Особенности продукции нейтрофилами растворимого антигена лейкоцитов-2 и его иммунорегуляторное действие при позднем ОПГ-гестозе

Полный текст

Поздний ОПГ-гестоз занимает в настоящее время ведущее место в структуре осложнений беременности, являясь одной из основных причин ^перинатальной и материнской заболеваемости и смертности [10]. Трудности диагностики и лечения ОПГ-гестоза, без сомнения, в первую очередь связаны со сложностью его патогенеза. В литературе существует много теорий, объясняющих патогенез позднего гестоза, основанных на патологических изменениях в той или иной функциональной системе, в том числе и в иммунной [3, 13]. У женщин с поздним гестозом описаны нарушения функциональной активности Т-лимфощитов, гиперактивация В-клеточного звена иммунитета [4, 5], что позволило предположить развитие патологического иммунного ответа на антигены почек, которые имеют структурное сходство с антигенами плода [2]. Вероятно, это обусловлено нарушениями ранних этапов распознавания и презентации антигенов, ведущую роль в которых играют фагоциты. Однако прямых доказательств участия фагоцитов, в частности нейтрофилов, в развитии позднего гестоза до сих пор не получено.

К настоящему времени установлено, что нейтрофилы принимают участие в иммунных реакциях опосредованно через продукцию ими целого ряда таких цитокинов, как интерлейкин-1, 6, 8, фактор некроза опухоли — альфа и др. [8]. Гораздо менее изучена иммунорегуляторная роль специфических нейтрофильных факторов, к числу которых относится растворимый антиген лейкоцитов-2 (РАЛ-2) [6]. Данный гликопротеид имеет молекулярную массу, равную 90 кд, устойчив к ферментативным воздействиям, что может свидетельствовать о его участии в воспалительных процессах в очаге деструкции [7]. Косвенным доказательством участия РАЛ-2 в иммунных процессах является значительное повышение его сывороточной концентрации при ряде заболеваний с иммунной этиологией (ревматоидный артрит, псориаз) [6]. Однако наряду с предположениями о его иммуномодулирующей роли в организме существует гипотеза, согласно которой РАЛ-2 — это структурный элемент нейтрофилов, выделяющийся в окружающую среду при разрушении последних, например, в процессе аутоиммунной атаки [6].

Имеются сведения о повышении сывороточной концентрации РАЛ-2 и при позднем гестозе [1]. Выявление конкретных механизмов поступления РАЛ-2 в сыворотку крови и его иммунорегуляторного действия могло бы расширить наши представления о патогенезе позднего гестоза.

Целью данной работы было установить особенности продукции нейтрофилами РАЛ-2 и определить его действие на функциональную активность лимфоцитов при позднем ОПГ-гестозе.

Материалом для исследования служила гепаринизированная венозная кровь, взятая у 30 женщин с физиологической беременностью и у 25 — с поздним гестозом. Обогащенную популяцию лимфоцитов и нейтрофилов выделяли стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколлверографина.

Для изучения секреторной активности нейтрофилов при ОПГ-гестозе получали супернатанты (СН) 1, 6 и 24-часовых культур обогащенных популяций нейтрофилов в периферической крови у женщин с неосложненной беременностью III триместра или у женщин с поздним гестозом. Нейтрофилы культивировали при 37°С без стимуляции или в присутствии частиц неопсонизированного латекса, зимозана и белков комплемента (Difco, USA). Жизнеспособность нейтрофилов, определяемая по окрашиванию трипановым синим, в течение всего инкубационного периода практически не менялась, оставаясь высокой (85-95%).

В полученных СН определяли содержание РАЛ-2 методом двойной иммунодиффузии в агаре по Оухтерлони (1958). Предел чувствительности используемых тест-систем составлял 1 мкг/мл (тест-системы были любезно предоставлены заведующим лабораторией иммунохимии Московского НИИ физико-химической медицины доктором медицинских наук Д.Д. Петруниным).

Для определения иммунорегуляторного действия РАЛ-2 изучали влияние чистого его препарата на продукцию лимфоцитами фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов (МИФ) в реакции торможения миграции лейкоцитов (прямой капиллярный метод) [4]. РАЛ-2 использовали в концентрации, близкой к физиологической (5 мкг/мл) [11]. Чистый препарат РАЛ-2 был предоставлен для работы Д.Д. Петруниным.

