To the doctrine of fever. On the presence in the sera of febrile patients of substances that give complement deviation with extracts from normal blood

Abstract

The reason for this research was the report published in "Medical Deal" in 1925, No. 12-14, by Drs Vakulenko, Sheffer and Dashkevich from Vinnitsa, that a malaria-specific antigen can be obtained in an alcoholic extract from dried blood of a malaria.

Full Text

Поводом к настоящему исследованию послужило напечатанное во «Врачебном Деле» 1925 г., № 12—14, д-рами Вакуленко, Шеффер и Дашкевичем из Винницы сообщение, что специфический для малярии антиген можно получить в спиртовом экстракте из высушенной крови малярика. Авторам этого сообщения, повидимому, не были известны результаты наших исследований, сообщенных 2 года тому назад в г. Ростове на Дону, а затем на IX Всесоюзном С’езде бактериологов в Москве и потом напечатанных в «Казанском Медицинском Журнале» 1925 г., № 10.

К сожалению, в кратком сообщении Вакуленко, Шеффер и Дашкевича не указано, с какими формами малярии авторы имели дело; нет также указаний, проверялся-ли их антиген с сыворотками при других лихорадочных заболеваниях.

Так как получить наш специфический антиген из печени для mal. tertiana чрезвычайно трудно в силу редкости соответствующего трупного материали, а то количество его, с которым мы производили и производим свои исследования, уже почти все израсходовано, мы решили воспользоваться указаниями названных авторов для добывания малярийного антигена из крови, а также решили попробовать по тому же способу добыть из крови сифилитический антиген, — если-бы он там, разумеется, оказался.

Первые же встретившиеся нам случаи малярии были использованы для этой цели. Кровь бралась во время приступа в количестве от 10 до 15 кб. см. и высушивалась в термостате в чашках Петри, растиралась и экстрагировалась спиртом 1:5 втечении 2 суток в термостате, — точно так же, как мы это делали при изготовлении экстракта специфических антигенов из печени.

Таким образом были экстрагированы три антигена: №№ 1 и 2 — из крови больных с mal. tropica, с присутствием колец в ней, и № 3 — из крови больного с mal. tertiana, с присутствием паразитов в крови. Сделан был также экстракт из крови заведомого сифилитика со вторичными явлениями (папулезные сифилиды). Для того, чтобы не возвращаться к этому вопросу, скажем здесь же, что, при постановке соответствующей реакции с сыворотками сифилитиков, специфического для сифилиса антигена в экстракте крови не было обнаружено.

Все три антигена в разведении 1:10, в дозах от 0,1 до 1 кб. см. (в общем об’еме жидкости 2.5 кб. см.), при типической постановке реакции Wassermann’а, без комплемента не вызвали гомолиза и при прибавлении комплемента не дали задержки.

Первый опыт был поставлен с экстрактами №№ 1 и 2 для вытитровывания их с сыворотками. Взяты были дозы 0.2, 0.3, 0.4, прибавлено 0.2 кб. см. сыворотки больного с кольцами тропической малярии в крови, все же остальное сделано так же, как при классической постановке реакции Wassermann’а. Контроль — та же доза сыворотки с рабочими дозами наших специфических печеночных антигенов: 1) кольца тропической малярии, 2) гаметы тропической малярии и 3) mal. tertiana. Результаты: во всех взятых дозах гэмантигены ¹) дали полную задержку гомолиза (++++); такая же задержка получилась и с нашим специфическим антигеном из печени больного с кольцами тропической малярии в крови, тогда как антигены из печени больного с гаметами тропической малярии с mal. tertiana не дали никакой задержки.

Такой же опыт дозировки гэмантигена mal. tertianae был поставлен с сывороткой больного с этой формой малярии. Свидетелями взяты рабочие дозы печеночных антигенов; в результате со всеми дозами гэмантигенов получилась резкая задержка (++++), свидетели же, — печеночные антигены тропической малярии как с кольцами, так и с гаметами, — не дали никакой задержки, а печеночный антиген mal. tertianae дал небольшую задержку — два плюса (наш печеночный антиген mal. tertianae, как видно из предыдущей работы, в острых случаях, где нет гамет в крови, не дает резкой задержки).

Итак, в качестве рабочей дозы этих гэмантигенов можно было принять дозу в 0.3, с которой нами и ставились все последующие опыты. Из этих предварительных опытов как будто бы следовало затем, что гэмантигены так же специфичны, как и антигены из печени. Мало того, — гэмантиген mal. tertianae дал более резкую задержку, чем наш антиген из печени. Но в этих опытах не были взяты для контроля — при постановке опытов с сыворотками тропической малярии гэмантиген mal. tertianae, а в опытах с сыворотками mal. tertianae — гэмантиген тропической малярии. Между тем эго необходимо для суждения о специфичности.

