Diagnosis of early pregnancy by immunological method

Abstract

In our previous report, we describe in detail the immunological methods for the determination of chorionic gonadotropin in the urine of pregnant women.

Full Text

В нашем предыдущем сообщении детально описаны иммунологические методы определения хорионического гонадотропина в моче беременных.

В настоящей работе мы ставили следующие задачи:

1. Проверить точность реакции торможения гемагглютинации для диагностики ранних сроков беременности и дифференциальной диагностики патологической бере­менности и подозрений на беременность.
2. С помощью количественного иммунологического теста исследовать динамику экскреции гонадотропина с мочой при нормальной беременности.

Иммунологический тест ставился в разные сроки нормальной беременности, при подозрении на маточную и внематочную беременность.

Мы исследовали утренние порции мочи 508 женщин (356 беременных, 89 с подо­зрением на маточную и 63 — на внематочную беременность). Контрольная группа состояла из 38 мужчин и 12 небеременных женщин. У всех 50 был получен отрица­тельный иммунологический тест.

а) Нормально развивающаяся беременность. Из 356 женщин с нормально раз­вивающейся беременностью сроком от 5 до 40 недель положительный результат полу­чен у 355, отрицательный — у одной со сроком беременности 29 недель.

б) Подозрение на беременность. У женщин с подозрением на беременность была задержка менструации от 3 до 15 дней.

Положительный результат иммунологической реакции получен у 32 женщин, отрицательный у 56 и сомнительный — у одной.

При дальнейшем исследовании беременными оказались 32 женщины. Срок после первого дня последней нормальной менструации у них составлял 36 и больше дней. Моча одной женщины с задержкой менструации в 3 дня дала отрицательный резуль­тат. Повторный анализ через неделю был уже положительным. У одной женщины с задержкой менструации в 14 дней мы получили сомнительный результат. Повторное наблюдение не обнаружило у нее беременности.

Остальные 56 женщин, с мочой которых иммунологическая реакция дала отрица­тельный результат, оказались небеременными.

в) Подозрение на внематочную беременность. Было исследовано 102 порции мочи от 63 женщин, поступивших в гинекологическое отделение с подозрением на внема­точную беременность.

У 30 из них одновременно с иммунологическим тестом ставилась реакция Галли — Майнини. У 6 женщин из этой группы получен положительный результат иммуноло­гического теста, у 24 — отрицательный. Биологические пробы были положительными у 5, отрицательными — у 25.

Положительные результаты иммунологической пробы были у 2 женщин с внема­точной беременностью, подтвержденной гистологически, у одной при сочетании ма­точной беременности с кистой желтого тела и апоплексией яичника, у одной с маточ­ной беременностью, у 2 с неполным абортом (у одной биологическая проба была отрицательна). У одной женщины с давно прервавшейся внематочной беременностью были получены отрицательные результаты обеих проб. У остальных 23 женщин кли­нически внематочная беременность не подтвердилась (у большинства из них было обострение хронических аднекситов, дисфункциональные маточные кровотечения).

При исследовании 66 порций мочи (от 33 женщин) ставилась только иммуноло­гическая реакция. Положительные результаты были получены в 14 порциях (от 10 женщин), отрицательные — в 52. Особую ценность приобретает иммунологический метод в динамике наблюдения при подозрении на внематочную беременность. Поло­жительным был иммунологический тест у 4 женщин с внематочной беременностью, у 3 с маточной и у 3 при неполном аборте.

У 23 женщин имелись или дисфункциональные маточные кровотечения, или обострения хронических воспалительных процессов придатков матки и околоматочных пространств.

Таким образом, из 388 женщин со сроком беременности от 4 до 40 недель мы получили положительный результат у 387. По нашим наблюдениям, начиная с 37-го дня после первого дня последней менструации положительные результаты получены в 99,5%. При отсутствии беременности точность иммунологического метода составляет 99,1%, что согласуется с литературными данными.

Таким образом, разобранный выше иммунологический тест можно применять для диагностики ранних сроков беременности и для дифференциальной диагностики бере­менности с некоторыми формами патологии (миома и беременность, внематочная беременность, пузырный занос, хорионэпителиома и др.).

