Use of drugs of pyrimidine series for the treatment of experimental immune heart lesion

Full Text

Создание экспериментальной патологической модели является важным этапом при анализе эффективности нового лекарственного средства.

В работе с больными людьми возникают трудности при формировании групп сравнения, поскольку приходится учитывать большое количество различных критериев: возраст, активность воспалительного процесса, вид клапанного порока сердца, степень недостаточности кровообращения, вовлечения в процесс внутренних органов и компенсации их функции, а также сопутствующие заболевания.

 

Таблица 1

Динамика гематологических и иммунологических показателей крови у морских свинок при моделировании иммунного поражения сердца

Показатели	Интактные животные	Исходные значения	8-й день	15-й день	22-й день
Лейкоциты, -109/л	7,20±1,25	10,30±1,96	14,60±2,08*	18,30±1,58*	19,40±2,14*
СОЭ, мм/ч	3,00±0,98	5,00±1,62	19,70±1,43*	35,40±2,18*	42,60±2,40*
Е-РОЛ,$·$109/л	2,20±0,01	2,40±0,01	2,60±0,01*	1,70±0,02*	1,10±0,01*
ИС РБТЛ	68,00±4.25	70,00±5,80	39,00±4,92*	24,00±4,20*	19,30±3,81*

Примечание. ИС (индекс стимуляции) РБТЛ-РБТЛ стим./РБТЛ спонт. *достоверное отличие от показателей интактных животных (Р<0,05)

 

Кроме того, большинство больных ревматизмом постоянно принимают лекарственные препараты, способные оказывать влияние на иммунную систему: противомикробные, нестсроидные и стероидные противовоспалительные средства, 4-аминохинолины, сердечные гликозиды, антиаритмические и мочегонные средства. Таким образом, клиническое исследование эффективности нового лекарственного средства становится задачей со многими неизвестными.

Создание экспериментальной модели иммунного поражения сердца на животных одного вида, пола и возраста может помочь преодолеть эти трудности.

Для исследования эффективности двух соединений пиримидинового ряда — метилурацила и нового отечественного препарата ксимедона, обладающих свойствами регенераторов с иммуномодулирующей активностью [ 1, 2, ], на морских свинках была создана модель поражения сердца, на наш взгляд, аналогичная ревмокардиту у людей.

Исследования проводились на 40 самцах массой от 300 до 400 г в возрасте от 4 до 4,5 месяцев. Контрольные исследования были выполнены на 10 интактных животных. Поражение сердца вызывали по модифицированной схеме, сочетающей в себе элементы моделей С. И. Писарева и Кавелти [3].

Животное под эфирным наркозом фиксировали на операционном столике, оттягивали и фиксировали нижнюю челюсть. В область глотки под слизистую оболочку вводили тонкой иглой 0,1 мл 2% раствора формалина, в результате этого происходило длительное раздражение глоточных рецепторов. Затем проводили сенсибилизацию комплексным аллергеном, состоящим из 25% взвеси гомогената сердца мыши и стрептококкового аллергена (производства Казанского НИИЭМ), разведенного в соотношении 1:5 в дозах 0,3 мл/кг массы животного. Аллерген вводили внутрибрюшинно один раз в неделю в течение 3 недель.

В ходе эксперимента определяли СОЭ, количество лейкоцитов, Т-лимфоцитов в тесте Е-розеткообразования с эритроцитами кролика (Е-РОЛ), бластообразующую способность Т-лимфоцитов в ответ на стимуляцию ФГА (РБТЛ с ФГА) [4]. Через 2 недели после последней сенсибилизации 10 животных были умерщвлены. Кусочки тканей фиксировали в нейтральном формалине по Лилли в жидкости Карнуа и после дегидратации в восходящих концентрациях спирта заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином и пиронином по Браше.

Результаты исследования показателей крови в динамике представлены в табл. 1. Раздражение глоточных рецепторов не оказало существенного влияния на лабораторные показатели. В результате сенсибилизации комплексным аллергеном наблюдалось увеличение количества лейкоцитов и СОЭ. Количество Е-РОЛ после первой сенсибилизации несколько возросло, однако с каждой последующей сенсибилизацией наблюдалось стабильное снижение этого показателя, сопровождавшееся угнетением бластообразующей способности Т-лимфоцитов в ответ на стимуляцию ФГА.

