On the question of the value of agglutinating serums

Abstract

Agglutinating sera, as a means for determining the physiognomy of this or that microorganism, took one of the first places in microbiology.

Full Text

Агглютинирующие сыворотки, как средство для определения физио­номии того или другого микроорганизма, в микробиологии заняли одно из первых мест.

В каждом случае при идентификации микроорганизмов мы прибе­гаем к сыворотке. Постановка р. агглютинации со специфической сыво­роткой есть заключительный аккорд в многогранной методике отнесения- к той или другой группе обследуемого штамма. Ни ферментативные спо­собности, ни физиологические особенности, ни морфологические данные лам в большинстве случаев не скажут того, что говорит р. агглютинации-

По методике приготовления агглютинирующих сывороток имеется много указаний как в капитальных трудах Златогорова, Коllе- Wassermann, Коllе-Неtsсh, так и в периодической печати (Трушина и др.).

Все авторы, работавшие в этой области приходят к выводу, что при приготовлении агглютинирующих сывороток необходимо брать поливалент­ную взвесь микроорганизмов. Это положение как бы узаконено и против него в литературе возражений не имеется. Но о ценности изготовляемых сывороток и преимуществах одной сыворотки по сравнению с другой, ука­заний в литературе нам встретить не удалось. Между тем этот вопрос важен, так как известно, что р. агглютинации со специфической сыво­роткой обычно заканчивается исследование полученного микроорганизма. Нередко, только по одной реакции агглютинации судят о физиономии вы­деленного штамма, в особенности в условиях работы периферической лаборатории. Следовательно качество агглютинирующих сывороток должно быть высокое.

Мы, работая над изучением штаммов, выделенных при ряде обсле­довательских экспедиций, по изучению кишечных инфекций в Кузбассе и при работе по определению физиономии выделенных штаммов на вспышках брюшного тифа в Сибкрае, р. агглютинации ставили не с- од­ним рядом сывороток, изготовленных в каком-нибудь одном институте, а по- крайней мере с тремя сыворотками, изготовленными в Мечниковском, Центральном и Харьковском Сан-бактериологических институтах- Сыво­ротками, изготовленными в Томском Сан-бактериологии. Институте, мы пользовались, но о них в настоящем сообщении не будет речи, так как официального производства агглютинирующих сывороток для снабжения периферии в Томском институте нет.

В настоящем сообщении мы желаем заострить внимание на качестве тех агглютинирующих сывороток, коими пользуется большинство лабора­торий, если не всего СССР, то все же значительной его части. Мате­риалом для настоящего сообщения послужили 80 штаммов b. t. abdomi­nalis, выделенных исключительно из крови брюшно-тифозных больных. Указанные штаммы предварительно были изучены как с серологической, так и биологической стороны, чтобы исключить паратифозную группу. Следовательно, в дальнейшем мы будем говорить о качестве агглютини­рующих брюшно-тифозных сывороток, но вопрос, затрагиваемый нами, нисколько от этого не меняется: все, что будет сказано в отношении брюшно-тифозных агглютинирующих сывороток, относится также и к -остальным агглютинирующим сывороткам против кишечной группы мик­роорганизмов. Реакцию агглютинации мы ставили со специфической сывороткой для Ь. t. abdominalis Мечниковского института с титром 1:100.000, Харьковского института с титром 1:10.000 и Центрального института с титром 1:5000. Указанные сыворотки были изготовлены приблизительно в одно время в 1930 году; из них первые две жидкие и третья—сухая.

Методика регистрации полученных результатов была обычная. Первые ре­зультаты учитывались через два часа стояния в термостате при 37° и окончатель­ные через сутки, т. е. 20—24 часа стояния при комнатной t° Интенсивность реакции учитывалась крестами, при чем за три креста мы считали осадок из агг­лютинировавшихся бактерий на дне пробирки и почти полное просветление жидко­сти над ним, за два креста—ясную агглютинацию с небольшим осадком на дне пробирки и с мутной хлопьевидной жидкостью над ним, за один крест—отсутствие •осадка на дне, но видимая агглютинация в соответствующих разведениях сыворо­ток. Как правило, реакция читалась невооруженным глазом, но для контроля все пробирки с отрицательными результатами просматривались в агглютиноскоп. Для получения сравнительных результатов реакция ставилась с разведением сыво­ротки до 2/10 титра, 1/5, 1/2 и до титра, всего следовательно для каждой сыво­ротки ставилось четыре разведения.

