About the antigenic properties of neosalvarsan

Abstract

The question of the use of neosalvarsan as an antigen in the complement fixation reaction is of twofold interest: theoretical (study of the problem of antigens) and practical (study of allergy to salvarsan).

Full Text

Вопрос о применении неосальварсана в качестве антигена в реакции связывания комплемента имеет двоякий интерес: теоретический (изучение проблемы антигенов) и практический (изучение аллергии к сальварсану).

Долго господствовавшее учение об исключительной роли белковых антигенов с их двойной функцией (иммунизаторной „in vivo" и комплементсвязующей „in vitro"), как известно, было поколеблено работами Закса и Ландштейнера введением понятия о гаптенах—неполноценных антигенах (липоидах), способных только ко второй функции (комплементсвязующей), но превращающихся в полноценные антигены с прибавлением к ним белковой „буксирующей" субстанции. Вслед за липоидами антигенные свойства стали приписывать и химическим веществам— „полугаптенам" Закса при обработке их соответствующими коллоидами.

Установлена также антигенность некоторых коллоидных металлов—золота, железа (Барыкин, Фризе, Зильбер), иода (Кац), парафинов (Ермольева).

Клопшток и Зельтер использовали в качестве антигена атоксил в смеси с сывороткой. В 1933 г. в жур. „Wlen. kiln Wochensch." (№№ 11, 27 и 28) Энсбруннер и Вендльбергер опубликовали работу об использовании неосальварсана в качестве антигена („псевдоантигена") в реакции связывания комплемента и применении этой реакции при изучении сальварсанных осложнений. Независимо от них Финкельштейн и Поройкова опубликовали свои аналогичные наблюдения в 1934 г. (Журн. микроб. и иммун., т. XII, вып. 1). Начальной фазой вышеуказанных работ было определение антикомплементарных и гемотоксических свойств сальварсана. По этому поводу у Финкельштейна и Поройковой мы находим: „4% раствор неосальварсана в дестиллированный воде и физ. растворе хлористого натра оказался совершенно не гемотоксичным, анти- комплементарные свойства его начинают проявляться с разведения 1:400, рабочая доза, соответствующая половине последней растворяющей, равна 1:500“. Иные данные находим у Энсбруннера и Вендльбергера: антикомплементарное- действие неосальварсана прекращается в разведении 1:4000, и рабочая доза устанавливается в 1:4000 (½ подзадерживающей дозы) или 1:8000 (V2 последней растворяющей). В опытах на кроликах Финкельштейн и Поройкова установили, что однократное введение большой дозы неосальварсана в физ. растворе хлористого натра не ведет к появлению у кролика комплементсвязующих веществ; положительная реакция связывания комплемента с неосальварсаном в качестве антигена получается только при 3—4-кратном введении неосальварсана в коллоидном растворе белка, причем эту положительную реакцию они расценивают не как реакцию иммунизаторного порядка, а как следствие плохой резорбции неосальварсана из организма. Эту положительную реакцию на неосальварсан, называемую ими „неореакцией“, авторы получили также у 25 больных с сальварсанным дерматитом. У некоторых больных положительная реакция получалась за несколько дней до появления дерматита; 143 контроля дали отрицательный результат. К сожалению, Финкельштейн и Поройкова не приводят ни техники самой реакции, ни протоколов историй болезни. В заключении своей работы авторы указывают, что предложенная ими „неореакция“ может служить критерием плохой переносимости неосальварсана, зависящей от токсичности препарата или идиосинкразии организма, и в силу этого с успехом может быть использована клиникой.

Энсбруннер и Вендльбергер подробно излагают технику реакции: испытуемая сыворотка исследуется на 9 пробирках с падающими дозами антигена неосальварсана (от 1:4000 до 1 : 1000000); опыт ставится с постоянной дозой комплемента (2% комплемент на физ. растворе хлористого натра) и вытитрованной гемолитической системой, антиген—неосальварсан разводится в физ. растворе хлористого натра с 2% содержанием комплемента; различные препараты неосальварсана обладают различными антикомплементарными и рабочими дозами (сальварсан-натриум 1:8000, неозильберсальварсан 1:16 000, солюсальварсан 1:80000, миосальварсан 1:500 000, сернокислый никель 1:8000). Реакция была поставлена у 149 больных (654 опыта); материал был самый разнообразный: 16 лихорадящих б-ных (туберкулез, малярия), 19 с искусственной сенсибилизацией к сальварсану (из них 4 удачных), несколько случаев с сальварсанным дерматитом и эритемой, один случай эритемы от сольганала, и один—ртутного дерматита, несколько случаев с кожными заболеваниями, 91 контроль (сифилитики, гонороики).

