Фосфолипидный состав и функциональная активность тромбоцитов при хроническом лейкозе
- Авторы: Остроумова С.С.1
-
Учреждения:
- НИИ гематологии и переливания крови
- Выпуск: Том 61, № 4 (1980)
- Страницы: 35-38
- Тип: Статьи
- Статья получена: 25.03.2021
- Статья одобрена: 25.03.2021
- Статья опубликована: 31.07.1980
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/64160
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj64160
- ID: 64160
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Приведены данные литературы об участии фосфолипидов тромбоцитов в процессе гемостаза. Представлены результаты исследований фосфолипидного состава тромбоцитов у больных хроническим лейкозом. В тромбоцитах больных отмечено увеличение количества общих липидов и сфингомиелина, с чем, возможно, связано снижение коагуляционной и увеличение антикоагулянтной их активности.
Ключевые слова
Полный текст
Приведены данные литературы об участии фосфолипидов тромбоцитов в процессе гемостаза. Представлены результаты исследований фосфолипидного состава тромбоцитов у больных хроническим лейкозом. В тромбоцитах больных отмечено увеличение количества общих липидов и сфингомиелина, с чем, возможно, связано снижение коагуляционной и увеличение антикоагулянтной их активности.
Ключевые слова: фосфолипиды тромбоцитов.
1 таблица. Библиография: 23 названия.
При контакте с определенными структурами поврежденной сосудистой стенки тромбоциты подвергаются последовательным изменениям, которые завершаются образованием тромбоцитарного тромба. Кроме того, из тромбоцитов выделяется ряд активных веществ, необходимых для нормального осуществления процессов в сосудистом и коагуляционном звеньях гемостаза.
Плазматическая мембрана тромбоцита сходна по строению с мембранами других клеток. Универсальными компонентами этих клеточных структур являются фосфолипиды, бимолекулярный слой которых составляет основу биологических мембран. Среди фосфолипидов тромбоцитарных мембран преобладают фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилэтаноламин (ФЭ), фосфатидилсерин (ФС), сфингомиелин (СМ.) и фосфатидилинозит (ФИ). Все мембраны включают наряду с липидными структурами различные белки, причем в некоторых клетках белка содержится больше, чем липидов. В большинстве клеточных мембран белки расположены равномерно, в то время как для тромбоцитов установлено их асимметричное распределение. Только немногие из этих белков, включая три главных гликопротеида, находятся на наружной поверхности клетки, остальные локализованы внутри мембраны и на цитоплазматической ее стороне [23].
Клеточные мембраны не являются статичными структурами. Все их компоненты обладают определенной степенью подвижности [21], что делает возможным осуществление таких важных функций, как транспорт метаболитов, специфическая связь гормонов и вводимых лекарственных препаратов, участие в реакции антиген — антитело. Главная роль в этих процессах принадлежит мембранным белкам. Однако и фосфолипидные компоненты не являются только структурными единицами, многие метаболические процессы протекают с их непосредственным участием. Так, например, наличие определенных фосфолипидов необходимо для функционирования таких важнейших мембранных ферментов, как АТФ-аза, аденилатциклаза, которые играют значительную роль в осуществлении физиологической активности тромбоцитов. Установлено, что для активации АТФ-азы в некоторых клетках требуется ФС и ФИ [15], для активации аденилатциклазы необходимы фосфатидилсерин и фосфатидилинозит [16]. Можно предположить, что и в тромбоцитах активация этих ферментов связана с фосфолипидами мембран. Шик и Ю (1974) изучали значение фосфолипидов мембраны на основании определения последствий селективной деструкции тромбоцитарной мембраны под воздействием очищенной фосфолипазы С, гидролизующей фосфолипиды (преимущественно ФХ и в меньшей степени СМ). Молекулы фосфолипазы имеют значительную величину и не могут проходить через поверхность интактных клеток. Следовательно, гидролизу подвергаются фосфолипиды, локализованные на поверхности тромбоцитов. Исследования показали, что минимальный гидролиз (5% фосфолипидов) ведет к стимулированию секреторных реакций, при этом из кровяных пластинок выделяются серотонин, АДФ, фактор 4. Сопоставление действия фосфолипазы и такого индуцера выделения, как тромбин, показало, что оно одинаково как по скорости, так и по выделяемым веществам. Ультраструктурные исследования тромбоцитов после осуществление тромбопластинообразования.
Свойства и природа фактора 3 тромбоцитов являются объектом изучения уже на протяжении ряда лет [5, 9]. Было установлено, что фактор 3 представляет собой липопротеид, содержащий ряд фосфолипидов и белковый компонент. Смесь фосфолипидов была разделена на пять основных фракций: ФХ — 37,8%, ФЭ— 31,5%, СМ — 15,1%, ФС — 9%, ФИ — 3,6% [6].
