Характеристика антиадгезивных свойств слюны новорожденных детей и грудного молока их матерей

Аннотация

В последние годы возрос интерес к изучению влияния секретов человека (слюна, грудное молоко) на процесс адгезии микроорганизмов к поверхности эпителиоцитов. Установлено, что женское молоко подавляет адгезию S. pneumoniae и H. influenzae к поверхности фарингеального эпителия, в результате эти микроорганизмы лишаются возможности вызывать инфекционный процесс [6]. Известно также, что слюна здоровых детей подавляет прикрепление Ps. aeruginosa и C. albicans к буккальным эпителиоцитам [4].

Полный текст

Механизм влияния слюны и грудного молока на процесс адгезии микробных клеток полностью не выяснен. Несомненно, что важную роль при этом в секретах играют такие факторы, как антитела, прежде всего класса IgA, препятствующие адгезии бактерий к эпителиоцитам. Не менее важны лизоцим, трансферрин, лактоферрин, компоненты комплемента, клеточные элементы (нейтрофилы, макрофаги), фибронектин, РНК-азы, ДНК-азы, биологически активные фосфолипиды и их метаболиты и т. д. [1 2, 5, 7, 8, 9] .

Определенный интерес вызывает оценка действия слюны и грудного молока на адгезию гриба C. albicans к поверхности буккального эпителия (БЭ), поскольку представители рода C. albicans часто колонизируют слизистые оболочки полости рта при дисбактериозах. Именно данный аспект исследований, представляющий большую важность для клиницистов, наименее освещен в публикациях и потому явился предметом нашего более детального исследования.

Антиадгезивные свойства слюны были изучены у 42 новорожденных в возрасте от 1 часа жизни до 28 дней. Одновременно нами были исследованы антиадгезивные свойства грудного молока 84 матерей на первом месяце лактации. В числе образцов грудного молока было 11 проб молозива и 73 пробы зрелого молока. С учетом состояния здоровья новорожденные были распределены на три группы: 1-ю составили здоровые новорожденные, 2-ю — дети группы риска и 3-ю — дети с ОРЗ.

У детей 1-й группы масса тела при рождении была равна 3502,5±21,7 г, длина —53,5±0,5 см; оценка по шкале Апгар — 8—9 баллов, находились на грудном вскармливании. Матери этих детей были в возрасте в среднем 24 лет, какой-либо патологией не страдали, беременность и роды протекали физиологически.

Масса тела новорожденных из группы риска была меньше —3368,0±66,7, длина —52,5±0,4 см. В определенной степени этому способствовало отягощенное течение беременности и родов у матерей, причем в 60% случаев факторы риска сочетались. Дети также находились на грудном вскармливании, были выписаны домой из роддома на 6—8-е сутки в удовлетворительном состоянии.

Дети (3-я группа) были в возрасте от 6 до 28 дней жизни. Отягощенное течение беременности и родов отмечалось у 68% матерей. ОРЗ преимущественно протекало в среднетяжелой форме. На естественном вскармливании были 72% новорожденных, на смешанном и искусственном — 28%.

Антиадгезивную активность слюны определяли в модификации И.В. Маянской и соавт. [4], а постановку соответствующей реакции осуществляли в собственной модификации, основанной на методе М.В. Кушнаревой и соавт. [3] (рац. предложение КГМИ № 983/43 от 1 декабря 1992). Предварительно производили забор слюны и грудного молока, которое перед реакцией обезжиривали. Использованный для постановки реакции штамм C. albicans № 5 получали из Нижегородского медицинского института; БЭ забирали от одного и того же здорового донора. Далее готовили инкубационную взвесь из микробных клеток C. albicans (0,5 мл), взвеси БЭ донора (0,5 мл) с добавлением слюны (0,2 мл) для одной реакции либо молока (0,5 мл) — для другой. В контроле вместо слюны или молока использовали забуференный физиологический раствор. После инкубации в термостате при 37°С 30 минут путем трехкратного центрифугирования при 1000 g по 3 минуты удаляли неприлипшие микробные клетки C. albicans. Из осадка готовили мазки, фиксировали метанолом в течение 10 минут, окрашивали по Романовскому и микроскопировали при увеличении ×900. Определяли среднее количество адгезированных клеток C. albicans в пересчете на один эпителиоцит при просмотре 50 БЭ (рис. 1, 2). Показатель антиадгезивной активности молока (ПААМ) или слюны (ПААС) рассчитывали по формуле $1-\frac{N}{n}$, где N — количество адгезированных бактерий в опыте, n — в контроле.

Рис. 1. Буккальный эпителиоцит после искусственной колонизации C. albicans (контроль). На поверхности эпителиоцита в большом количестве адгезированные клетки C. albicans. ×900.

Рис. 2. Буккальный эпителиоцит после искусственной колонизации C. albicans с добавлением слюны или молока (опыт). Адгезия C. albicans к поверхности эпителиоцита резко снижается. ×900.

Анализ полученных результатов показал, что у всех новорожденных уже с первых часов жизни слюна вызывала ослабление адгезии клеток C. albicans к БЭ донора. Значение ПААС колебалось от 0 до 0,98. Если средние величины ПААС в группе здоровых детей составляли 0,86±0,03, в группе риска —0,83±0,04, то у больных ОРЗ они были достоверно снижены — 0,66±0,05 (Р<0,001).

Аналогичной антиадгезивной активностью обладает и грудное молоко. Величина ПААМ колебалась от 0,04 до 0,98, однако во всех 3 группах новорожденных средние показатели были примерно одинаковыми — соответственно 0,75±0,04; 0,77±0,02; 0,70±0,06 (Р>0,1). Отмечена различная антиадгезивная активность молозива (0,88±0,01) и зрелого грудного молока (0,77±0,02; Р<0,001). Важен тот факт, что показатели ПААМ в значительной степени зависели от состояния здоровья матери в случае диагностирования у них острых и/или хронических инфекционных процессов в периоде беременности. Показатели антиадгезивной активности молока снижались до 0,55±0,08 и существенно отличались от таковых у здоровых матерей. Более того, в отдельных случаях мы наблюдали обратный эффект грудного молока — оно способствовало адгезии микробных клеток к БЭ.

Таким образом, новорожденные с момента рождения наделены способностью противостоять адгезии патологических штаммов микроорганизмов к клеткам буккального эпителия. Этому способствует также присущая грудному молоку антиадгезивная активность, особенно в периоде секреции молозива. Вместе с тем дифференцированная оценка указанных показателей выявила в случае заболевания новорожденных ОРЗ снижение ПААС и у больных матерей — ПААМ. Последующее снижение колонизационной резистентности БЭ повышает риск инфицирования и создает предпосылки для осложненного течения неонатального периода.

ВЫВОДЫ

1. Слюна новорожденного с первых часов жизни и молоко матери обладают антиадгезивной активностью, что подтверждается на модели регистрации адгезии C. albicans к буккальным эпителиоцитам донора.
2. Отмечено снижение антиадгезивной активности слюны у новорожденных, больных ОРЗ, и грудного молока у больных матерей.
3. Антиадгезивная активность молозива выше, чем у зрелого грудного молока.