленной изменчивости привело к созданию высокоактивных фагов, обнаруживших в эксперименте и в клинике успешное лечебно-профилактическое действие (К. Н. Кондратьев, Томск; К. С. Зобнина, Казань; С. П. Диденко, Москва; С. А. Семичева, Горький; А. Г. Никонов, Ростов н/Дону).

Сообщение об обнаружении нового явления в бактериофагии — «сверхактивной бактериофагии» было неожиданным, хотя и встречено с интересом. Сущность этого феномена заключается в получении, при использовании специально выработанной методики, фаголизатов, титры которых оказывались выше практически известных до настоящего времени норм для бактериофага — от 10^-25 до 10^-50 и выше. Способность бактериофага при таких огромных разведениях лизировать бактериальные тела должна указывать на его размеры, несовместимые со свойствами живого существа. Таким образом, вновь ставится под сомнение корпускулярность, живое происхождение бактериофага. Однако, приведенные экспериментальные данные навряд ли способны поколебать доказанную технически совершенными методами вирусную природу бактериофага вообще.

В последние годы явление бактериофагии привлекает к себе внимание также и в связи с разработкой ряда теоретических вопросов. Придерживаясь вирусной природы бактериофагов, исследователи считают фаги рациональной моделью для изучения биологических свойств вирусов. Экспериментально доказана возможность использования фагов и в качестве модели для изучения противоопухолевых химиопрепаратов (Д. М. Гольдфарб, Москва). Теоретической предпосылкой нового использования фагов явилось высокое содержание в бактериофаге дезоксирибонуклеиновой кислоты, к которой, как оказалось, имеют выраженный тропизм эмбихин, сарколизин и др. препараты. В связи с обнаружением противофагового действия названных препаратов напрашивается мысль о возможности в некотором отношении, сходства между происхождением бактериофагов и опухолей.

В последние годы были разработаны новые, более совершенные методы изготовления бактериофага. В частности, в Тбилисском НИИВСе выполнены работы по селекции высокоактивных рас дизентерийного фага, путем пассажа через организм больных. Как показали клинические испытания, препарат обладает высокой лечебной активностью (Г. В. Квиташвили, Тбилиси). Исследования в Казанском НИИЭГ привели к созданию так называемого адаптированного дизентерийного бактериофага широкого диапазона действия. При его изготовлении учитывались особенности местной микрофлоры. Постоянно производилась адаптация фагов к свежевыделяемым резистентным формам возбудителя с последующим пассажем через организм больных. Были выявлены более высокие лечебные свойства бактериофага (К. С. Зобнина, Казань). Предложено усиливать литическую активность фага периодическим подбором нового эталонного штамма-воспитателя для изменения фага в нужном направлении. При этом методе изготовления бактериофага учитываются особенности микробного пейзажа в тот или иной период. Бактериофаг обнаружил хороший лечебный эффект при острой дизентерии (С. И. Диденко, Москва). Предприняты попытки усиления действия бактериофага аэрационным методом (С. З. Кривошеева, Уфа), периодическим добавлением бактериальных клеток по мере их лизиса в питательной среде, что умножает энергию, необходимую для синтеза шаговых частиц (Л. Б. Борисов, Ленинград). Благодаря сочетанию селекции и пассирования, адаптированные фаги, первоначально отличавшиеся слабой активностью, приобретали широкий диапазон действия и высокий титр (К. Н. Кондратьев. Томск). И, наконец, вирулентность бактериофага удалось повысить путем культивирования его на микробах и в организме зараженных животных (А. Г. Никонов, Ростов), при пассаже его в изолированной петле кишечника экспериментальных животных (С. А. Семичева, Горький).

Таким образом, концепция происхождения фага как вируса бактерий позволяет правильно использовать бактериофаг для научно-практических целей.

Получены и данные о том, что воздействие сульфаниламидов и левомицетина на дизентерийный фаг не оказывает влияния на активность последнего. Комбинированное применение бактериофага и левомицетина при экспериментальной дизентерии обнаружило лучший эффект, чем введение каждого препарата в отдельности (Е. Б. Гинзбург-Маслова, Москва).