Положительная реакция получена в 9 случаях (приводятся подробные протоколы историй болезни 9 больных): 3 случая с сальварсанным дерматитом, 2—с сальварсанной эритемой 9-го дня, типа Милиана, 2—с экспериментально полученной сенсибилизацией к сальварсану, один—с сольгоналэритемой, один— с ртутным дерматитом. В случаях позднего сальварсанного дерматита положительная реакция получена с крайне высокими разведениями неосальварсана (1:8000— 1:1 000 000); в этих случаях авторам удается пассивный перенос сальварсанной сверхчувствительности по Прауснитц-Кюстнеру. В случаях экспериментально полученной сенсибилизации к неосальварсану (у несифилитиков) реакция связывания комплемента нестойка, т. к. получается только в течение 1—2 часов после наложения кожных сальварсанных тестов, с низкими разведениями антигена, притом исключительно у тех больных, от которых удается произвести пассивный перенос сальварсанной сверхчувствительности. Положительные реакции получены также в семи контрольных случаях (гемоклазический шок, сольганал-эритема, ртутный дерматит), что указывает на неспецифичность реакции. Эта неспецифичность сказывается еще в том, что положительная реакция получается наряду с сальварсаном и с сернокислым никелем в качестве антигена.

В дальнейшем авторы останавливаются на сущности полученной ими реакции. Причин положительной реакции может быть несколько:

1) тяжесть заболевания и высокая температура (эта причина должна быть исключена, т. к. отдельные сальварсанные эритемы с положительной реакцией клинически протекали легко, контроля с высокой температурой давали отрицательную реакцию).

 2) наличие кожных явлений при сальварсанных осложнениях (эта причина должна быть также исключена ввиду наличия положительных реакции у несифилитиков с искусственно полученной сенсибилизацией к неосальварсану);

3) наличие в организме сальварсана (и эта причина исключается на том основании, что у сифилитиков с хорошей переносимостью сальварсана реакция всегда отрицательна;

в этой части интерпретация положительной реакции у Энсбруннера и Вендльбергера резко отличается от таковой у Финкельштейна и Поройковой, видящих причину положительной реакции в плохой резорбции сальварсана;

подкрепляющим моментом для исключения этой причины является наличие положительной реакции при сольгонал-эритеме и ртутном дерматите).

Реакцию, наконец, нельзя ставить в связь с лабильностью сыворотки, т. к. крайне лабильные сыворотки больных с малярией и легочным туберкулезом дают отрицательную реакцию. Все вышеприведенные обстоятельства дают авторам основание ставить реакцию в связь с аллергическим состоянием организма, в силу нарушенного равновесия плазма-коллоидов, в результате чего получается состояние, известное под именем гемоклазического криза („Kolloidokiasie" Видаля). Одним из спутников этого гемоклазического криза является лейкопения, которую авторы установили при введении аллергическим субъектам неосальварсана (например, при экспериментальной сенсибилизации к сальварсану)—явление, не имеющее ничего общего с реакцией д'Амато (лейкопения у сифилитиков после введения им неосальварсана). Таким образом, по мнению Энсбруннера и Вендльбергера, между аллергическим состоянием организма к сальварсану „in vivo“, гемоклазическим кризом и сывороточной реакцией „in vitro" существует тесная связь. Вышеуказанными двумя работами, а также работой Шрейнера и Энсбруннера, с аналогичными выводами, исчерпывается, насколько известно, вся литература но интересующему нас вопросу.

Работая в настоящее время над вопросом аллергии кожи к сальварсану, я не мог, разумеется, пройти мимо этих работ, не подвергнув их тщательному изучению, т. к. возможность пользоваться методом связывания комплемента при аллергических заболеваниях с использованием в качестве антигена различных аллергенов представляется крайне заманчивой и открывает нам новые перспективы в вопросах изучения аллергии, как проблемы в целом. В частности, в вопросах изучения аллергии к сальварсану метод связывания комплемента в случае его пригодности оказался бы особенно эффективным, так как применение различных кожных сальварсанных тестов несомненно меняет аллергическую настройку организма и регистрирует только кожную переносимость, не разрешая вопроса переносимости него организмом в целом, метод же пассивного переноса сальварсанной сверхчувствительности удается, по-видимому, крайне редко. Наконец, этот метод в случае его пригодности должен иметь исключительное значение в профилактике побочных сальварсанных явлений, т. к. положительная реакция по Финкельштейну и Поройковой появляется за некоторое время до наступления этих побочных явлений.

