On the use of alcoholized suspension of sp. pallida for serodiagnosis of syphilis

Abstract

In our last communication (Geltzer and Yunusova) for serodiagnosis of syphilis, we proposed an alcoholized suspension of sp. pallida. In previous studies (Geltzer and Popov, Geltzer and Sushkova) with a number of antigens from sp. pallida (alcoholic extract from sp.pallida according to F. Klopstock'y, carbolized suspension of sp.pallida according to Gaelitgen'y, suspension of sp.pallida in saline NaCl and formalized suspension of sp.pallida), it turned out that, although such antigens are They are more sensitive than organ extracts usually used in WaR, but nevertheless, due to some disadvantages, they are not very suitable for wide practical use.

Full Text

В последнем нашем сообщении (Гельтцер и Юнусова) для серодиагноза сифилиса мы предложили в качестве антигена в опыте связывания комплемента алкоголизированную взвесь sp. pallida. В предыдущих исследованиях (Гельтцер и Попов, Гельтцер и Сушкова) с рядом антигенов из sp. pallida (алкогольный экстракт из sp. pallida по F. Klopstock’y, карболизированная взвесь sp. pallida по Gaelitgеns’y, взвесь sp. pallida в физиологическом растворе NaCl и формализированяая взвесь sp. pallida), выяснилось, что такого рода антигены хотя и являются чувствительнее нежели обычно применяемые при WaR орган-экстракты, но все же, благодаря некоторым недостаткам, для широкого практического применения они мало пригодны. Так, алкогольные экстракты оказываются стойкими только при хранении при t° 35—37° и, кроме того, по невыясненной причине, различные серии алкогольных экстрактов, что было отмечено еще Г. Klopstoск’ом, далеко не всегда оказывались равноценными; взвеси же sp. pallida: 1) в физиологическом растворе NaCl, 2) с прибавлением ас. carbol, (по Gaebtgens’y и 3) с прибавлением формалина приобретали при хранении по истечении 3—4 недель антикомплементарные свойства. Алкоголизированная же взвесь sp. pallida (антиген № 4), наряду с высокой чувствительностью и специфичностью, при хранении в течение продолжительного времени (наблюдения до 8 месяцев) не приобретала антикомплементарных свойств,благодаря чему такой антиген выгодно отличался от всех выше перечисленных.

Целью настоящей работы являлось изучение действия алкоголизированной взвеси sp. pallida в опытах связывания комплемента при серодиагнозе сифилиса на большом количестве случаев с обращением особою внимания на момент появления антикомплементарных свойств и опенка значительного ряда серий этого антигена.

Алкоголизированная взвесь sp. pallida была нами приготовлена в количестве 16 серий (способ приготовления: осадок, состоящий из отмытых физиологическим раствором NaCl спирохэт из культур штамма II разводится смесью из 2 частей физиологического раствора NaCl и 1 части 96% этилового алкоголя таким образом, что густота взвеси соответствует бактерийному стандарту в 4 миллиарда бактерийных тел в 1 куб. см.). Антиген сохранялся при обычной комнатной температуре.

За период наблюдений над этим антигеном в течение 12 месяцев было установлено, что во 1) титр, первоначально соответствующий разведению 1:6, через 2 месяца падал до 1:5, держался без изменений в течение 4 месяцев и затем опять падал и доходил до 1:3; во 2) антикомплементарные свойства не проявились за весь период наблюдения в течение 12 месяцев. При употреблении антигена в разведении 1:3 доза комплемента оставалась той же, что и при разведении антигена 1:6 или 1:10; все 16 серий этого антигена в отношении перечисленных свойств оказались равноценными.

Необходимо отметить, что морфологически спирохэты из алкоголизиро« ванной взвеси вполне сохраняют свою структуру.

Для изучения чувствительности и специфичности алкоголизированной взвеси sp. pallida были поставлены опыты связывания комплемента параллельно с WaR и реакцией Kahn’a с сыворотками больных, исследуемых на сифилис.

Всего было исследовано 5080 случаев, среди них 111 спинно-мозговых жидкостей. Для постановки WaR применялись экстракты по BordetRuel ens‘y у серии №№ 174 176 и 181 из Всеукраинскего ин-та бактериологии, эпидемиологии и серотерапии им. Мечникова, (Харьков) и специфический печеночный антиген серии №№ 71 и 75 из Ин-та инфекционных болезней им. Мечникова (Москва).

Реакция Kahn’a ставилась по скорому способу с разведениями антигена в 0,05, 0,025 и 0,0125 куб. см. Антиген для этой реакции приготовлялся из штаммантигена по Калинину и Гинзбургу.