Статистическую обработку данных производили с помощью набора стандартных математических программ “Статграф”, достоверность изменений вычисляли по t-критерию Стьюдента.

Содержание РАЛ-2 в супернатантах 1, 6 и 24-часовых культур нейтрофилов в периферической крови у женщин с физиологической беременностью и поздним гестозом приведено в табл. 1.

 

Таблица1. Содержание РАЛ-2 (мкг/мл) в супернатантах культур нейтрофилов в периферической крови у беременных различных сроков инкубации

Обследованные группы	1-часовой СН	6-часовой СН	Р	24-часовой СН	Р
Женщины
С неосложненной беременностью	6,58±1,96	10,17±3,32	> 0,05	12,50±1,71	<0,05
	(n = 12)	(n = 6)		(n = 10)
С поздним гестозом	8,38±2,18	17,50±2,50	<0,05	30,63±8,78	<0,05
	(n = 8)	(n = 4)		(n = 8)

Примечание. Р — по сравнению с 1-часовым СН.

 

Анализ полученных результатов показал, что в СН нейтрофилов как у здоровых беременных, так и у женщин с гестозом концентрация РАЛ-2 повышалась со сроком инкубации нейтрофилов: минимальное содержание РАЛ-2 отмечалось в 1-часовых СН, максимальное — в 24-часовых СН. При этом накопление РАЛ-2 в СН нейтрофилов у женщин с гестозом происходило интенсивнее, и уже в 6-часовом СН концентрация РАЛ-2 увеличивалась в 2 раза по сравнению с таковой в 1-часовом СН (Р <0,05). В СН нейтрофилов в периферической крови у женщин с физиологической беременностью достоверное повышение содержания РАЛ-2 по сравнению с таковым в 1-часовом СН отмечалось лишь в 24-часовом СН (Р <0,05). Во всех случаях концентрация РАЛ-2 в СН нейтрофилов у женщин с ОПГ-гестозом превышала таковую в СН нейтрофилов у здоровых беременных. В 24-часовых СН эти различия имели достоверный характер (Р <0,05). Увеличение содержания РАЛ-2 в СН происходило, очевидно, в результате активного секреторного процесса, усиливающегося при позднем гестозе, а не за счет пассивного выделения РАЛ-2 во внешнюю среду в результате гибели клеток при инкубации, так как жизнеспособность нейтрофилов в течение инкубационного периода не менялась и в обеих исследуемых группах составляла 85—95%.

Для уточнения механизмов секреции нейтрофилами РАЛ-2 была изучена динамика содержания РАЛ-2 в 1-часовом СН нейтрофилов у здоровых беременных под действием веществ, являющихся традиционными активаторами фагоцитов — зимозана, неопсонизированного латекса и белков комплемента (табл. 2).

 

Таблица 2. Влияние различных стимуляторов на содержание РАЛ-2 в 1-часовом СН нейтрофилов у здоровых беременных

Стимуляторы	N	Содержание РАЛ-2, мкг/мл	Р
Среда 199 (контроль)	12	6,58±1,96
Зимозан	5	2,60±0,98	>0,05
Латекс	5	14,00±2,45	<0,05
Комплемент	5	18,33±4,77	<0,05

Примечание. Р — по сравнению с контролем; n — количество исследований.

 

Было установлено, что зимозан несколько ослаблял продукцию нейтрофилами РАЛ-2 (Р>0,05), а латекс и белки комплемента достоверно усиливали ее (Р <0,05 в обоих случаях), причем эффект был наиболее выражен при стимуляции комплементом. Таким образом, процесс секреции нейтрофилами РАЛ-2 усиливается как при неспецифической (латекс), так и при специфической (комплемент) стимуляции нейтрофилов у беременных.

Для определения роли РАЛ-2 в иммуных реакциях мы изучали действие РАЛ-2 на функциональную активность лимфоцитов при беременности на модели продукции лимфоцитами периферической крови у здоровых беременных и у женщин с поздним гестозом фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов (МИФ). Полученные результаты приведены в табл. 3.

Лимфоциты у здоровых беременных отвечали нормальной продукцией МИФ в ответ на стимуляцию митогеном ФГА, в то время как у женщин с гестозом выработка медиатора под действием ФГА отсутствовала. Сам РАЛ-2 не индуцировал продукцию МИФ женщин с неосложненной беременностью, но стимулировал его продукцию лимфоцитами у женщин с гестозом.