Упомянутые выше наблюдения подтвердились при сопоставлении действия дизентерийного бактериофага, антибиотиков в комбинации с дизентерийным бактериофагом при лечении больных острой дизентерией (Н. А. Иванова, Горький). Лучшие результаты при лечении больных острой дизентерией получены при комбинированной терапии антибиотиками с фагом — выздоровление наблюдалось у всех больных (204 чел.). При лечении же только антибиотиками лечебный эффект получен у 83 % больных. Лечение дизентерийным фагом и сульфаниламидами в отдельности было еще менее успешным.

Наблюдения над лечением дизентерийным фагом 470 больных острой дизентерией позволили сделать вывод (Т. В. Квиташвили, Тбилиси), что фаг может иметь более широкие показания к применению, чем сульфаниламиды и антибиотики. Исчезновение патологических примесей в стуле, прекращение бактериовыделения происходит в более ранние сроки, чем при сульфаниламидотерапии или при лечении антибиотиками, причем выздоровление наблюдалось у 98,5 % больных. Хорошие результаты получены и при использовании адаптированного дизентерийного бактериофага в острой дизентерии (выздоровление у 92,7 % больных) и в комплексном лечении хронической дизентерии (С. Б. Перельштейн. Казань). Так, при фаготерапии 420 больных острой дизентерией выздоровление наступало в более ранние сроки и в большем проценте случаев, чем при лечении сульфаниламидами и сульфаниламидами с синтомицином или левомицетином. При комплексном лечении больных хронической дизентерией терапевтический эффект от фага не уступал полученному при комбинированной терапии сульфаниламидами с антибиотиками. У 88,9 % больных достигнуто клиническое выздоровление. С меньшим успехом бактериофаг применен H. С. Верхозиной (Хабаровск). Из 204 больных острой дизентерией лечебный эффект наблюдался у 141 (69,1 %). Замечено, что из-за недостаточного дезинтоксикационного свойства бактериофага лечебный его эффект при тяжелых формах дизентерии уступает антибиотикам.

Известно, что бактериофаг обладает строго специфическим действием на микробную клетку. Благодаря этому свойству фаг находит себе применение для индикации микробов. Удается установить не только вид, но и тип бактерий. Причем, по данным ряда авторов, метод установления серотипов дизентерийных палочек с помощью фагов более специфичен, а вместе с тем — более прост и доступен, нежели типировапие бактерий монорецепторными сыворотками (А. А. Бестужева, Фрунзе; М. А. Солабай, Одесса; Т. Г. Чанишвили, Тбилиси).

В связи с установлением в последнее время в этиологии детских колиэнтеритов роли патогенных кишечных палочек, выделение и типирование которых связано с трудностями, практически интересна возможность фаготипирования кишечной палочки бактериофагами патогенных штаммов в. coli 0—26, 0—55, 0—111, 0—125 (3. Д. Гоголадзе, Тбилиси; Тер-Погосян, Днепропетровск).

Исходя из современных данных о механизме взаимодействия фага с микробной клеткой, В. Д. Тимаков и Д. М. Гольдфарб разработали новый метод применения фаза для диагностики инфекционных заболеваний при помощи так называемой реакции нарастания титра фага (РНФ). Реакция заключается в учете титра фага, размножающегося в результате взаимодействия с микробами. РИФ применена с успехом для индикации не только дизентерийных палочек вида Флекснера, но и видов Зонне и Ныокестла (Р. М. Чернявская, Кишинев).

Интересны работы по изучению самых молодых — бруцеллезного и листереллезного — фагов. Обнаружено существование, в соответствии с антигенной структурой бруцелл, Ви- и О-фагов. Причем бруцеллезные О-фаги хорошо лизируют культуры, лишенные Ви-антигена. Ви-фаги способны лизировать микробные клетки, обладающие Ви-антигеном. Доказано широкое распространение лизогении у бруцелл (М. С. Дрожевкина, Ростов). Бруцеллезный фаг оказался весьма распространенным среди лабораторных штаммов бруцелл (Н. Н. Островская, Москва). Бактериофаг найден в различных объектах внешней среды в хозяйствах с крупным рогатым скотом, зараженных соответствующим типом бруцеллеза. Бруцеллезный бактериофаг выделен и от больных бруцеллезом людей (М. 3. Попхадзе, Тбилиси).

