Experience in studying the rate of maturation of reticulocytes

Abstract

Until now, the clinic does not have methods for quantitative determination of bone marrow production of erythrocytes per unit of time in humans. Without such methods, many questions of the pathogenesis of some anemias remain unclear.

Full Text

До настоящего времени клиника не располагает методами количественного определения костномозговой продукции эритроцитов в единицу времени у человека. Без таких методов многие вопросы патогенеза некоторых анемий остаются неясными.
Хотя определенные данные об эритропоэзе и получаются при подсчете числа ретикулоцитов и количества эритроцитов в периферической крови, но хорошо известно, что один ретикулоцитоз, без учета характера заболевания, не в состоянии служить критерием для суждения о эритропоэтической функции костного мозга. Очень часто, несмотря на высокое относительное и абсолютное содержание ретикулоцитов в периферической крови, при отсутствии увеличенного кроворазрушения, улучшения не наступает и анемия может даже прогрессировать, хотя в большинстве случаев повышенное содержание ретикулоцитов при анемии рассматривается как благоприятный признак и выражение хорошей функции костного мозга. С учетом динамики ретикулоцитарной формулы можно точнее судить о функции костного мозга (Н. И. Корпашвили), но и этот момент не всегда правильно отражает эритропоэз. Необходимо учитывать, что количество ретикулоцитов в периферической крови представляет собой динамическое равновесие в результате двух постоянно происходящих процессов: поступление новых ретикулоцитов из костного мозга (увеличение приводит к повышению содержания ретикулоцитов) и созревание циркулирующих в крови ретикулоцитов в зрелые эритроциты (ускорение дает уменьшение количества ретикулоцитов). Время созревания ретикулоцитов, очевидно, различно в разных случаях. Этим можно объяснить, почему одно только количественное определение ретикулоцитов, без учета скорости созревания их не дает точного представления о эритропоэзе.
Укороченное время созревания при нелеченной пернициозной анемии нашли Бар и Ллойд. Низе считает, что время созревания ретикулоцитов может быть нарушено при патологических условиях, что он нашел при пернициозной анемии и болезни Брайта.
С целью изучения скорости созревания ретикулоцитов при различных анемиях с тем, чтобы в дальнейшем подойти к функциональной оценке эритропоэза по количеству ретикулоцитов в периферической крови, нами были проведены наблюдения.
Была поставлена задача разработать метод, удобный для повседневной клинической практики, обеспечивающий сравнимые результаты при исследовании крови больных с различным содержанием ретикулоцитов и разнообразными их формулами, чтобы с помощью этого метода определять скорость созревания ретикулоцитов при различных анемиях.
Считая, что скорость созревания ретикулоцитов вряд ли зависит только от свойств среды, так как при различных заболеваниях системы крови эритроциты претерпевают значительные морфологические изменения, мы изучали созревание ретикулоцитов в целом в крови больного, не выделяя специально изучение найденных некоторыми авторами факторов созревания ретикулоцитов, присутствующих, по их мнению, в крови и ускоряющих созревание ретикулоцитов (Плум, Якобсен).
Нами разработана следующая методика:
Палец и игла обрабатываются эфиром, и совершенно сухой иглой делается укол сухого же пальца, первая капля крови удаляется стряхиванием, а не вытиранием. Капилляром от прибора Панченкова, предварительно сполоснутым эфиром и высушенным, кровь берется дважды до метки 100 и помещается в маленькую парафинированную стерильную пробирку, где находится стерильный 3,8°/о раствор нейтрального лимоннокислого натрия, набранного тем же капилляром до метки 50. Пробирки обычно заготавливаются заранее и хранятся закрытыми корковыми или резиновыми пробками. Можно брать кровь и из вены и помещать в парафинированный флакон (удобно пользоваться флаконами из-под АКТГ), с соответствующим количеством лимоннокислого натрия.
Пробирка или флакон с кровью встряхиваются, из них смесителем для счета лейкоцитов набирается кровь до метки 1, вслед за тем 1°/о раствор бриллианткре- зилблау, приготовленный на физиологическом растворе, до метки 0,5 (кончик смесителя при взятии до инкубации также споласкивается эфиром). Все втягивается в ампулу смесителя и встряхивается, через 15—20 мин еще раз встряхивается, капля выпускается на стекло, и приготовляется мазок. Приготовлялось по 4 мазка до и после инкубации. Количество к формула ретикулоцитов определялись на 4000 эритроцитов, в каждом мазке изучалось по 1000 эритроцитов в разных участках мазка.
Инкубация проводилась в течение 14 часов при 37°С. После инкубации флакон тщательно встряхивался, перед взятием крови на ретикулоциты, для получения равномерного распределения ретикулоцитов в исследуемой крови.
По нашим наблюдениям, образование сгустков (хотя бы и небольших) в крови, подготовленной к инкубации, сильно искажает результат, поэтому такую кровь исследовать нельзя.
Посуда парафинируется, учитывая указания некоторых авторов на то, что ретикулоциты способны прилипать к стеклянным стенкам и друг к другу (Зейфарт, Сейп). В наших опытах явление слипания ретикулоцитов наблюдалось непосредственно после инкубации только дважды: у больной с пернициозной анемией (случай № 1) в одном из мазков встретился пласт из 14 расположенных рядом ретикулоцитов, и в другом мазке этой же больной оказались 3 склеившихся ретикулоцита; в другом случае у больного с инфарктом миокарда после инкубации в мазке наблюдался пласт из 15 ретикулоцитов, относившихся к более молодым формам (ретикулоциты II и III групп).
Вычисление скорости созревания ретикулоцитов производилось с помощью формулы, показывающей, какой процент ретикулоцитов IV и V групп от их общего числа до инкубации созревает у данного больного за 14 часов инкубации при 37°.
где М—количество ретикулоцитов до инкубации: N—количество ретикулоцитов после инкубации; ё—количество ретикулоцитов IV группы до инкубации;/ — количество ретикулоцитов V группы до инкубации. Таким образом, для исследования необходимы подсчет количества ретикулоцитов и вывод их формулы до инкубации и подсчет количества ретикулоцитов после инкубации.