Наряду с качественной реакцией в настоящее время подробно разработан и метод количественного определения гонадотропина в моче. Этот метод применяется для изучения экскреции гонадотропина в течение беременности, для оценки прогноза беременности при угрожающем или начавшемся аборте и во многих других случаях. Б его основу положена реакция торможения гемагглютинации. Тормозящая актив­ность мочи беременных сравнивалась с тормозящей активностью стандартного препа­рата гормона с известным количеством хорионического гонадотропина.

Для постановки реакции кроме мочи, иммунной сыворотки и 2,5% суспензии эритроцитов необходим еще стандарт препарата гормона.

Мы использовали в качестве стандарта ХГ-В, содержащий в ампуле 1500 ME, или ГБ-Г, содержащий в ампуле 500 ME. Реакцию ставят в 4 рядах, каждый из которых состоит из 10 пробирок. В первых двух рядах делают двукратные разведения про­фильтрованной мочи в солевом фосфатном буфере с pH 7,2, содержащем 0,5% нор­мальной кроличьей сыворотки по 0,4 мл в каждой пробирке. Первый ряд служит опытным, а второй — контрольным. В последующих двух рядах делают аналогичные двукратные разведения стандарта гормона из расчета 40 000 МЕ/л и 5 000 МЕ/л.

Затем в опытный ряд с разведенной мочой и в оба ряда разведений стандарта приливают по капле разведенной иммунной сыворотки. Иммунная сыворотка разво­дится в соотношении 10: 1 (так, если титр 1 : 1000, то разведение сыворотки — 1 : 100). В каждую пробирку контрольного ряда добавляют по 1 капле разводящей жидкости.

Во все пробирки приливают по капле эритроцитов, адсорбировавших антиген. Про­бирки встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 1,5 часа. Через 1,5 часа на дне пробирки образуется характерный осадок в виде кольца. Там, где кон­центрация хорионического гонадотропина достаточно высокая, чтобы тормозить гемаг­глютинацию, на дне пробирки образуется четкое кольцо с ровными краями. Во вто­ром (контрольном) ряду должны быть четкие кольца. С разведением мочи концен­трация гонадотропина постепенно падает настолько, что уже не может тормозить реакцию гемагглютинации. Реакцию торможения в ряду с разведением мочи сравни­вают с реакцией торможения в рядах с разведением стандарта. За конечную точку (титр) принимается то разведение мочи или стандарта, которое еще дает торможе­ние гемагглютинации.

Мы провели количественное определение экскреции хорионического гонадотро­пина у 288 женщин с нормальной беременностью сроком от 4—5 до 40 недель.

Наблюдение за экскрецией гормона в разные сроки беременности показывает, что постепенно с 4-й недели происходит нарастание количества гормона, достигая мак­симума к 9-й неделе (в среднем до 160 000 МЕ/л), затем идет на убыль и примерно с 14-й недели устанавливается на постоянном уровне (20—50 тыс. МЕ/л) вплоть до родов.

Наименьшее количество гонадотропина, которое можно определить с помощью нашего метода, — 600 МЕ/л. Обычно такой величины экскреция достигает на 7-й день задержки месячных.

Аналогичные данные получил Wide (1962). У него пик выделения находится меж­ду 60-м и 80-м днями после первого дня последней менструации с колебаниями от 80000 до 320 000 МЕ/л (в среднем 100 000 МЕ/л).

Затем наступает упадок экскреции гонадотропина в среднем до 20000 МЕ/л и остается довольно постоянным на этом уровне вплоть до родов. Lohmejer, Brosswitz (1964) при количественном определении гонадотропина нашли наибольшее выделение на 3-м месяце, где оно не превышало 50 000 МЕ/л в сутки.

По данным McCarthy (1964), в моче пик выделения приходится на 9—10-ю неделю с колебаниями от 44 000 ME до 195 000 ME в сутки.

ВЫВОДЫ

1. Иммунологический метод диагностики беременности — реакция торможения темагглютинации — отличается высокой степенью чувствительности и специфичности. Метод применим для дифференциальной диагностики при подозрении на беременность.

Самые ранние сроки беременности, определяемые реакцией пассивной гемагглюти­нации, — 37 дней после первого дня последней менструации.

2. Экскреция гонадотропина достигает максимума к 9-й неделе беременности, а с 14—15-й недели держится на постоянном уровне (20—50 тыс. МЕ/л) вплоть до родов.