Микроскопическая картина была одинаковой у всех животных. В препаратах сердца обнаружен панкардит с экссудативным и продуктивным компонентами воспалительной реакции. Резкие изменения отмечались в кровеносном русле: отечность сосудистых стенок, периваскулярный отек, полнокровие, стаз, местами тромбозы сосудов. Наблюдался выраженный отек стромы с декомплексацией кардиомиоцитов и образованием межуточных инфильтратов, состоящих из лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, бластов и единичных лейкоцитов. Параллельно с этим вокруг сосудов формировались гранулемы из лимфоидных клеток, гистиоцитов и фибробластов (рис. 1). Кардиомиоциты были подвержены изменениям от зернистой дистрофии до очагового некроза с глыбчатым распадом (рис. 2).

 

Рис. 1. Выраженная гранулематозная реакция вокруг сосуда. Окраска гематоксилин-эозином; Х800.

 

Рис. 2. Некроз миокарда с глыбчатым распадом. Окраска гематоксилин-эозином; X800.

 

Таким образом, в результате длительного раздражения глоточных рецепторов и последующей сенсибилизации комплексным аллергеном у морских свинок было получено экспериментальное поражение сердца, похожее на ревмокардит у людей, сопровождавшееся изменением картины крови и угнетением Т-системы иммунитета.

Полученная модель поражения сердца использована для исследования эффективности препаратов пиримидинового ряда: метилурацила и ксимедона. Животные были разделены на три группы по 10 особей в каждой. Ежедневно в течение 3 недель 1-я группа получала раствор ксимедона в дозе 30 мг/кг массы, 2-я — раствор метилурацила в дозе 100 мг/кг массы, 3-я — 0,9% раствор хлорида натрия. Растворы вводили внутрибрюшинно в объеме 1,0 мл. В последний день введения препаратов у животных вызывали обострение воспалительного процесса путем введения комплексного аллергена. В динамике проводили клинические и иммунологические исследования крови. Через 2 педели после провокации обострения воспалительного процесса животные были умерщвлены.

Исходные значения гематологических и иммунологических показателей крови были практически одинаковы у животных всех групп. В 1-й группе при лечении ксимедоиом наблюдалось снижение количества лейкоцитов до уровня интактных животных и более чем двухкратное снижение СОЭ, в то время как во 2 и 3-й группах динамика этих показателей была незначительной (табл. 2). После обострения воспалительного процесса, вызванного введением комплексного аллергена, у животных 1-й группы отмечалось увеличение количества лейкоцитов и СОЭ в значительно меньшей степени, чем во 2 и 3-й группах. Применение препаратов пиримидинового ряда привело к увеличению количества Т-лимфоцитов и усилению ответа лимфоцитов в РБТЛ при стимуляции ФГА. Эти изменения были более выражены при лечении животных кси- медоном (отличие показателей 2 и 3-й групп от показателей 1-й группы достоверно; Р<0,05). Провокационное введение комплексного аллергена вызвало меньшее угнетение иммунологических показателей у животных 1-й группы (табл. 3).

Микроскопическая картина по группам существенно различалась. Наиболее выраженные изменения наблюдались у животных 3-й группы, не получавших лечения. У них сохранялась картина панкардита с экссудативным и продуктивным компонентами воспалительной реакции, аналогичная описанной ранее при характеристике микроскопической картины экспериментального иммунного поражения сердца. В миокарде животных 2-й группы сохранялись выраженные микроциркуляторные расстройства. Изменения в кардиомиоцитах носили характер зернистой дистрофии, очаги некрозов отсутствовали. Имелись выраженный отек стромы с разволокнением мышечных волокон и слабовыраженное межуточное воспаление с формированием инфильтратов. Вокруг сосудов наблюдались лимфогистиоцитарные гранулемы (рис. 3). В препаратах животных 1-й группы, получавших ксимедон, были небольшой отек стромы, микроциркуляторные расстройства в виде полнокровия сосудов, зернистая дистрофия кардиомиоцитов. Клеточная воспалительная реакция отсутствовала (рис. 4).

