О методике выращивания анаэробов на поверхности плотных сред

Аннотация

В этиологии раневых инфекций анаэробы играют видную роль. Отсюда понятны стремления бактериологов найти такой метод выращивания: анаэробов, который по простоте не уступал бы аэробному, т.е. не требовал бы на специальных аппаратов, ни значительного количества времени для своего осуществления. До настоящего времени в арсенале бактериологических методов такого способа нет.

Полный текст

В этиологии раневых инфекций анаэробы играют видную роль. Отсюда понятны стремления бактериологов найти такой метод выращивания: анаэробов, который по простоте не уступал бы аэробному, т.е. не требовал бы на специальных аппаратов, ни значительного количества времени для своего осуществления. До настоящего времени в арсенале бактериологических методов такого способа нет. Даже самый простой по замыслу биологический метод Фортнера достаточно кропотлив и не всегда доступен. Большая заслуга проф. В. М. Аристовского и И. С. Минкевича в том, что они, с одной стороны, внесли ряд весьма ценных усовершенствований, упрощающих методику Фортнера, и, с другой стороны, выявили при помощи обстоятельных опытов новые факторы, имеющие первостепенное значение для осуществления самого анаэробиоза. И все же авторы признают (несмотря на усовершенствования), что до посева „приходится проделывать довольно многочисленные и кропотливые манипуляции“ (Сов. врач, газ., № 15, 1935 г.). Вследствие этого мы и решили предложить наш способ, который на практике оказался чрезвычайно простым и удобным.

Основной принцип:

Возьмем пробирку с печеночным агаром (состав этого агара см. ниже) и посеем на этот агар анаэроб. Вынем ватную пробку и опрокинем пробирку вверх дном. Введем в пробирку резиновую трубочку (диаметра трубочки, употребляемой для дуоденальних зондов) К-К. (рис. № 1) ив таком виде опустим пробирку с трубочкой в стакан с дестил. водой (рис. № 2). Наружный конец резиновой трубочки Кі наденем на шприц (или просто возьмем в рот) и будем медленно отсасывать воздух. По мере удаления воздуха, пространство, им занимаемое, будет замещаться водой. Когда столб воды Достигнет в пробирке уровня N (рис. № 2), резиновая трубочка в пункте „П“ зажимается пальцами и медленно извлекается из стакана и пробирки. Пробирка для этой цели слегка наклоняется, но не вынимается из воды (иначе войдет воздух). В результате этой операции, следовательно, большая часть пробирки

Рис. 1-2

оказывается занятой водой и только небольшая часть остается еще заполненной воздухом (Рис. № 3). Для удаления его поступаем так: стеклянную трубку, изогнутую в виде опрокинутой буквы, опустим в стакан с дестил. водой (Рис. № 4—трубка S—S₁). Пробирку с посеянным анаэробом опрокинем вверх дном и наденем ее на левую браншу стеклянной трубочки (пробирка Аn—рис. № 4). Далее возьмем пустую нестерильную пробирку и вдвинем в

Рис. 3-4

нее кусок картошки с таким расчетом, чтобы картошка не вывалилась при опрокидывании пробирки вверх дном. В опрокинутую таким образом пробирку с картошкой вводят резиновую трубочку (как на рис. №1) и в таком виде пробирку с картошкой наденем на правое колено стеклянной трубочки S—S₁ (рис. № 4—пробирка „Карт“). Наружный конец резиновой трубочки К, наденем на шприц (или просто возьмем в рот> и будем медленно отсасывать воздух. Так как благодаря стеклянной трубочке S—S_s мы имеем по существу дело с сообщающимися сосудами, то по мере отсасывания, воздуха, последний одновременно в обеих пробирках будет замещаться водой. Когда столб воды достигнет в обеих пробирках уровня N, резиновая трубочка, медленно извлекается (с предосторожностями, о которых было сказано выше). В результате получается система, изображенная на рис. № 5—слева анаэроб (пробирка Аn), справа пробирка с картошкой (пробирка „Карт“).

В картошке происходит сложный окислительно - восстановительный процесс и, на ряду с этим, на нестерильной картошке происходит размножение разных случайных микробов. На тот и другой процессы вначале- расходуется весь кислород из незанятого водой пространства в пробирке „Карт“ (рис. № 5), а затем через стеклянную трубочку S₁—S и кислород из пробирки „А_n» (рис № 5). В результате получается обильный рост анаэробов.

Как видно из описания, для проведения этого метода не требуется ни специальных приборов, ни специальных веществ, и на весь посев уходит немногим больше 1—2 минут.

Рис. 5

Приготовление печеночного агара:

1) Печень подвергается самоперевариванию (300 гр. сырой печени, пропущенной через мясорубку+1500 к.с. воды4-1Со/₀Н₂80 до реакции pH—4,3). Переваривание производится при t°—37° в больших плотно закрытых бутылях, куда предварительно добавляется по 15—20 к.см. хлороформа. Когда переваривание заканчивается, насыщенно желтого цвета жидкость сливается и посла подщелачивания она играет роль мясной воды для изготовления мясо - пептонного агара (пептон—1%, агар 2%, pH — 7,0). К агару добавляется глицерин 3% и разливается по пробиркам (по 5 к.см.). Стерилизация при 120°—20 мин.

2) Отдельно смешивают в градуированном цилиндре белок 2-х яиц с тремя объемами дестиллиров. воды и добавляют по 0,5—10% едкого натра на каждые 100 к.см. смеси. Разливают по пробиркам и стерилизуют при 115°— 15 минут.

3) В каждую пробирку с расплавленным и остуженным до 55° агаром добавляется по I к. см. яичного раствора. Пробирки выдерживаются в термостате, пока не высохнет конденсационная вода (которая мешает пробки при опрокидывании пробирок), затем пробки заливаются смолкой и в таком виде сохраняются.

На этой среде дают пышный рост (при пользовании описанной методикой), В. oedematiens, В, histolyticus, В. chauvoei, В. perfringens, В. botulinus и др.