Study of a nosocomial outbreak of staphylococcal infection using various labeling methods

Full Text

В настоящее время внутрибольничные инфекции (ВБИ) представляют одну из наиболее актуальных проблем здравоохранения. Согласно данным отечественных и зарубежных исследователей, ВБ И развиваются у 5—20% госпитализированных больных [8, 10, 14]. Исследования последних лет свидетельствуют, что, несмотря на многообразие микробных возбудителей, вызывающих внутрибольничные инфекции, стафилококки остаются ведущим этиологическим фактором [4, 12, 13].
Анализ результатов многолетних эпидемиологических наблюдений и бактериологических исследований показал, что заболеваемость стафилококковыми инфекциями обусловлена, как правило, особыми клонами микроорганизмов. В связи с этим необходимо четкое внутривидовое маркирование. Для характеристики и идентификации золотистых стафилококков имеет значение определение антибиотикограмм, фаговаров, биоваров, сероваров и т. д. Наиболее целесообразно применение нескольких маркеров одновременно [7]. Перечисленные методы внутривидового дифференцирования, за исключением метода фаготипирования, из за их невысокой разрешающей способности и воспроизводимости не нашли широкого применения в практике. Рост числа нетипирующихся фагами культур (до 70%) снижает значимость метода фаготипирования для эпидемиологических целей [1, 9].
В последние годы появились работы, в которых с целью эпидемиологического анализа рекомендуется использовать спектры бактериальной клетки. Г. К Дегтева и соавт. [3] показали, что состав экзопродуктов является штаммовой характеристикой. Спектр внеклеточных белков стафилококков может быть своего рода меткой, позволяющей проследить миграцию штамма.
Целью нашей работы было изучение вспышки стафилококковой инфекции с помощью различных методов внутривидового типирования и сопоставление их значимости в качестве эпидемиологической метки.
Исследованы 27 штаммов золотистых стафилококков, выделенных от больных с различными гнойно-воспалительными заболеваниями во время внутрибольничной вспышки. Принадлежность выделенных культур к S. aureus устанавливали общепринятыми стандартными методами по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам [5]. Внутривидовую идентификацию штаммов проводили с помощью фагоантибиогико типирования и определения электрофоретического спектра экзобелков.
Лекарственную устойчивость к 10 хи миопрепар а там (хлорамфениколу, эритромицину, гентамицину, оксациллину, метициллину, пенициллину, тетрациклину, канамицину, цефалотину, ванкомицину) выявляли с помощью системы MS-2 («Abbott Laboratories», США).
MS-2—автоматизированная система, в которой определение антибиоти кочувствительности основано на нефелометрических измерениях роста бактерий в жидкой среде. В процессе ра , боты верхнюю камеру кюветы заполняли бульоном и стандартизованным инокулятом. В момент начала лаг-фа зы автоматически происходил перенос микроба из верхней камеры кюветы в одиннадцать нижних, десять из которых содержали диски с антибиотиками. Одиннадцатая камера была контрольной. Выполняя измерения оптической плотности бактериальной суспензии с интервалом в 5 минут, система MS-2 обеспечивала получение антибиотикограмм через 5—6 часов.
Фаговаровую принадлежность золотистых стафилококков изучали по общепринятому методу с помощью международного набора диагностических типовых бактериофагов.
Экзобелки для электрофоретического анализа получали при выращивании стафилококков на целлофановой мембране, наложенной на поверхность 2,5% мясо-пептонного агара, при 37°С в течение 18 часов. Клетки отделяли центрифугированием при 15000 об./мин на холоде на протяжении 30 минут. Содержание белка определяли по Лоури. Для электрофоретического Анализа экзобелков использовали прибор для высоковольтного гель-элек трофореза (вертикального) «LKB» (Швеция). Электрофорез в щелочной системе полиакриламидного геля и обработку гелей проводили в модификации Г. К. Дегтевой и соавт. [11]. Для объективной оценки сходства штаммов по белковым спектрам использовали расчеты показателей подобия [2].
Антибиотикотипироваиие выделенных культур золотистых стафилококдовольно широкого распространения данной детерминанты резистентности среди госпитальных штаммов золотистых стафилококков [6].
Результаты фаготипирования S. aureus оказались следующими: пятнадцать культур относились к фаго вару 6/42 Е/94, девять — к 6/94, две— к 6/42 Е/54/94, одна — к фаговару 6/54/94. Как видно из представленных данных, фагомозаики штаммов различались на 1, 2 фага, что позволило нам с помощью правила «трех сильных реакций» расценить перечисленные фаговары как идентичные.
В результате изучения электрофореграмм экзопродуктов, выделенных культур золотистых стафилококков, установлена гетерогенность белкового состава. В протеинограмах насчитывалось 22 фракции. Их дифференциация по относительной скорости миграции и вычисление показателей подобия белковых спектров дали возможность объединить все культуры стафилококков и принять их за один штамм с Rf 7,3; 17,3; 20,9—22,7; 26,4; 34,5; 37,3; 42,7; 46,4; 49,1; 51,8; 59,0; 60,9; 69,0—70 9; 73,6; 76,4; 78,2-80,0; 82,7; 83,6; 88,2; 93,6; 95,4; 97,3.
Следующий этап исследования заключался в сопоставлении данных, полученных различными методами внутривидового маркирования. Установлено, что культуры S. aureus, имеющие единую антибиотикограмму, идентичные фаговары, сходный спектр внеклеточных белков, могут быть приняты за один штамм.
Таким образом, результаты комплексного внутривидового маркирования S. aureus показали, что наиболее эффективны и информативны те данные, которые были получены при использовании спектров внеклеточных продуктов, поскольку они позволяли провести маркирование возбудителя на уровне штамма.

About the authors

L. T. Musina

Kazan Order of the Red Banner of Labor of the Medical Institute named after S.V. Kuratshov; Central Research Institute of Epidemiology

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation

I. A. Semina

Kazan Order of the Red Banner of Labor of the Medical Institute named after S.V. Kuratshov; Central Research Institute of Epidemiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation

O. S. Darbeeva

Kazan Order of the Red Banner of Labor of the Medical Institute named after S.V. Kuratshov; Central Research Institute of Epidemiology

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation

References

Supplementary files