A case of isolation of Spirochaetae icterogenes in infectious jaundice

Abstract

One of the causative agents of infectious jaundice, as is known, is sp. icterogenes, or leptospira, discovered by Japanese scientists Inada and Ido in 1915. The spirochete in this disease is detected in the first days, before the appearance of jaundice, in the blood of patients, later and for quite a long time (up to several weeks or more) - in the urine.

To detect spirochetes, using, depending on the period of the disease, blood or urine, they resort either directly to bacterioscopy in a dark field of vision and sowing on appropriate nutrient media (sterile tap water, Ungerman, Uhlenhut, etc.), or to infecting guinea pigs.

Full Text

Одним из возбудителей инфекционной желтухи, как известно, является sp. icterogenes, или лептоспира, открытая японскими учеными Inada и Ido в 1915 г. Спирохета при этом заболевании обнаруживается в первые дни, до появления желтухи, в крови больных, позднее и довольно длительное время (до нескольких недель и более)— в моче.

Для обнаружения спирохет, используя, в зависимости от периода заболевания, кровь или мочу, прибегают или непосредственно к бактериоскопии в темном поле зрения и посевам на соответствующие питательные среды (стерильная водопроводная вода, среда Унгермана, Уленгута, и др.), или же к заражению морских свинок. Последние являются наиболее чувствительными, после человека, животными к sp.icterogenes, у них в ряде случаев, судя по литературным данным, наступает типичная картина инфекционной желтухи, сопровождающаяся повышением температуры и желтухой. Такие типично заболевшие свинки на 6-12-й день могут погибнуть при явлениях геморагической септицемии. При вскрытии в органах таких свинок (печень, почки, надпочечники) обнаруживается обычно громадное количеству спирохет.

Используя методы посевов материала от человека или от зараженных морских свинок, можно получить чистую культуру sp. icterogenes.

Следует, однако, заметить указания некоторых авторов (Эпштейн, и др.), что заражения морских свинок мочей больных инфекционной желтухой часто дают отрицательный результат. Это объясняется понижением вирулентности спирохет в моче под влиянием кислой ее реакции (Inada, 1916: цит. по Эпштейну). Этот момент обращает на себя внимание тем более, что наш случай выделения sp. icterogenes связан с инфекцией морской свинки, зараженной мочей больного.

Случай заболевания инфекционной желтухой, при котором мы имели возможность выделить sp. icterogenes из мочи, относится к больному А.

Бактериологический диfгноз инфекционной желтухи, вызванной sp. icterogenes, у данного больного был установлен эпидемиологическим отделением Казанского и-нта эпидемиологии и микробиологии при непосредственном участии проф. Р. Р. Гельтцер. На 12-й день болезни А. был произведен посев его крови на стерилизованную водопроводную воду. Через две недели д-ром И. А. Кондаковым была получена гемокультура sp. icterogenes в смеси с подвижной палочкой. Этой гемокультурой (по 2 см³) нами были заражены 2 морских свинки подкожно и интраперитонеально. При дальнейшем наблюдении эти свинки лихорадили. Бактериоскопическое исследование, в различное время, периферической крови этих свинок не дало положительного результата.

Моча, послужившая нам исходным материалом при выделении sp. icterogenes, была получена 7/XII 38 на 27-й день болезни А. При микроскопировании в темном поле нецентрифугированной мочи были обнаружены спирохеты до 10 в поле зрения, хорошо подвижные, морфологически сходные со спирохетой icterogenes. 3 см³ этой мочи, добытой не стерильно, было введено морской свинки под кожу живота. Нами велись наблюдения за температурой зараженной свинки, ежедневно исследовалась периферическая кровь из ушной вены на присутствие спирохет и попутно обращалось внимание на окраску склер, цвет слизистых оболочек носа, губ и anus’a.

В течение первых 7 дней температура у свинки держалась в пределах 38—38,5°; на 8-й день поднялась до 39,4°, на 9-й—до 40,1°. В крови за весь этот период времени спирохеты не были обнаружены. Желтушность отсутствовала; заметными были лишь похудание и слабость свинки. Полагая, что повышение температуры является специфическим, мы решили произвести посевы крови и органов этой свинки. Кровь, взятая из сердца, была нами засеяна в стерильную водопроводную воду (по 2 см³ крови на 8 см³ воды) в несколько пробирок. Одновременно кровью были заражены две морские свинки: одна—под кожу живота, другая—интраперитонеально (по 2 см³). Кроме того, были произведены посевы печени, почки и мочи на среду Uhlenhuth’a (водопроводная вода + 10% сыворотки кролика инактивированной 30 м. при 60°) Органы засевались кусочками величиной в 0,5 см³; по 3 кусочка в каждую пробирку с указанной выше средой; моча—по 0,5 см³ в пробирку на см³ среды. Из оставшегося количества печени и почки были приготовлены эмульсии с физиологическим раствором NaCl каждого органа в отдельности и ими заражены еще две свинки интраперитонеально.