Изучение тромбопластических свойств изолированных фракций фосфолипидов обнаружило их явное различие. Наибольшей активностью обладали ФС, ФЭ и ФИ как отдельно, так и в различных соотношениях, в то время как ФХ и СМ оставались неактивными. Подобная разница указанных свойств этих соединений, возможно, связана с тем, что фосфолипидные классы отличаются друг от друга зарядом полярных групп молекул. В опытах по определению свертывающей способности мицелл из синтетических фосфолипидов было установлено, что при увеличении отрицательного заряда мицелл, который складывается из зарядов составляющих их молекул, увеличивается и их коагуляционная способность [13]. Как известно, наибольший отрицательный заряд несут ФС и ФИ. Кроме того, существенный вклад в суммарный отрицательный заряд в пределах физиологических значений pH вносит и ФЭ. Данные Маркус и соавт. (1969) позволили установить зависимость коагуляционной активности фосфолипидов от состава остатков жирнокислотных цепей, входящих в них. Как оказалось, ФХ и СМ, обладающие малой коагуляционной активностью, содержат в основном насыщенные жирные кислоты и ненасыщенные с небольшим количеством двойных связей, в то время как в составе ФС, ФЭ и ФИ, т. е. фосфолипидов, которые обладают высокой коагуляционной активностью, обнаружены, наряду с насыщенными жирными кислотами, углеводородные цепи со значительным количеством ненасыщенных связей.
Активность тромбоцитов в большой мере зависит от характера распределения фосфолипидов в их мембране. Большая часть тромбопластических нехолиновых фосфолипидов находится на, внутренней поверхности клеточной мембраны и не имеет прямого контакта с плазмой, тогда как ФХ и СМ локализуются преимущественно на наружной поверхности интактных тромбоцитов [19]. Как установили Кохен и соавт. (1965), ФХ и СМ в различном соотношении друг с другом обладают антикоагулянтными свойствами, что может способствовать поддержанию тромбоцитов в интактном состоянии. Во время развития процесса коагуляции поверхностные фосфолипиды лишаются этих свойств, вероятно, вследствие гидролиза. Реакция гидролиза способствует доступности фосфолипидов, лежащих на внутренней поверхности мембраны и обладающих тромбопластическими свойствами [20].
Фосфооипиды фактора 3 связаны не только с плазматической мембраной, входя в состав ее структуры, но и с а-гранулами тромбоцитов [22]. В настоящее время не установлено, какая активность имеет большее значение — связанная с поверхностной мембраной или с а-гранулами. По данным Брокмана и соавт. (1976), тромбопластическая активность фракции мембран, выделенных ультрацентрифугированием, равна активности фракции гранул, однако авторы считают, что фактор 3, заключенный в а-гранулах имеет большее значение, так как интенсивная секреция их содержимого начинается быстро в ответ на экзогенные стимулы. Активность же, связанная с мембранами, возможно, делается доступной на более поздних стадиях тромбоцитарных изменений.
Дефицит фактора 3 при различных патологических состояниях обусловливает развитие серьезных нарушений процесса гемостаза. Это может быть следствием изменений, вызванных как снижением доступности фактора 3, так и нарушением его фосфолипидного состава. Фосфолипиды, как указывалось, играют значительную роль в биологии клеточных мембран, что не может не отразиться и на гемостатическом процессе В литературе имеются немногочисленные сведения об изменении фосфолипидного состава тромбоцитов при некоторых патологических состояниях. Карака и Стефанини (1965), изучавшие кровяные пластинки больных тромбоцитопатией при хронических паренхиматозных заболеваниях печени, уремии, хронической миелоидной метаплазии, макроцитарной анемии, выявили снижение содержания общих липидов, общих фосфолипидов и относительно низкое содержание ФС и ФХ; эти изменения сочетались со снижением коагуляционных свойств тромбоцитов.
Исследуя снижение активности фактора 3 при врожденной макроцитарной тромбопластической тромбоцитопении, Хаанен и сотр. (1973) установили, что у больных данной группы нарушаются реакции выделения вследствие первичных изменений свойств мембраны. Последняя оказалась более стабильной и менее чувствительной к внешним стимулам в результате изменения липидных компонентов тромбоцитов, что выражалось в снижении ФЭ, увеличении дифосфатидилглицерола, увеличении содержания насыщенных жирных кислот в липидах.
Нами было проведено исследование фосфолипидного состава тромбоцитов у 14 больных, страдающих хроническими лимфо- и миелолейкозами, с целью выяснить связи фосфолипидного состава тромбоцитов с имеющимися нарушениями тромбоцитарных свойств, так как при этой форме патологии закономерно и значительно нарушается функция тромбоцитов, в частности снижается коагуляционная активность тромбоцитов и повышаются их антикоагулянтные свойства [2, 3].
Для экстракции липидов тромбоцитов был использован широко применяемый метод Фолча [8]. Перед экстракцией проводили выделение тромбоцитов. Для этого богатую тромбоцитами плазму как доноров, так и больных центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин, предварительно определив общее количество тромбоцитов, содержащихся в ней. Полученный осадок тромбоцитов для разрушения их структуры подвергали трехкратному замораживанию при температуре —20° С с последующим немедленным размораживанием. Из полученной смеси экстрагировали липиды и высушивали. Количество общих липидов определяли взвешиванием сухого липидного экстракта. Для разделения фосфолипидов использовали метод тонкослойной хроматографии в системе растворителей — хлороформ, метанол, 7 н. аммиак (65:36:5). Количественное определение фосфора в отдельных фосфолипидных фракциях, как и определение общего липидного фосфора, проводили по Бартлету (1959).