Из всех 80 штаммов совершенно не агглютинировалось ни одной из сывороток только два штамма, т. е. 2,5%. Все же указанные штаммы по биохимическим своим свойствам должны быть отнесены к бр.-тифозному микроорганизму. Вместе с указанными двумя штаммами сыворотка Мечниковского института, начиная с разведения 1/10 титра, не агглюти­нировала 5 штаммов, т. е. 6,25%- Сыворотка Харьковского ин-та—7 штам­мов, т. е. 8,7% и сыворотка Центрального Ин-та—9 штаммов, т. е- 11,2%.

Из этих данных видно, что указанные сыворотки неодинаково спе­цифичны. Если бы р. агглютинации ставилась с одной из указанных сы­вороток, то при условии идентичности других признаков мы бы полу­чили в одном случае 6,25%> в другом 8,7% и в третьем 11,2% неагг- лютинабальных штаммов, при постановке же с тремя сыворотками, мы получили всего 2,5% неагглютинабильных штаммов. Эта цифра 2,5% вами должна считаться относительной (об этом будет сказано немного ниже), но все же близкой к истине. Такие данные у нас были получены при работе с гемокультурами.

Полученные результаты представлены в таблице № 1.

Таблица № 1.             

К-во положит, окончат, выпадений реакции при каждом из разведений сывороток.

Сыворотка ин-та	1/10 титра	1/5 титра		1/2 титра		Титр		Всего положит		Вовсе во агг. лютинир.
	К-во       %_	К-во	%	К-во	%	К-во    %		К-во	%	К-во	%
Мечниковского..................	5    6,25	2	2,25	14	17,5	54	67,5	75	93 ,75	5	6,25
Харьковского....................	1    1,2	—	—	8	10,1	64	80	73	91,3	7	8,7
Центрального.....................	-	—	—	3	3,6   68		85,2	71	8§,8	9	11,2

При разборе указанной таблицы, видно, что сыворотка М. И., имея высокий титр ( 1:100.000), с одной стороны дает больше, чем другие сыворотки (93,75%), положит, реакций, ставящих ее на первое место по сравнению с другими сыворотками, с другой стороны дает больше, чем другие сыворотки положит, реакций, не доходящих до титра; так, до 1/10 титра агглютинир. 5 штаммов, 1/5 титра 2 шт-ма и до ½ титра-14 шт-мов. Всего следовательно до титра сыворотки не агглютинировалось 21 штамм.

Сыворотка Харьковского института, имея титр 1:10.000 и занимая по общему количеству положит, реакций (91,3%) среднее место среди этих трех сывороток, уже дает лучшие данные по количеству положи­тельных реакций, выпавших до титра. Так, из общего числа 91,3% агглютинпр. штаммов, только один штамм агглютинировался до 1/10 титра,, до 1/5 т-ра—ни одного и до 1/2 титра—8 штаммов, т, е. всего не дали по- лож. результатов до титра 9 штаммов.

Сыворотки Центрального института, находясь, с одной стороны, по общему к-ву выпавших положит, реакций (88,8%) на последнем месте, с другой стороны, дает меньше всего выпавших реакций не до титра. Из всего к-ва 71 штаммов, давших положительные результаты с указанной, сывороткой, только 3 штамма дали реакцию до ½ титра, а остальные 68 до титра.

Посмотрим теперь, какова сила реакции при каждом разведений сывороток (таб. ІІ-ая).

