Experience of growing pale spirochete in tissue cultures

Abstract

The living conditions of microorganisms in tissue cultures, of course, are not identical to the conditions of their life in a living organism, but they approach them and therefore many questions related to the relationship between a living tissue cell and a virus can be resolved by direct observation in vitro.

Full Text

Условия жизни микроорганизмов в тканевых культурах, конечно,, не идентичны условиям их жизни в живом организме, во они приближаются к ним и потому очень многие вопросы, связанные с взаимоотношением Между живой тканевой клеткой и вирусом, могут быть разрешены при непосредственном наблюдении in vitro.

Carrel и Jngebrigsten¹) первые показали, что ткани, выращиваемые вне организма, способны вырабатывать антитела. В тканевых культурах можно получить выработку гемолизинов, бактериолизинов (Schilf²), преципитинов (Pzygode³), Bloom, Löwenthal и Miesch⁴) в культурах из селезенки кролика наблюдали фагоцитоз. Smyth ⁵) выращивал в тканевых культурах различные виды микробов н сделал чрезвычайно интересное наблюдение: оказалось, что некоторые патогенные микроорганизмы как бы способствуют пролиферации фибробластов, загрязненные же вульгарными микробами культуры быстро погибают. Lewis³) отмечает, что в культурах желез, зараженных in vitro tbc, появляются полибласты и характерные для tbc продукты их преобразования: эпителиоидные и гигантские клетки. Эпителиоидные клетки фагоцитируют, туберкулезные палочки, окружая их колонии, соединяются в группы, сливаются в гигантские клетки, образуя гистологически типичный бугорок.

Особенно ценным оказался метод тканевых культур при выращивании фильтрующихся вирусов. Фильтрующиеся вирусы могут жить и размножаться in vitro только в симбиозе с тканевыми элементами; с прекращением жизни ткани прекращается жизнь и размножение фильтрующегося вируса.

Спирохэт выращивали в тканевых культурах очень мало. Steinhardt’y⁶) первому еще в 1913 г. удалось культивировать в тканевых, культурах бледную спирохэту. Выращивал еще спирохэт (Sp. pallida и Sp. gallinorum) и LevaditL⁷). Levaditi отмечает, что спирохэты не способны развиваться в тканевых культурах: несмотря на пышный рост фибробластов, Sp. gallinorum живет в культуре фибробластов не дольше 5—6 дней. Бледная спирохэта в тканевых культурах, по Levaditi, также быстро теряет свою жизнеспособность и вирулент»- узость. Она прекращает свою жизнь уже на 9-ый день, но на 15-ый день еще можно наблюдать в импрегнированных серебром препаратах инволюционные формы спирохэт. Заразить кролика спирохетами из тканевых культур Lе Vаditі не удалось.

Мы попытались выращивать бледных спирохэт, как в культурах сифиломы кроличьего яичка, так и в культурах из кроличьих шанкров. Всего нами поставлено было 8 опытов: 5 из кроличьих орхитов и 3 из кусочков шанкров. При каждом опыте наложено было 20—25 культур. Часть культур выращивалась при 38,5—39°—optimum’e роста кроличьей ткани, часть культур выращивалась при 35° — -optimum’e роста бледной спирохэты. Средой для культур служила кроличья (часто аутогенная) плазма и экстракт из кроличьей же селезенки.

При 38,5° кусочки сифилом яичка уже на 2-ой—3-й день -обрастали довольно густым венчиком фибробластов. На 2-й день можно было видеть в ultra, что в окружающую плазму выползает множество очень подвижных спирохэт, вполне сохранивших свою форму. На 3-ий день спирохэты как бы несколько набухали, становились толще, движения их делались медленнее, на 4-ый день спирохэты уже теряли облик бледных спирохэт: завитки их уплощались, тело утолщалось, движение вялое, пассивное. Если культура не перевивалась, то на 5-ый день в окружающей плазме мы их совсем не находили. При перевивке же, которая обычно производилась на 3-й день роста культуры, на 2-ой день после пассажа мы в окружающей плазме снова видели многих свежих, хорошо сохранивших форму, подвижных спирохэт—получалось впечатление, что в новую среду выползло из пересаженного кусочка много новых спирохэт, но на 3-и день эти спирохэты также дегенерировались, и на 4 й день после пассажа, т. е. на 7-ой день после первичного заложения культуры мы видели лишь единичные, едва передвигающиеся спирохэты, резко утолщенные, с совершенно плоскими завитками. После 3-го пассажа мы вообще больше в плазме спирохэт не находили.

Некоторые культуры мы не пересаживали в другую плазму, а просто на 2-й, 3-й день после заложения культуры, отсасывали жидкость и, промыв культуру рингеровским раствором (для удаления продуктов обмена), прибавляли экстракт из кроличьей селезенки (т. е. свежей питательной среды). На 5-ый день в таких культурах при пышном росте фибробластов мы в окружающей плазме совсем не находили спирохэт, в то время как при пересадке кусочков в новую плазму, мы находили слабо подвижных спирохэт еще на 7-й день.

При 35° нам удавалось находить спирохэт даже еще в 4-м пассаже, т. е. на 16 й день, так как пассировали мы такие культуры только на 4-й день, но рост фибробластов в таких культурах был очень слабый, неравномерный.                                                          .

В 2-х случаях мы пытались заразить кроликов растущими культурами из сифиломы яичка, но безрезультатно. Один из инфецированных кроликов погиб на 4-м месяце от интеркуррентного заболевания; от 2-го на 9-м месяце была взята поплитеальная железа и перевита 2-м свежим кроликам. Срок наблюдеѳия еще не истек (пока прошло всего 2 м.).

Из 42-х посаженных кусочков из кроличьих шанкров нам лишь в 2-х случаях удалось получить слабый рост фибробластов—в обоих с одной стороны эксплантированного кусочка. Но несмотря на то, что роста ткани мы в остальных случаях не наблюдали, почти всегда мы отмечали выползание чрезвычайно подвижных спирохэт в окружающую плазму, причем у нас получилось впечатление, чтоспрохэты здесь не так быстро дегенерировали, что они лучше сохраняли свою подвижность без перевивки даже на 4-ый—-5-й день после наложения культур» Если даже после пересадки нерастущего кусочка шанкра в новую среду, он подвергался некоторому аутолизу, уменьшался в объеме и вокруг него в плазме образовывалась небольшая полость, то все-таки спирохэты в этой плазме оставались еще подвижными и не слишком заметно изменялись- морфологически.

На основании наших данных у нас сложилось убеждение, что бледные спирохэты в тканевых культурах не размножаются, а только переживают“. Но переживать они могут и значительно дольше и не в культурах тканей, а просто при сохранении на льду или при комнатной с кусочками ткани и даже без таковых. По Lacy и Haythorn’y⁸) Sp. pallida сохраняет свою подвижность при комнатной t° в капиллярах с сывороткой из язвы до 121-го дня, в тканях (яичко кролика) в физиологическом растворе 58 дней. Kissmeyer⁹) получал субкультуры от спирохэт, сохранявшихся 3 месяца при 16°.

У нас создалось впечатление, что растущие in vitro фибробласты несколько даже подавляют нормальную жизнеспособность бледной спирохеты, что чем быстрее и пышнее растут in vitro фибробласты, тем быстрее дегенерирует бледная спирохэта. Насколько правильно наше предположение, покажет только дальнейшее наблюдение.