Фагированные животные, зараженные бруцеллезом (М. З. Попхадзе, Тбилиси), быстрее освобождались от бруцелл, чем контрольные. Введение бактериофага в организм больных бруцеллезом экспериментальных животных приводит, после второго курса лечения, к полной дезаллергизации или к резкому ослаблению реакции, более быстрому нарастанию титров агглютининов, ускорению процесса освобождения организма от возбудителя (М. С. Дрожевкина, Ростов). Наблюдения над успешным лечением фагом 36 больных бруцеллезом свидетельствуют о перспективности продолжения исследований в этом направлении.

При изучении нового листереллезного бактериофага (М. И. Щеглова, Саратов) показана возможность использования его для диагностики, профилактики и лечения тяжелого, малоизученного заболевания — листереллеза, распознавание и лечение которого являются проблемными вопросами. Экспериментальное изучение препарата подтвердило его хорошие лечебные и профилактические свойства (под его влиянием повышалась фагоцитарная активность лейкоцитов у подопытных животных). Согласно полученным данным, применение бактериофага облегчает течение инфекции и предотвращает от гибели часть животных при экспериментальном мышином тифе в условиях лучевой болезни (Н. В. Гогебашвили, Тбилиси).

Установлена значительная эффективность фагопрофилактики дизентерии. Так, например, из числа фагированных контактных повторные случаи заболевания дизентерией в очагах составили 0,6 %, среди контактных в контрольной группе — 1,7 % (Т. И. Быстрицкая, Томск). По данным других наблюдений, в фагированной группе из 805 человек заболели — 4, в то время как среди 1010 не получавших фаг заболели 39 О. В. Мачавариани, Тбилиси).

Новым в лечебной практике является бактериофаготерапия больных салмонеллезом (Г. П. Хахарева, Горький). Лечебный эффект Бреслауфага в эксперименте, выделенного из испражнений больных и адаптированного к местным штаммам салмонелл, колебался от 25,5 % до 40 % в опытах, где животные заражались смертельной дозой бактерий. При лечении 73 больных выздоровление наступило в 87,7 %, бактериовыделение прекратилось у 71.

Имеются наблюдения о лечении колипротейным бактериофагом 15 детей, больных на протяжении 3—12 месяцев дисфункцией кишечника (А. М. Троицкая, Горький). У больных были выделены протей, патогенные кишечные палочки 0—111 и паракишечные палочки. У 13 стул нормализовался. Дети прибавили в весе. По окончании курса лечения у троих выделены патогенные кишечные палочки, обладавшие, однако, пониженной вирулентностью.

Бактериофаг был успешно применен во время вспышки холеры в одном из городов в Восточном Пакистане в мае—июне 1958 г. (А. Г. Никонов, Ростов). Культивированием бактериофага на холерных вибрионах в организме зараженных животных получен весьма эффективный препарат. Холерный бактериофаг вводился с солевыми растворами 2 раза в день — интравенозно и внутрь. Из 22 больных алгидной формой холеры, подвергнутых фаготерапии, 20 выздоровело, 2 умерло. Профилактическое применение бактериофага привело к прекращению заболеваемости в пораженном холерой районе города. Достигнуты положительные результаты при лечении стафилофагом больных стафилодермиями, с долго не заживающими ранами (А. Я. Вартепатов, Тбилиси; С. И. Довжанский, Львов; Д. Н. Гвенепадзе, Тбилиси);

Подводя итоги 2-й межинститутской конференции по проблеме бактериофагии, следует подчеркнуть особую важность исследований по изысканию путей усовершенствования бактериофага, фаготерапии и профилактики дизентерии, бруцеллеза, колиэнтеритов и других острых инфекций; если бактериофаг был явно недооценен среди средств борьбы с инфекционными заболеваниями, то итоги конференции ясно показывают, что он при постоянном его совершенствовании, может стать не только ценным дополнительным, но при ряде заболеваний — самостоятельным средством лечения.