Из таблицы видно, что скорость созревания ретикулоцитов, определенная вышеуказанным способом, значительно варьирует у разных больных. Скорость созревания не зависит от количества ретикулоцитов и их формулы. У больных с нелеченной пернициозной анемией обычно высокое созревание ретикулоцитов. Только у одного больного, с низкими показателями содержания гемоглобина и эритроцитов, где на секции была обнаружена инвазия широким лентецом (№ 4), созревание ретикулоцитов IV и V групп равнялось 30,3%. У больной М. (№ 2) кровь для исследования была взята уже после лечения, при хороших показателях гемоглобина и эритроцитов; в этом случае скорость созревания также была низкой. При леченной пернициозной анемии, когда больные уже поступали в стационар неоднократно (№№ 5 и 6) скорость созревания была невысокой. У больных с поздним хлорозом скорость созревания обнаружена невысокая, только у одной (№ 9) она оказалась большой. При острых постгеморрагических анемиях скорость созревания ретикулоцитов невысокая. Приблизительно такую же скорость дают острые лейкозы. Особый интерес представляют больные (№ 19, 20 и 21), у которых при явлениях уремии имелась выраженная анемия при достаточном и даже высоком содержании ретикулоцитов в периферической крови. Такое сочетание анемии с высоким содержанием ретикулоцитов без гемолитического синдрома непонятно без учета скорости созревания и, наоборот, может быть легко объяснено длительным созреванием ретикулоцитов при уремии и их накоплением в периферической крови, в то время как поступление их из костного мозга уменьшено. У исследованных больных была обнаружена очень низкая скорость созревания ретикулоцитов, при каких-либо других заболеваниях такая скорость созревания не встретилась ни разу.
ВЫВОДЫ:
1. Скорость созревания ретикулоцитов при анемиях различной этиологии варьирует в больших пределах.
2. Представление о скорости созревания ретикулоцитов и сравнимые результаты могут быть получены с помощью определения количества созревших за 14 часов инкубации ретикулоцитов IV и V групп.
3. Особенно низкая скорость созревания ретикулоцитов встречается при пониженной функции почек.