Следующий опыт был поэтому поставлен нами с сыворотками тропической малярии (кольца) со всеми гэмантигенами, причем для контроля взяты наши печеночные антигены. Результат с точки зрения специфичности получился неожиданный: с нашими печеночными антигенами были получены такие результаты, каких и следовало ожидать, — именно, получилась задержка со специфическим печеночным антигеном от малярика с кольцами тропической малярии и никакой задержки — с печеночными антигенами от малярика с гаметами тропической малярии от больного с mal. tertiana. Но с гэмантигенами как тропической малярии, так и mal. tertianae получилась полная задержка (++++). Специфичность антигенов была взята т. о. под сомнение, а потому мы в дальнейшем поставили ряд новых опытов как с тропической малярией, так и с mal. tertiana, а также в период гаметоношения (безлихорадочный) — со всеми гэмантигенами, при свидетелях наших печеночных антигенах. Результаты всех этих опытов сведены нами в виде таблицы I.

ТАБЛИЦА I.

№№ опытов	Испытуемые сыворотки	ГЭМАНТИГЕНЫ			ПЕЧЕНОЧН. АНТИГЕНЫ
		Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Malaria. tertiana	Кольца mal. trop.	Гаметы mal. trop.	Mal. tertiana
1	Кольца mal. trop.	++++	++++	++++	++++	—	—
2	Кольца mal. trop.	++++	++++	++++	++++	—	—
3	Кольца mal. trop.	++++	++++	++++	++++	—	—
4	Кольца mal. trop.	++++	++++	++++	++++	—	—
5	Mal. tertiana	++++	++++	++++	—	—	++
6	Кольца mal. trop.	++++	++++	++++	++++	—	—
7	Mal. tertiana	++++	++++	++++	—	—	+
8	Malaria chron	—	—	—	—	—	++++
9	Malaria chron	—	—	—	—	—	++++
10	Malaria chron	—	—	—	—	—	++++
11	Гаметы mal. trop.	—	—	—	—	++++	—
12	Здоровый субъект.	—	—	—	—	—	—

При одном взгляде на эту таблицу ясно видно, что наши печеночные антигены строго специфичны, как было уже показано в первой нашей работе, гэмантигены же вовсе неспецифичны: сыворотка тропической малярии дает отклонение как с гэмантигеном тропической малярии, так и с гэмантигеном tertianae, и наоборот — сыворотка m. tertianae дает отклонение как со всеми гэмантигенами тропической малярии, так и с гэмантигенами tertianae.

Опыты №№ 8—11, в особенности же №№ 8, 9 и 10, говорят за то, что гэмантигены не только не специфичны для различных видов малярии, во что они и вообще не антигены малярии. В этих опытах сыворотки не дали нам ни с одним гэмантигеном никакой задержки, между тем со специфическими печеночными антигенами они дали задержку. Отличались же четыре сыворотки в этих опытах от сывороток в №№ 1—7 исключительно тем, что они были взяты у маляриков-хроников в безлихорадочный период.

Сопоставив все вышеприведенные опыты, мы заподозрили, что спиртовые экстракты, извлекавшиеся из крови маляриков в остром периоде, т. е. при высокой температуре, в опытах Вакуленко, Шеффер и Дашкевича и наших, — содержат не специфические антигены малярии, а какие-то вещества, которые дают отклонение комплемента при лихорадочных процессах вообще.

Для решения этого вопроса были предприняты следующие опыты: взяв наши гэматингены малярии, мы произвели исследования с сыворотками не только больных малярией, но и больных другими инфекционными заболеваниями с высокой температурой, при свидетеле сыворотке крови субекта с нормальной До настоящего времени нам удалось поставить такие опыты при следующих заболеваниях: брюшной тиф, сыпной тиф, возвратный тиф, послеродовая горячка (с культурой стрептококков в крови) и крупозное воспаление легких. Результаты этих опытов, поставленных разновременно, сведены нами в таблице II.

ТАБЛИЦА II.

№№ опытов	Испытуемые сыворотки	ГЭМАНТИГЕНЫ			ПЕЧЕНОЧН. АНТИГЕНЫ
		Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Гаметы mal. trop.	Mal. tertiana
1	Typhus abdomin.	++++	++++	++++	—	—	—
2	Typhus abdomin.	++++	++++	++++	—	—	—
3	Typhus abdomin.	++++	++++	++++	—	—	—
4	Typhus abdomin.	++++	++++	++++	—	—	—
5	Febris puerperalis	++++	++++	++++	—	—	—
6	Febris puerperalis	++++	++++	++++	—	—	—
7	Typhus recurrens	++++	++++	++++	—	—	—
8	Typhus exanthem.	++++	++++	++++	—	—	—
9	Pneumonia croup.	++++	++++	++++	—	—	—
10	Здоровый суб’ект.	—	—	—	—	—	—

Из таблицы II видно, что с гэмантигенами малярии получается реакция отклонения комплемента не только при любой форме малярии, — лишь-бы сыворотка была взята при высокой температуре (см. таблицу I), — но и при целом ряде других инфекционных заболеваний, сыворотки при которых со специфическими малярийными печеночными антигенами не дают никакой задержки.

