Comparative assessment of the coloration of tubercle bacilli in the flotation layer of pleural exudate according to Ziehl-Nielsen and Ozol

Abstract

For the clinician, the detection of tuberculous bacteria in the pleural exudate is of great importance.

Full Text

Для врача-клинициста обнаружение туберкулезных бактерий в плевральном эксу­дате имеет большое значение.

В плевральных эксудатах туберкулезную палочку удается обнаружить по методу Циль-Нильсена по данным А. Е. Рабухина в 4% случаев, Н. А. Пустоваловой — только в 0.5%.

Получивший в последнее время распространение флотационный метод позволил обнаруживать туберкулезные палочки в данном материале несколько чаще. Н. В. По­пова и Г. А. Вонзблейн из 15 плевральных эксудатов, отрицательных по Циль-Ниль- сену, методом флотации обнаружили туберкулезные палочки в четырех случаях.

На кафедре микробиологии Казанского медицинского института с успехом при­меняется комбинация метода флотации с окраской по принципу толстого мазка для исследования мокроты на туберкулезные бактерии. Это позволило при исследовании большого количества проб обнаруживать туберкулезные палочки в мокроте на 10—12% чаще, чем при обычном методе флотации (М. Г. Шром, Р. И. Алхан-Кемал).

Методика. Посуда обрабатывалась по методу А. А. Клебановой и А. Е. Скряби­ной. Исследуемый материал переносился из пробирок в склянки Соксклета, куда до­бавлялось равное количество 0,5% раствора NaOH. Все содержимое энергично встря­хивалось в течение 10 мин, затем добавлялся 1 мл ксилола и дистиллированная вода до метки 130—150 мл и снова встряхивалось 10 мин-, после этого добавлялась ди­стиллированная вода до самого верха, и все содержимое отстаивалось в течение часа. Весь сливкообразный слой наслаивался пастеровской пипеткой в равном объеме на 2 предварительно подогретых на закрытой водяной бане предметных стекла таким образом, что площадь каждого мазка равнялась 3,5 X 1,5 — 2 см. Наслаивалось 3— 5 слоев.

Высушенные на водяной бане мазки окрашивались, первый — по классическому методу Циль-Нильсена, второй — по методу А. Э. Озола.

Препарат окрашивался карболовым раствором фуксина в течение 5 мин при от­хождении паров обильно налитого на препарат фуксина, не допуская кипения. Так как раствор фуксина при продолжительном подогревании препарата испаряется, то необходимо по мере приближения момента его полного испарения добавлять новую порцию фуксина при строго горизонтальном положении стекла.

После пятиминутного охлаждения окрашенного препарата при комнатной тем­пературе остаток фуксина сливается.

Препарат промывается водой до тех пор, пока красный цвет воды не станет ста­бильно слегка розовым.

Невысушенный препарат обесцвечивается 10% раствором серной кислоты.

Препарат высушивают в вертикальном положении при комнатной температуре или при 60°. Высушивать можно совершенно чистой фильтровальной бумагой, покры­вая осторожно не сразу весь препарат.

Высушенный мазок перед микроскопированием обесцвечивается несколькими кап­лями смеси Озола, представляющей собой 10% раствор NasSCb в спирте. (Удобно готовить эту смесь в следующей пропорции: 0,02 г Na2SO3 растворяется в 2 мл дистиллированной воды, затем добавляется 0,4 мл 96° спирта). Такое соотношение удобно, так как смесь нестойкая и может быть годна в течение 3—5 дней.

Нанесенная на препарат смесь в течение нескольких секунд обесцвечивает тот или иной участок препарата. Затем смесь быстро сливается, и препарат тщательно, но осторожно просушивается чистой фильтровальной бумагой, после чего он микро- скопируется иммерсионной системой.

При микроскопировании бросается в глаза белое или кремоватое поле зрения, на котором при поворотах микровинта из различной глубины мазка выплывают красные туберкулезные палочки. При микроскопировании каждый препарат просматривался в 100 полях зрения.

Результаты наших исследований представлены в таблице:

Характер эксудата	Количество	Положительных находок
		по ори!инальной флотации	по комбинированной флотации
Серозный ....	29	10	И
Серозно-гнойный . .	33	28	30
Гнойный .               . .	19	17	18
Геморрагический . .	18	8	13
Итого: . . .	99	63	72

В препаратах, окрашенных по методу Озола, обычно обнаруживается большее количество туберкулезных палочек, чем в препаратах, окрашенных по Циль-Нильсену. Общее количество туберкулезных палочек в единовременно окрашенных препаратах, поддающихся подсчету, по Циль-Нильсену— 750, по Озолу — 2460.

Значительно большее количество туберкулезных палочек в мазках, окрашенных по Озолу, зависит, по-видимому, и от отсутствия дополнительной окраски, и от по­вторного обесцвечивания сернистокислым натрием. Последний, как показывают иссле­дования Иогансена, восстанавливает красный цвет обесцвеченных серной кислотой молодых или измененных форм туб. микобактерий. Светлый фон также помогает легче обнаружить туберкулезные палочки при малом их количестве в мазке.

Больший процент положительных находок в мазках, окрашенных по Озолу, по сравнению с мазками, окрашенными по Циль-Нильсену, можно также объяснить на­слаиванием сливкообразного слоя не в виде капель-мазков, что затрудняет обнару­жение туберкулезных палочек, а в виде мазка площадью 3,5 X 1,5 — 2 см.

Необходимо отметить, что предлагаемый нами метод дает эффект только при пользовании для окраски препаратов чистым кристаллическим фуксином и хими­чески чистым сернистокислым натрием.