Dynamics of pertussis antibodies in the saliva of children revaccinated with DPT vaccine

Full Text

Массовые прививки против коклюша значительно изменили клинику заболевания. Легкость течения и наличие стертых форм затрудняют своевременную постановку диагноза. Бактериологическая диагностика, являющаяся основным методом лабораторной диагностики коклюша, не получила широкого применения в связи с плохой высеваемостью возбудителя, большой длительностью и трудоемкостью исследования [2]. Серологический метод (реакция агглютинации) диагностики коклюша с выявлением противококлюшных антител в сыворотке крови [1] и слюне [3] обследуемых с помощью коммерческого коклюшного диагностикума, содержащего 20 млрд, бактерий в 1 мл, довольно сложен, трудоемок и малочувствителен; при исследовании слюны оценка результатов данной реакции весьма затруднительна. Методы экспресс-диагностики коклюша недостаточно совершенны.

Одним из перспективных методов, который можно использовать в экспресс-диагностике коклюша, представляется разработанный нами на основе реакции латекс-агглютинации (РЛА) реакция пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютинации (РПОЛМА). Целью настоящей работы было изучение возможности определения противококлюшных антител в слюне детей ревакцинированных АКДС-вакциной, по РПОЛМА. В качестве антигена для РПОЛМА применяли полистироловый монодисперсный латекс с диаметром частиц 0,55 мкм, приготовленный во ВНИИ синтетических каучуков (г. Ленинград) и сенсибилизированный дезинтегратором коклюшных бактерий, содержащим 775 мкг/мл белка (по Лоури) в соотношении 1 : 2.

Для выявления противококлюшных антител было проанализировано 695 проб образцов слюны организованных детей от 2,5 до 3,5 лет. ревакцинированных АКДС-вакциной (основная группа), и непривитых детей (контрольная группа). Взятие слюны производили перед ревакцинацией, а затем через 7, 14, 21, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 дней после нее. Слюну собирали утром и днем натощак и замораживали в пробирках. В день постановки опыта слюну размораживали, отсасывали 0,2 мл и разводили в 10 раз глициновым буфером, pH 8,2. Затем слюну центрифугировали при 3000 об./мин в течение 5 мин и готовили двукратные разведения в объеме 0,5 мл. Оставшуюся часть слюны в разведении 1 : 10 использовали для контроля.

Для постановки развернутой РПОЛМА на стеклянную пластину наносили разведения слюны в количестве 0,05 мл, к каждому разведению исследуемого субстрата добавляли по 0,02 мл коклюшного латексного диагностикума. Стекло покачивали для равномерного перемешивания ингредиентов в течение 3 мин и визуально регистрировали результат. Однако результаты данной реакции можно отчетливо оценивать только на 4+ и 3+, учитывать показания реакции на 2+ и 1+ очень трудно. Для более четкой регистрации результатов реакции мазки высушивали, фиксировали над пламенем спиртовки и просматривали под сухой системой микроскопа. Реакцию оценивали полуколичественно: 4+ —четкая агглютинация частиц латекса с образованием больших скоплений; 3+ —большие и малые скопления частиц латекса; 2+ — малые, но отчетливые скопления частиц латекса, видны несагглютинированные частицы; 1+ — слабая гранулярная агглютинация; 0 — отсутствие агглютинации, характеризующееся равномерным распределением частиц латекса по всему фону. Положительными считали реакции не менее чем на 2+. Одновременно с РПОЛМА ставили пробирочную реакцию агглютинации.

Результаты исследований показали (см. рис.), что у детей, ревакцинированных АКДС-вакциной, перед прививкой средний титр противококлюшных антител по реакции агглютинации составлял 6,0 ± 2,1; максимальный средний титр (27,0 ± 9,4) наблюдался на 21-й день после ревакцинации, второй пик (18,5 ± 6,1) через 60 дней; на более поздних сроках титры снижались и достигали исходного уровня. В контрольной группе титры антител по реакции агглютинации незначительно колебались, средний максимальный титр не превышал 9,7 ± 2,7. Однако достоверная разница между средними титрами антител по реакции агглютинации в основной и контрольной группах прослеживалась только в сроки, соответствовавшие наибольшему подъему противококлюшных антител, то есть на 14 и 21-й дни после ревакцинации. По РПОЛМА в контрольной группе уровень антител был несколько выше, чем по реакции агглютинации, однако максимальные средние титры не превышали 14,7 ± 2,3. Средний титр противококлюшных антител в основной группе по РПОЛМА перед ревакцинацией составлял 10,9 ± 1,6; максимальный средний титр (31,0 ± 4,5) также наблюдался на 21-й день после ревакцинации, затем титры снижались с небольшими подъемами, которые оказались недостоверными и не превышали максимального среднего уровня антител у непривитых. При сравнении средних титров антител по РПОЛМА в основной и контрольной группах выявлена существенная разница показателей в течение первого месяца после ревакцинации; на более поздних сроках разница была незначительной. Результаты этих исследований позволили предположить, что обнаружение в сроки более одного месяца после ревакцинации противококлюшных антител в титрах, существенно превышающих фоновый уровень, может свидетельствовать о заражении коклюшем.

 

 

Рис. 1. Динамика содержания противококлюшных антител: тигры по РПОЛМА (1) и реакции агглютинации (2) у привитых детей; то же (3 и 4) у непривитых.

 

При одновременном анализе 695 проб слюны детей основной и контрольной групп с помощью РПОЛМА и реакции агглютинации было установлено, что в основной группе РПОЛМА была положительной в 66,7% случаев, реакция агглютинации — в 29,7%; в контрольной группе — соответственно в 51,4% и 28,3% (см. табл.).

Таким образом, первый вид реакции превышает по чувствительности второй в 2,2—1,8 раза, то есть является диагностически более ценным. При сопоставлении процента положительных результатов по РПОЛМА в основной и контрольной группах с использованием критерия Стъюдента t была получена достоверная разница (Р < 0,01), тогда как аналогичное сравнение по реакции агглютинации выявило отсутствие таковой (Р>0,05).

ВЫВОДЫ

1. РПОЛМА является более чувствительной, чем реакция агглютинации. Она менее трудоемка и сложна в оценке результатов, быстра по времени исполнения.
2. РПОЛМА позволяет определять наличие противококлюшных антител в слюне у привитых, что исключает взятие крови у детей.
3. Наибольшее количество противококлюшных антител у привитых выявляется в слюне в течение 1-го месяца после ревакцинации, далее их уровень снижается до общего фона непривитых. Если же в последующем содержание антител достоверно превысит фоновый уровень, то это может свидетельствовать о заражении коклюшем.

About the authors

N. F. Amfiteatrova

Kurashov Medical Institute of the Order of the Red Banner of Labor

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

A. O. Kiselev

Kurashov Medical Institute of the Order of the Red Banner of Labor

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Kazan

References

Supplementary files