Очевидно, что из крови маляриков при высокой температуре извлекается не специфический для малярии антиген, а антиген для лихорадочных процессов вообще.

Полученные результаты дали нам основание предполагать, что в сыворотках лихорадящих больных вообще, без различия этиологии лихорадки, находятся вещества, дающие реакцию отклонения комплемента со спиртовыми экстрактами, приготовленными из крови больных, страдающих любым лихорадочным заболеванием, а может быть и с экстрактами из крови здоровых людей. Чтобы проверить это предположение, мы приготовили экстракты от больных брюшным и сыпным тифом, а также экстракт от одного здорового суб’екта, экстракт из крови пуповины здоровой роженицы и экстракт из крови сифилитика с нормальной температурой. Гэмантигены для этих опытов были протитрованы точно так же, как гэмантигены малярии; рабочей дозой их принята доза 0.3. Самые опыты с реакцией отклонения комплемента были поставлены разновременно по одному и тому же типу (всегда при контроле нормальной сыворотки и с нашими специфическими печеночными антигенами) с сыворотками маляриков в остром периоде малярии (при высокой t°), маляриков- хроников в безлихорадочном периоде (при нормальной t°) и с сыворотками больных брюшным, сыпным и возвратным тифами, послеродовой горячкой и крупозным воспалением легких.

Результаты опытов сведены в таблицах III и IV, причем в первой из них изложены результаты опытов с экстрактами, добытыми из крови, взятой при высокой t°, а во второй — результаты опытов с экстрактами, добытыми из крови, взятой при нормальной t°.

Таблица III.

№№ опытов	Испытуемые сыворотки	ГЭМАНТИГЕНЫ					ПЕЧЕНОЧН. АНТИГЕНЫ
		Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Mal. tertiana	Typhus abdom.	Typhus exanth.	Кольца mal. trop.	Гаметы mal. trop.	Mal. tertiana
1	Кольца mal. tropicae	++++	++++	++++	++++	++++	++++	—	—
2	Febris puerperalis	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
3	Typhus abdominalis	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
4	Malaria chronica	—	—	—	—	—	—	—	++++
5	Malaria chronica	—	—	—	—	—	—	—	++++
6	Гаметы mal. tropicae	—	—	—	—	—	—	++++	—
7	Febris puerperalis	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
8	Typhus exanthematicus	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
9	Typhus recurrens	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
10	Typhus abdominalis	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
11	Pneumonia crouposa	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
12	Здоровый суб’ект	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—

Таблица IV.

№№ опытов	Испытуемые сыворотки	ГЭМАНТИГЕНЫ								ПЕЧЕНОЧН. АНТИГЕНЫ
		Кольца mal. trop.	Кольца mal. trop.	Mal. tertiana	Typhus abdom.	Typhus exanth.	Lues	Здоровый суб’ект	Пуповина	Кольца mal. trop.	Гаметы mal. trop.
1	Pneumonia crouposa	++++	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—	—
2	Typhus abdominalis	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++	—	—	—
3	Typhus abdominalis	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++	—	—
4	Typhus abdominalis	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++	—	—
5	Здоровый суб’ект	—	—	—	—	—	—	—	—	—	—

Из этих таблиц видно, что экстракты из крови больных с инфекционными заболеваниями, включая сюда и малярию, не содержат никаких специфических антигенов. Но, с другой стороны, сыворотки при всевозможных лихорадочных процессах, независимо от их этиологии, дают резкое отклонение комплемента со спиртовыми экстрактами человеческой крови как нормальных людей, так и больных инфекционными заболеваниями. Очевидно, во всех наших опытах постоянной величиной являлся экстракт из крови любого суб’екта, до здоровых включительно, а переменной — сыворотка больного.

Итак в кровяной сыворотке при лихорадочных процессах (независимо от их этиологии) накопляются какие-то вещества, реагирующие со спиртовым экстрактом из крови, причем получается реакция отклонения комплемента. Эта реакция, хотя и не обещает здесь практического применения, в виду ее неспецифичности, но представляет большой теоретический интерес для учения о биохимических изменениях при лихорадочных процессах вообще.

Давно уже было известно, что количество комплемента резко надает при анафилактическом шоке. Начиная с работ Pirquet, Frіodberger'а и др., возможно было предположить, что лихорадочный процесс в основных  своих проявлениях есть не что иное, как растянутая реакция анафилаксии. Одним из главных агентов этой последней и служат, повидимому, поступление в организм и образование в нем самом веществ, создающих условия для связывания комплемента с какими-то еще неведомыми комплексами.