При осмотре внутренних органов убитой свинки желтушной окраски не замечено. Отчетливо выступала лишь резкая гиперемия внутренних органов. При микроскопировании крови и мочи спирохеты не были обнаружены.

Посевы, залитые жидким парафином, сохранялись в термостате при 25°. Первый просмотр посевов на 6-й день не дал ясных результатов и лишь при второй проверке на 12-й день были обнаружены спирохеты: в посевах крови в количестве 10—15 в поле зрения, единичные не в каждом поле зрения — в пробирках с печенью и 1—5 спирохет на несколько полей зрения—в посевах с почкой. Посевы мочи оказались к этому времени стерильными.

Таким образом, мы получили 3 штамма спирохет: кровяной, печеночный и почечный в чистой культуре. Спирохеты всех трех штаммов морфологически (темное поле, объектив Leitz'a 6, окуляр 4) были сходны и настолько подвижны, что казались палочками с энергичным поступательным движением. Лишь в момент пауз можно было видеть типичные для этой спирохеты крючкообразные концы с характерными пуговчатыми утолщениями на них, правда, незначительными, но хорошо заметными у некоторых спирохет. На 35-й день спирохеты были обнаружены в посевах мочи в количестве 10 и более в поле зрения, хорошо подвижные и морфологически сходные со спирохетами первых трех штаммов.

Дальнейшие пересевы давали лучшее развитие двух штаммов: кровяного и почечного. Культуры развивались на 6—10—12-й день. Количество спирохет доходило до 50—110 и более в поле зрения.

У свинок, зараженных кровью, печенью и почкой убитой свинки отмечена лихорадка с наибольшим подъемом температуры (39,7—39,9°) на 6, 7, 9-е сутки.

Для установления этиологической связи нами была поставлена реакция агглютинации выделенной спирохеты с сывороткой больного А.

Тигр агглютинации, как известно, может доходить до высоких цифр (20, 30, 50 и 100 тысяч). На 6-й день болезни у больного А. была взята кровь (из пальца), и с сывороткой этой крови поставлена реакция агглютинации с почечным штаммом второй генерации (около 50 спирохет в поле зрения). Реакция аглютинации ставилась в агглютинационных пробирках в объеме 1 см³. К разведенной физиологич. раствором NaCl сыворотке прибавлялось равное количество (0,5 см³) культуры на среде Uhlenhuth'a. Реакция была поставлена с сывороткой в следующих разведениях: 1 : 100, 1 : 200, 1 : 500, 1 : 1000, 1 : 2000, 1 : 10000, 1 : 20000. Контроли при этом ставились следующие: 1) физиологический раствор NaCl, 2) 2 сыворотки от здоровых людей в разведениях 1 : 100 и 1 : 10 0. Пробирки встряхивались и помещались в термостат при 35° на 2 часа, после чего производилась микроскопия. В результате этого опыта мы получили следующее: спирохет подвижных было мало; большая часть их. очевидно, подверглась лизису. В контрольных пробирках оставалось большое количество неизмененных, хорошо подвижных спирохет.

Желая выяснить агглютинационный титр сыворотки больного А., мы повторили реакцию агглютинации с более высокими разведениями сыворотки, начиная с 1 : 4000, при этом выяснилось, что агглютинация спирохет была ясно выражена при разведении сыворотки до 1 : 100900.

Таким образом, положительными реакциями лизиса и агглютинации в нашем случае была установлена связь между выделенной sp. icterogenes и заболеванием инфекционной желтухой больного А.

Выводы

1. В моче больного инфекционной желтухой, взятой на 27-й день болезни, были обнаружены в большом количестве спирохеты.
2. Заражение морской свинки мочей больного инфекционной желтухой дало у морской свинки повышение температуры; при исследованиях крови, печени, почки и мочи этой морской свинки бы ш выделены чистые культуры.
3. Выделенные в чистой культуре спирохеты лизировались и агглютинировались сывороткой больного, причем агглютинационный титр сыворотки соответствовал разведению 1 : 100.000.