Действие РАЛ-2 на продукцию медиатора стимулированными лимфоцитами также зависело от функционального состояния последних. Так, у женщин с физиологической беременностью при нормальном ответе лимфоцитов на действие митогена РАЛ-2 супрессировал индуцирующее действие ФГА, а у женщин с гестозом, у которых изначально отсутствовал ответ лимфоцитов на ФГА, добавление РАЛ-2 в культуральную среду, содержащую ФГА, оказывало стимулирующее действие на выработку МИФ.

Таким образом, при позднем гестозе на фоне повышения секреции нейтрофилами РАЛ-2 имеет место сенсибилизация лимфоцитов к данному фактору, который, в свою очередь, оказывает иммуномодулирующее действие на выработку МИФ, зависящее от исходного уровня активности лимфоцитов.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что при гестозе усиливаются продукция и секреция нейтрофилами РАЛ-2. Это согласуется с литературными данными об увеличении сывороточной концентрации РАЛ-2 при этой патологии, возрастающей с тяжестью заболевания [12]. При этом, повидимому, секреция РАЛ-2 зависит от функционального состояния клеток и усиливается при стимуляции нейтрофилов, обусловленной, в первую очередь, комплементом, а возможно, и другими ферментными системами плазмы (такими, как кининогеназная система, система свертывания крови и др.), с которыми нейтрофилы тесно взаимодействуют [5], то есть является лигандзависимым процессом.

 

Таблица 3. Влияние РАЛ-2 на выработку МИФ нестимулированными и стимулированными ФГА лимфоцитами у беременных

Группы обследованных	N	ФГА, МИ, %	РАЛ-2, МИ, %	РАЛ-2 + ФГА, ми, %
Женщины
С неосложненной беременностью	20	76,88±5,21	97,87±9,00	87,73±7,23
С поздним гестозом	18	113,33±17,13	47,54±9,23	46,00±11,13

Примечание. МИ — миграционный индекс.

 

Известно, что при позднем гестозе происходит значительное нарушение микроциркуляции, проявляющееся в развитии гиперкоагуляции, синдрома ДВС [9]. Вероятно, общее нарушение гомеостаза при гестозе вызывает значительную активацию нейтрофилов, которые отвечают на стимуляцию усиленной секрецией РАЛ-2 в кровь. Сенсибилизация лимфоцитов к РАЛ-2 при гестозе на фоне его выраженного иммуномодулирующего действия на продукцию лимфоцитами одного из главных медиаторов воспаления — МИФ, по-видимому, может вызывать и/или поддерживать процессы, приводящие к патологическому повреждению различных органов и тканей, в первую очередь почечных гломерул, аутоиммунного характера.

Складывается впечатление, что нейтрофилы принимают активное участие в сложной цепи патогенетических процессов, приводящих к развитию позднего ОПГ-гестоза. Повышенная секреция нейтрофилами РАЛ-2 в результате активации ферментных систем плазмы при позднем гестозе обусловливает продукцию лимфоцитами важного медиатора воспаления, что, в свою очередь, может приводить к развитию деструктивных процессов уже в различных органах и тканях.

Выводы

1. Выделение нейтрофилами РАЛ-2 во внешнюю среду происходит в результате активного секреторного процесса, который становится более интенсивным при позднем ОПГ-гестозе.
2. Секреция нейтрофилами РАЛ-2 усиливается при стимуляции нейтрофилов как неспецифическими (латекс), так и специфическими (белки комплемента) факторами.
3. При позднем гестозе РАЛ-2 индуцирует выработку МИФ нестимулированными лимфоцитами и оказывает иммуномодулирующее действие на продукцию этого медиатора лимфоцитами у здоровых беременных и у женщин с гестозом, зависящее от исходного уровня функциональной активности лимфоцитов.

Об авторах

Н. Ю. Сотникова

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

Ю. С. Анциферова

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

Л. Г. Сотникова

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

А. В. Кудряшова

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

А. Г. Филинов

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

Д. Д. Петрунин

Ивановской государственной медицинской академии; Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова

Email: info@eco-vector.com

Кафедра акушерства и гинекологии

Россия, Иваново; Иваново

Список литературы

Дополнительные файлы