Из всего количества исследуемых сывороток и спинно-мозговых жидкослей полное совпадение по всем 3 методам (р. связывания комплемента с алкоголизированной взвесью sp. pallida, WaR и р. Kahn’a) было получено в 4338 случаях, т. е. в 85,4%, из них: положительные реакции в 627 случаях (резкоположительные и положительные 564, слабоположительные—63, отрицательные реакции в 3711 случаях. Расхождения в результатах были получены в 742 случаях, т. е. в 14,6%, из них:

1. Положительная р. со спирохэтн. антиг., по BR 9 и спец, печен, и о трин. по Кahn’у в 13 случ. (LIII lat 5 и L8).
2. Положительная р. со спирохэтным антиг., по BR и отриц. реакц. по спец, печен, по Кahn’у (в 8 случ.) LIII lat 3 и L5.
3. Положительная реакция со спирохэтн. антиг. и спец, печен, и отрии. р. антингеном по BR и по Кahn’у в 20 случ. ( LI—1, LII lat 2, LIII lat Neurolues I. и L13).
4. Положительная р, со спирохэгн. антиген., спец, печен, и по Kahn’y и прии. р. с антиген. по BR в 125 случ. LI—2, LII lat 14, LIII lat 40, L оопцеп 5, L viscer. 1, Tabesdors 1, Pp. 1, L60).
5. Положительная p. co спирохэтн. антиг., по BR и no Kahn’y и отш р. со спец. печ. в 14 случ. LIT lat 4, LUI lat 3 и L7). т
6. Положительная р. со спирохэтн. антиг. и по Кahn’у и отрии. р. с антигеном по BR и со спец, печен, в 163 случ. (L1— LII lat 2. LIII lat’49 L congen 6. Neurolues 3, L vciser '. Pp. 2. Tabes, dors. 2, L85).
7. Положительная p. co спирохэтн. антиген.и отрицат. p. co всеми другими (т. е. BR и спец, печен.) и по Кahn’у в 110 случ., из них:

a) Резкоположительн. и положительн. р. (+-|-4--h и +++) в 17 случ LII lat 3, LIII lat. 4 и L1O).

b) Слабоположит. p. (++) в 20 случ. LIII lat. 13, congen. 2 и L5).

c) Слабоположит. p. (+) в 73 случ. (Lil lat. 2. LIII lat. 20, L cons 3, Pp 1 Tabes dorz. 1 L46). '

Другую группу расхождений составляют случаи, в которых спирохэтный антиген дал отрицательную реакцию.

1. Отрицательная р. со спирохэтным антигеном по BR. спец, печен, и слабоположительная р. по Kahn’y в 245 случ. (LII lat 13, LIII lat 69, L congen 8, Tabes, dors.,1 LP146 после typhus exanthematic 4, ulcps molle 1. Tumor 3).
2. Отрицательн. p. co спирохэтн. антиген., по BR и слабоположительн. p. со спец, печен, и по Кahn’у в 8 случ. (LIII lat. 3, L congen. 1 L4). х
3. Отрицательн. р. со спирохэтн. антиг., спец, печен, и слабо-положительн. р. с антигеном по BR и по Kahn’y в 4 случ. (LIII iat. 1 и L3).
4. Отрицательн. р. со спирохэтным антиген., и по Kahn’y и положительн. р. с антигеном по ВЙ и спец, печен, в 4 случ. (LII lat. 1, L congen.—1 и L2).
5. Отрицательносо спирохэтн. антигеном, спец, печен, и по Кahn’у и слабо положительн. р. с антиген, по BR в 13 случ. (LII lat. 1 и LP12).
6. Отрицательн. р. со спирохэтн. антиг. и слабо-положительная р. с антигеном по BR, спец, печен, и по Kahn’y в 2 случ. (Pp.—1 и Ll).
7. Отрицательн. р. со спирохэтн. антиг., по BR и по Кahn’у и слабо-положительн. р. со спец, печен, антиген, в 13 случ. (LIII lat. 4 и L9).

Принимая во внимание общеизвестную чувствительность антигена из сифилитической печени при постановке WaR, являются возможным случаи совпадения реакций со спирохэтным антигеном и специфическим печеночным исключить из случаев расхождения и тогда число расхождений в отношении WaR уменьшится на 420.

Что касается тех случаев расхождения, в которых была получена отрицательная реакция со спирохэтным антигеном, то мы видим, что во всех случаях, за исключением двух, все же имелось совпадение с WaR или с одним из Wa—антигенов или с реакцией Kahn’a. В 2-х случаях спирохэтный антиген дал отрицательную реакцию при слабо-положительной реакции по всем другим методам. В одном из этих случаев сыворотка больного с подозрением на lues, а в другом случае сыворотка больного с Рр., при чем с антигеном по В or de t-Ruelens’y п со специфическим печеночным-)—)-, а по Kahn’y--. Исследованная же одновременно с сывороткой спинномозговая жидкость этого же больного дала положительный результат (4Н—Н и со спирохэтным антигеном. Далее, при рассмотрении тех случаев расхождения, в которых была получена отрицательная реакция со спирохэтным антигеном, антигеном по Вогdеt Ruеlеns’y и специфическим печеночным и слабо-положительная по Kahn’y, мы видим, что в 5 случаях такой результат дали сыворотки больных, выздоравливающих после сыпного тифа (4 случ.), и больного мягким шанкром (1 случ.). Представляют интерес сыворотки больных после сыпного тифа. Так как анамнез этих случаев исключает сифилис, WaR дала отрицательный результат, причем исследование сывороток про
изводилось повторно, то является возможным допустить, что в этих случаях мы имеем дело с неспецифическим положительным результатом реакции Kahn’a.