Исходя из вышеуказанных соображений, я и решил проделать проверочную работу по вопросу об антигенных свойствах сальварсана. Я, как и мои предшественники, начал с изучения анти- комплементарных и гемотоксических свойств сальварсана. Уже первые мои опыты показали, что все препараты неосальварсана (как немецкого, так и нашего советского изготовления) в разведении 1:100 в физ. растворе хлористого натра через 5—10 минут мутнеют, а через 15—30 минут дают густой хлопчатый осадок, растворы же в разведении 1:200 остаются прозрачными в течение 2—3 часов, после чего наступает легкое помутнение; в дальнейших своих опытах я пользовался поэтому исходным раствором сальварсана в разведении 1:200. При изучении антикомплементарных свойств неосальварсана я приготовлял, как видно из Таблица 1, девять разведений неосальварсана (1:100 — 1:32000).

Таблица 1. Антикомплементарное действие неосальварсана и никеля.

№№ разведе­ний	Степень разве­дения	Немец. неосер. 1778910 pH=6.7	Немец. неосер. VVMX pH=?	Русек. неосер. 1628 рН=7.28	Русск. неосер. 1644 pH=6.57	Русск. неосер. 1750 pH=7.08	Русск. неосер. 1681 pH=7.28	Русск. неосер. 1911 pH=6.78	Серно­кислый никкель
I	100	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н
II	200	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н
III	500	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н
IV	1000	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н
V	2000	+Н	+Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н	—Н
VI	4000	+Н	+Н	+Н	—Н	—Н	—Н	+Н	+Н
VII	8000	+Н	+Н	+Н	+Н	—Н	—Н	+Н	+Н
VIII	16000	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н
IX	32000	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н	+Н
Рабочая доза:
½ последней растворяющей		8000	8000	16000	32000	64000	64600	16000	16000
1½ под-задерживающей		4000	4ооо	8000	16000	32000	32000	8000	8000

Примечания: 1) "+Н" = наличие гемолиза, „—Н“= отсутствие гемолиза;

2) данные о "рН" получены мной в Госуд. контрольной сальварсанной комиссии.

Испытаны были мной на антикомплементарные свойства (как видно из таблицы) две серии немецкого неосальварсана и пять серий советского производства, причем опыт мной повторялся несколько раз. Здесь же следует отметить, что колебания в антикомплементарных свойствах одних и тех же серий советского неосальварсана в разные дни постановок хотя и наблюдались, но не особенно резкие. Как видно в Таблица 1 у двух серий немецкого неосальварсана антикомплементарные свойства прекращаются в разведении 1:4000 (что в точности совпадает с данными Энсбруннера и Вендльбергера); что касается 5 наших серий, то антикомплементарные свойства их неодинаковы и колеблются от 1:8000 до 1:32 000; эту разницу в антикомплементарных свойствах отдельных серий нельзя, по-видимому, объяснить различной концентрацией водородных ионов (pH), так как никакой закономерности здесь нет¹⁾. Для своих дальнейших опытов я остановился на одной серии № 1628 (pH = 7,28), с которой и провел всю работу. Целый ряд опытов мной поставлен также с немецким нео, серии 1778910. Антикомплементарные свойства серии № 1628 прекращаются в разведении 1:8000, рабочие же дозы ее 1:8000 (½ подзадерживающей дозы) и 1:16 000 (½ последней растворяющей). Эти две дозы шли в дальнейших опытах. Кроме сальварсана был вытитрован и сернокислый никель, давший те же рабочие дозы, что и серия 1628 (что в точности также совпадает с данными Энсбруннера и Вендльбергера).

Что касается гемотоксических свойств, то все серии как немецкого неосальварсана, так и нашего в разведении 1:100, 1:200, оказалось, таковыми не обладают. Должен еще упомянуть, что в одном случае сальварсанной эритемы 9-го дня, с сывороткой б ой, была испытана та серия неосальварсана, которая вызвала вышеуказанную эритему (б-ная Ц., история болезни № 5055, сер. № 1852).

Техника постановки реакции связывания комплемента была обычной, применяемой в настоящее время согласно советской инструкции по постановке Р.Б.: в предварительном опыте титровался комплемент „per se“ и в присутствии рабочей дозы антигена, основной опыт шел с 10% надбавкой комплемента, в ряде случаев и без таковой надбавки. Несколько опытов я провел по методике Энсбруннера и Вендльбергера. В реакцию шли два антигена: немецкий и наш нео.

Первые опыты я поставил с консервированным комплементом, большую же часть—со свежим.

Всего под опытом прошло 60 больных.