Из приведенной таблицы видно, что сыворотка М. ин-та быстро дает снижение интенсивности. Так, реакция с тремя плюсами в разведе­нии сыворотки 1/10 дает 56 штаммов, т. е. 70%; при разведении 1/5 титра 50 штаммов, т. е. 62,5%, при разведении до ½ титра уже только 2 штамма, т. е. 25% и к титру резкую реакцию ни один штамм не дает. В этом случае мы наблюдаем быстрое снижение интенсивности реакции с увеличением разведения сырости. Сыворотка Харьковского ин-та дает уже нестолько резкое снижение. При разведении сыворотки до 1/10 титра у резкую реакцию дает 65 штаммов (81,2%); до 1/5 титра 55 шт-в- (68,7%), до ½ титра 43 шт-ма (59,7%) и до титра—7 шт-в—7.6%. Соответственно этим цифрам идет постепенное увеличение средних и сла­бых реакций. Количество средних реакций к титру значительно больше, чем у сыворотки Мечниковского ин-та.

На свойствах сыворотки Центрального ин-та необходимо оста­новиться подробнее. Данная сыворотка сухая, расфасована по 0,1 гр. в ампуллах. Растворяется сыворотка с трудом, требуется су­точное пребывание ее в термостате при 37°, чтобы растворение g произошло нацело. Изредка приходилось наблюдать неполное растворение сыворотки и после указанного срока. Как видно из таблицы эта сыворотка действует по иному по сравнению с предыдущими сыворотками. Как правило c увеличением разведения должна уменьшаться сила реакции. Совершенно иное нам пришлось наблюдать в данном случае: начиная от разведения 1/10 титра и до ½ титра, нарастает количество штаммов, дающих резкую реакцию.

Так, при разведении до 1/10 титра дают резкую реакцию 20 шт-в (25%), до 1/5 титра 25 шт-в  (31,2%) и до ½ титра—34(34,4%)

Какого института сыворотка	1/10 титра				1/5 титра				½ титра				Титр
	+++	++	+	---	+++	++	+	---	+++	++	+	---	+++	++	+	---
мечниковского	56	14	5	5	50	17	3	10	2	49	16	13	---	1	53	26
	70,0	17,5	6,25	6,25	62,5	21,2	3,8	12,5	2,5	61,2	20,0	16,3	---	1,2	66,2	32,6
харьковского	65	5	3	7	55	15	2	8	43	23	5	9	6	25	34	15
	81,2	6,2	3,8	8,8	68,7	18,7	2,5	10,1	53,7	28,7	6,3	11,3	7,6	31,2	43,1	17,7
центрального	20	25	22	13	25	22	20	13	34	20	13	13	28	25	14	13
	25,0	31,2	27,5		31,2	27,5	25,0	16,3	43,4	25,0	16,3	16,3	31,2	31,2	17,5	16,3

Только к титру количество их (28 или 35%) по сравнению с преды­дущей "цифрой падает, но еще значительно выше, чем при разведении до 1/10 титра. Еще ярче обрисуется приведенные данные, если мы укажем, что 4 штамма начали агглютинироваться только с разведения до 1/5 титра и один  штамм с 1/2 титра. Резче реакция стала к  1/2 титру у 13 шт. (16,3%), по сравнению с числом штаммов, давших резкую реакцию к 1/5 титра. У 17 штаммов (21,8%) сила реакции возросла к 1/2 титру и у двух штаммов (2,4%) только к титру.

Общая характеристика всем только что разобранным сывороткам указанного выпуска должна быть дана следующая: по количеству поло­жительных реакций первое место занимает сыворотка Мечниковского ин-та, но уступает последующим двум по своей силе. Второе место по количе­ству положительных реакций занимает сыворотка Харьковского ин-та, по своей же силе она ничем не отличается от обычного типа сывороток. Сы­воротка Центрального Ин-та, находясь на последнем месте по к-ву положит, реакций, хотя и дает значительное количество резких реакций при раз­ведении сыворотки до титра, но парадоксальное ее поведение при малых разведениях и некоторая задержка при растворении снижает ее ценность.