При выяснении степени чувствительности реакции свызывания комплемента с антигеном из алкоголизированной взвеси sp. pallida по сравнению с WaR, мы считаем последнюю положительной и в том случае, когда был получен положительный результат с одним антигеном по BR.

Итак, мы видим, что реакция со спирохэтным антигеном в 1,2 раза чувствительнее нежели WaR (положительные результаты WaR в 16,7°/°, а со спирохэтным антигеном № 4 и 21,2%. По сравнении же результатов реакций со спирохэтным антигеном и по Kahn'y оказывается, что спирохэтный антиген по своей чувствительности несколько отстает от р» Kahn'a и последняя при этом оказывается чувствительнее реакции связывания комплемента со спирохэтным антигеном в 1,09 раза (положительные результаты реакций Kahn’a в 23,3%, а со спирохэтным антигеном № 4 в 21,2%).

При сравнительной оценке этих результатов необходимо все же принять во внимание, что р. Kahn’a дала невидимому неспецифический результат, как было сказано выше при рассмотрении расхождений результатов реакций, в тех случаях, когда были получены отрицательные результаты по WaR и со спирохэтным антигеном, а по Kahn’y слабоположительные реакции в 5 случаях из общего числа 245 такого рода расхождений.

Если сопоставить результаты наших первых исследований с алкоголизированной взвесью sp. pallida, изложенных в предыдущей работе, когда для постановки реакции применялся антиген 2—8-недельной давности приготовления (т. е. не старше 2 месяцев, когда не отмечалось еще падение титра) с исследованиями, произведенными теперь, т. е. с антигенами, хранившимися до года, то в отношении чувствительности реакций мы видим след:

Со спирохэтн. антиг. от 1/2—2 мес. хранения	Со спир. антиг. от 1/2—12 мес. хранения
Полож резул. со спирох.ант  28,3% по WaR   20,3% по Кahn’у         22,9% р. со спир. антиг. чувствит. WaR в 1,4 раза . р. со спир. антиг. чувствит. р. Кahn’а в 1,2 раза	21,2% 16,7% 23,3% в 1,2 раза р. Кahn’а чувствит. р. со спир. ант. в 1,09 раза

Таким образом, алкоголизированная взвесь sp, pallida при длительном хранении (до 12 месяцев по нашим наблюдениям) не теряет свою реактивность и в опытах связывания комплемента с сыворотками людей больных сифилисом или подозрительных на заболевание сифилисом является более чувствительным антигеном (в 1,2 раза) нежели антигены, применяемые при WaR, по сравнению же с результатами реакции Kahn’a этот антиген из алкоголизированной взвеси спирохэт несколько отстает в своей чувствительности от р. Kahn’a.

При сравнении же этих данных с наблюдениями, произведенными над. применением для серодиагноза сифилиса алкоголизированной взвеси sp. pallida от 2 до 8-недёльной давности приготовления, мы видим, что чувствительность антигена несколько падает в связи с продолжительностью его хранения.

У читывая то обстоятельство, что титр антигена в особенности резко падает, начиная с 6 месяца хранения (до 1:3), мы считаем, что наиболее целесообразным является применение этого антигена не старше 6 месяцев с момента его приготовления.

В виду того, что, применяя этот антиген из алкоголизированной взвеси sp. pallida, мы имеем возможность охвата большого числа случаев сифилиса, реагирующих положительно, введение опыта связывания комплемента с предлагаемым антигеном в виде дополняющей реакции комплексного метода серодиагноза сифилиса является необходимым. Но эта реакция не может исключить WaR и р. Kahn’a, так как при длительном наблюдении выяснилось, что иногда все же и этот спирохэтный антиген дает такого рода расхождения, когда при отрицательной реакции с этим антигеном получаются положительные результаты по WaR или Kahn’y.

Для дальнейшего изучения практической ценности этого спирохэтного антигена необходима проверка его на значительном клиническом материале.

Выводы:

1. Алкоголизированная взвесь sp. pallida (антиген № 4) не обладает антикомплементарными свойствами и при хранении в течение года.
2. Титр антигена падает в незначительной степени спустя 2 месяца с момента приготовления и затем наб мес. вдвое.
3. Чувствительность антигена с связи с продолжительностью его хранения уменьшается незначительно.
4. В опытах связывания комплементов с сыворотками больных и подозрительных на заболевание сифилисом спирохэтный антиген, при хранении даже до 12 месяцев, является более чувствительным, нежели антигены орган—экстракты, применяемые при WaR.

1) Доклад на объединенной Научной конференции Микробиологического института, кафедры микробиологии КГМИ и кафедры бактериологии ГПДУВ'а—17/1V 1933 г.