С поздним сальварсанным дерматитом было 4 б-ных; все они поступили с общими тяжелыми явлениями (высокая температура, недостаточная деятельность сердца и почек), эозинофилия и резко выраженные воспалительные явления со стороны кожи (резкая гиперемия и отек, обильное мокнутие, местами импетигенизация); в первые 5—6 дней обычно не удавалось брать для исследования кровь по техническим соображениям (трудность нахождения вен локтевого сгиба); только после исчезновения острых воспалительных явлений производилось первое исследование крови и повторялось в дальнейшем несколько раз, как в фазе анергии, так и аллергии по отношению к кожным сальварсанным тестам. Тут же следует отметить, что метод пассивного переноса сальварсанной сверхчувствительности от этих б-ных на целый ряд других б-ных не удался нам ни разу ни по Прауснитц-Кюстнеру, ни по Урбах-Кенигштейну.

С универсальным ртутным дерматитом был один случай, с сальварсанным миелитом также один. С сальварсанной „эритемой 9-го дня“ Милиана было 14 случаев; эти эритемы обычно наступают после второго, третьего вливания неосальварсана в начале курса (в среднем на 9—12-й день после первого вливания), большей частью в виде коревидной или скарлатиноформенной сыпи и, по мнению Милиана, обусловлены биотропическим действием сальварсана на находящиеся в скрытом состоянии в организме микробы; не входя сейчас в объяснение патогенеза вышеуказанных эритем (это послужило темой отдельной моей работы совместно с Н. С. Смеловым, см. жур. „Сов. вест. вен. и дерм.", 1936, № 4) должен сказать, что известная часть этих эритем несомненно аллергического и токсического порядка; интракутанные пробы с сальварсаном при этих эритемах большей частью положительны; пассивный же перенос сальварсанной сверхчувствительности при них нам также не удался ни разу.

Затем следуют 14 б-ных с мягким шанкром и гонореей, которых мы сенсибилизировали к сальварсану (в процессе нашей основной работы по изучению кожной аллергии к сальварсану). Техника этой сенсибилизации заключается в том, что интракутанно впрыскивается 0,1 г 1°/о нео; обычно на 10—11-й день на месте введения нео наступает реакция—„Aüfflammung" в виде ярко-красной папулы; повторная инъекция неосальварсана дает

реакцию уже на следующий день (Фрей, Натан и Мунк). По нашим наблюдениям у лиц, не получавших нео, экспериментальную сенсибилизацию к нео удается получить приблизительно в 15% случаев, у получавших ранее нео—это не удается совершенно. Метод пассивного переноса не удался нам также у людей, сенсибилизированных экспериментально к нео. Согласно указаниям Энсбруннера и Вендльбергера, у некоторых лиц, сенсибилизированных мной к нео, кровь для исследования бралась через 45 минут после наложения кожных сальварсанных тестов.

Затем следует группа в 5 человек со свежим сифилисом, с хорошей переносимостью сальварсана, у которых взято по 8 проб крови (от каждого б-го): непосредственно до вливания неосальварсана и через 5, 10, 30, 60, 180, 360 минут и 24 часа после вливания с целью выяснить, нельзя ли реакцией связывания комплемента определить наличие сальварсана или комплемент связующих веществ к сальварсану в крови, если они там циркулируют. Наконец, в виде контроля была испытана кровь еще у 21 б-го со свежим и рецидивным сифилисом с хорошей переносимостью сальварсана.

Ни у одного из 60 больных мы ни разу не получили положительной реакции связывания комплемента с применением неосальварсана в качестве антигена. Следует так же отметить, что по просьбе доктора Н. С. Ведрова нами был вытитрован и испытан в качестве антигена в реакции связывания комплемента сернокислый никель в нескольких случаях профессионального никелевого дерматита также с отрицательным результатом.

Таким образом наши наблюдения с испытанием неосальварсана (советского и немецкого) в качестве антигена в реакции связывания комплемента при аллергии кожи к сальварсану (сальварсанные эритемы, дерматиты и при экспериментальной сенсибилизации) пока не подтверждают выводов работ Финкельштейна и Поройковой, с одной стороны, и Энсбруннера и Вендльбергера— с другой.

Полученные нами отрицательные результаты, однако, не могут поколебать учение об антигенной роли сальварсана. За антигенную роль сальварсана in vivo говорят прежде всего удачные опыты экспериментальной сенсибилизации к нему на людях и животных (Фрей, Натан и Мунк, Зульцбергер, Каплуни и Морейнис, Сезари и наши исследования); чтобы играть также роль антигена in vitro—сальварсан, по-видимому, нуждается в соответствующей обработке; последнее и должно послужить предметом дальнейших поисков.

¹ Попутно были вытитрованы отдельные серии русского нео, забракованные после биологического и клинического испытания; антикомплементарный титр их оказался одинаковым с сериями нео, годными к применению.