Оценивая результаты наших опытов с этой точки зрения, можно предположить, что при лихорадочных процессах образуются в организме вещества, дающие с нормальной кровью тот комплекс, который обусловливает поглощение комплемента и в результате дает нечто (анафило- токсин?), создающее главную картину всякого лихорадочного процесса. Для более детального решения этой сложной задачи надо провести ряд таких опытов, которые-бы ответили на вопросы: 1) с какими нормальными веществами крови реагируют тела, образующиеся при лихорадке, и 2) какова природа этих тел.

Относительно специфических веществ, образующихся при лихорадке, трудно высказать какое-бы то ни было априорное предположение; относительно же неспецифических гэмантигенов есть уже некоторые указания в существующей литературе. Так, в ряде работ, посвященных реакции Wassermann'а, имеются указания, что не надобно брать для исследования крови для этой реакции у лихорадящих суб’ектов (это указание вошло уже в учебники), ибо иногда при этом получается положительная реакция у несифилитиков.

Затем существует обширная литература по спорному вопросу, дают-ли малярики реакцию отклонения комплемента с сифилитическим антигеном, причем по одним, авторам (к числу которых мы можем причислить и себя, см. цитированную выше нашу работу) сыворотка маляриков не дает реакции отклонения комплемента с их сифилитическими антигенами, другие авторы получали при этом, в большем или меньшем проценте случаев, положительный результат. Так, в посвященной этому вопросу работе д-ра Азбелева, из Тропического Института в Старой Бухаре (Clbl. für Bakteriologie, Bd. 96, Н. 2) имеются указания, что положительный результат реакции при mal. tertiana получился у автора в 75%, а при тропической малярии — в 68%. При этом здесь мы встретили чрезвычайно интересное указание, что при хронической малярии без паразитов и там, где малярия была раньше, реакция получается отрицательная. Вообще в постановке Азбелева реакция на малярию, и притом на какую угодно ее форму, получается так, как если-бы ее ставили с вытяжками из крови.

Антигеном у д-ра Азбелева в большинстве случаев служил алкогольный экстракт из сердца быка с прибавлением холестеарина. Все отрицательные результаты в наших опытах, описанных в цитированной выше работе, были получены также или с неспецифическим антигеном из сердца быка, или с нашим специфическим антигеном из сифилитической печени. Не в содержании-ли холестеарина, в определенной дозе, в антигене и лежит причина получения положительных реакции д-ром Азбелевым в лихорадочном периоде малярии? К сожалению, он не поставил ни одного контрольного опыта отклонения комплемента с его антигеном при других лихорадочных процессах.

А холестеарин должен содержаться в алкогольном экстракте из цельной крови. Для выяснения всех этих деталей придется впрочем предпринять специальную работу с большим рядом опытов, в настоящем же сообщении мы желаем только указать на те особенности сывороток лихорадочных больных, которые нам удалось подметить в приведенных выше опытах.

Наши наблюдения позволяют сделать следующие выводы:

1. Из крови при инфекционных процессах, — как лихорадочных, включай туда и малярию, так и безлихорадочных (сифилис), — путем извлечения алкоголем не получается никакого специфического антигена для реакции отклонения комплемента с соответствующими сыворотками.
2. В сыворотках больных лихорадочными процессами, независимо от их этиологии, появляются вещества, дающие реакцию отклонения комплемента с алкогольным экстрактом из крови, как взятой у нормальных людей, так и взятой при каких бы то ни было заболеваниях.

Prof. I. G. Ssawtschenko und D-r I. M. Baronoff (Krasnodar). Zur Lehre über das Fieber. (Ueber die Anwesenheit in den Seren der fiebernder Kranken von Substanzen, welche die Ablenkung des Komplements mit Normalblutextrakten geben).

Auf Grund ihrer Beobachtungen kamen die Autoren zu folgenden Schlussfolgerungen: 1) Aus dem Blute bei Infektionsprocessen, sowohl fieberhaften mit Einschluss der Malaria, als auch fieberlosen (Syphilis), lasst sich mittels der Alkoholextrahierung kein spezifisches Antigen für die Komplementablenkungsreaktion mit entsprechenden Seren erhalten. 2) In den Seren von Kranken mit fieberhaften Processen einerlei welcher Aethiologie erscheinen Stoffe, welche die Komplementablenkungsreaktion mit Alkoholextrakten aus Blut sowohl normaler Menschen, als auch solcher mit verschiedenen Krankheiten geben.

[1] Примечание. В дальнейшем все вытяжки из крови мы для краткости будем называть "гэмантигенами".