 

Рис. 3. Небольшая гранулема и признаки рубцевания (метилурацил). Окраска гематоксилин-эозином; X800.

 

Рис. 4. Слабовыраженный отек стромы, умеренная зернистая дистрофия кардиомиоцитов (ксимедон). Окраска гематоксилин-эозином; Х800.

 

Таблица 2

Влияние ксимедона и метилурацила на динамику лейкоцитов и СОЭ у морских свинок

Показатели	1-я группа	2-я	З-я	Интактные животные
Лейкоциты, $·$109/л
исходн.	16,40±1,80*	16,00±1,89*	15,90±2,18*	7,20±1,25
8-й день	14,50±1,20*	15,00±2,12**	15,30±2,05*
15-й	8,40±,2,24	13,85±1,90*	19,90±1,22*
22-й	8,20±2,18	10,80±2,04	12,50±2,30
29-й	13,30±1,93*	19,80±1,87*’**	21,00±1,90*’**
36-й	12,40±1,86	17,50±1,54*	18,80±1,62*’**
СОЭ, мм/ч
исходн.	31,80±2,14*	29,80±2,81*	32,20±1,96*	3,00±0,98
8-й день	25,70±2,44*	28,50±1,90*	30,60±2,80*
15-й	18,30±2,61*	26,30±1,87*’**	28,70±2,05*’**
22-й	12,60±1,58*	24,80±2,17*’**	26,40±1,54*’**
29-й	28,90±1,78*	42,50±2,60*’**	45,30±2,37*’**
36-й	20,80±2,05*	36,20±2,18*’**	38,70±2,42*’**

* различие достоверно при сравнении с данными интактных животных (Р<0,05), ** отличие достоверно при сравнении с данными 1-й группы (Р<0,05).

 

Таблица 3

Влияние ксимедона и метилурацила на динамику иммунологических показателей крови у морских свинок

Показатели	1-я группа	2-я	З-я	Интактные животные
Е-РОЛ, $·$109/л
исходн.	1,30±0,02*	1,21±0,03*	1,26+0,01*	2,20+0,02
8-й день	1,41±0,02*	1,30±0,01*	1,28±0,01*’**
15-й	1,72±0,02*	1,46±0,01*’**	1,32±1,01*’**
22-й	1,98±0,01*	1,53±0,01*’**	1,39±0,02*’**
29-й	1,52±0,02*	1,22±0,02*’**	0,90±0,02*’**
36-й	1,60±0,02*	1,29±0,02*’**	0,98±0,02*’**
ИС, РБТЛ
исходн.	21,00±3,12*	16,00±2,00*’**	18,20±1,87*	68,00+4,25
8-й день	34,30±2,80*	23,10±2,10*’**	21,80±2,04*’**
15-й	41,10±2,78*	27,80±3,05*’**	19,70±1,95*’**
22-й	46,30±3,00*	31,30±2,64*’**	17,80±1,90*’**
29-й	43,60±2,57*	22,50±1,90*’**	14,20±1,76*’**
36-й	48,30±2,83*	29,80±1,82*’**	15,80±1,93*’**

Примечание. То же, что в табл. 1, 2.

 

Таким образом, препараты пиримидинового ряда метилурацил и, особенно, новый отечественный препарат ксимедон, обладающие свойствами регенераторов с иммуномодулирующей активностью, оказывают благоприятное влияние на течение иммунного поражения сердца в эксперименте.

About the authors

D. A. Valimukhametova

Kazan State Medical University

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com

Department of Internal Medicine №3, Department of Clinical Pharmacology, zav.- prof.

Russian Federation, Kazan

E. B. Nurmukhametova

Kazan State Medical University

Email: info@eco-vector.com

Department of Internal Medicine No. 3, Department of Clinical Pharmacology

Russian Federation, Kazan

References

Supplementary files