Как видно из приводимой ниже таблицы, содержание общих липидов при расчете на стандартное число тромбоцитов в норме составило в среднем 1,47 мг/109 тромбоцитов, а при лейкозе оно достигало 2,7 мг/109 тромбоцитов. Количество общих фосфолипидный состав тромбоцитов в норме и при заболевании лейкозом липидов стандартного числа тромбоцитов больных лейкозом существенно не отличалось от этого же показателя здоровых людей.
Показатели | Норма | Лейкоз | Р | |
n = 15 | n = 14 | |||
Общие липиды, мг/109 тромбоцитов | 1,47+0,08 | 2,70+0,18 | <0,001 | |
Общие фосфолипиды, МКГ/109 тромбоцитов | 21,28+0,93 | 21,92+0,93 | >0,05 | |
0/ | ЛФХ | 10±1,2 | 12+1,5 | >0,2 |
70 | СМ | 16±1,4 | 23,5+1,5 | <0,001 |
к общему | ФХ | 52±5,0 | 45,5±5,3 | >0,5 |
липидному | ФЭ | 15±2,8 | 17+1,9 | >0,5 |
фосфору | ФК | 7+0,5 | 2+0,7 | >0,5 |
При дальнейшем разделении смеси фосфолипидов тромбоцитов как здоровых людей, так и больных лейкозом были выделены 5 фосфолипидных фракций: лизофосфатидилхолин (ЛФХ), фосфорная кислота (ФК), СМ, ФЭ, ФХ. Количественное сопоставление показало, что содержание ЛФХ, ФХ, ФЭ) и ФК в тромбоцитах больных достоверно не отличалось от их уровня у здоровых, в то время как количество СМ при лейкозе значительно увеличилось (Р<0,001). По существующим данным СМ не обладает свертывающей активностью [9, 17]. Напротив, имеются указания, что этот фосфолипид проявляет антикоагулянтную активность [7]. Следовательно, можно предположить, что увеличение процентного содержания СМ в общих фосфолипидах тромбоцитов, как неактивного компонента, может снижать активность фактора 3 тромбоцитов. С увеличением количества СМ также могут быть связаны и антикоагулянтные свойства кровяных пластинок, наблюдаемые при лейкозе.
Таким образом, исследование липидного состава тромбоцитов у больных хроническим лейкозом выявило определенные изменения, которые могут быть одной из причин, обусловливающих нарушение функции тромбоцитов при данной патологии.
Анализ имеющихся немногочисленных исследований о значении фосфолипидов для функциональной активности тромбоцитов, а также полученные нами данные указывают на целесообразность углубленного исследования фосфолипидного состава кровяных пластинок, прежде всего при тех видах патологии, где наблюдается значительное нарушение функции тромбоцитов, в частности снижение их тромбопластической активности.
Об авторах
С. С. Остроумова
НИИ гематологии и переливания крови
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Лаборатория свертывания крови
РоссияСписок литературы
- Зубаиров Д. М. Биохимия свертывания крови. М., Медицина, 1978,
- Матвеенко Л. А. Изучение морфологических и функциональных свойств тромбоцитов при различных формах лейкозов. Автореф. канд. дисс., Л., 1964
- Шитикова А. С., Иапаян Л. И. Пробл. гематол., 1970, 10.
- Bartlett G. J. Biol. Chem., 1959, 234, 3.
- Barton P. G. In: Platelet, drugs, thromb. Basel., 1975.
- Broekman M. Y., Nandin R. I., Derksin A., Cohen P. Blood, 1976, 47, 6.
- Cohen J., Reed C. F., Troup S. B. Thromb. Diath. Haemorrh., 1965, 13, 3.
- Folch J., Lees M. J. biol. Chem., 1957, 266, 1.
- Gautheron P., Dumont E„ Renand S. Thromb. Diath. Haemorrh., 1974, 32. 2/3
- Haanen C„ Wesse1s H., Badenhuysen H. Nouv. Rev. Franc. Hematol., 1973, 13, 4.
- Hemker H. C., Swart A. C. W. Exc. Med. 1974, Int. Congr. Ser., 336.
- Holmsen H. Trombos. Haemostas., 1977, 38, 4.
- Hovmand J. L., Brons K., Gornish J. Thromb. Diath. Haemorrh., 1969. 21. 3.
- Karaka M., Stefanini M. Am. J. Clin. Path., 1967, 48, 3.
- Kimelberg H. K. Biochim. biophys. Acta. 1972, 282, 77.
- Levey G. S., Klein J. J. clin. Invest., 1972, 51, 3.
- Marcus T. J. Ibid., 1958, 37, 7.
- Marcus A. J., Ulman H. L., Sofier L. B. J. Lipid Res., 1969, 10, 2.
- Schick P. K, Y u B. P. Ibid., 1974, 54, 5
- Schick P. K., Kurica K, Chacko G. K. Fed. Proc., 1975, 34, 1..
- Singer S. J., Nicholson G. Science, 1972, 175, 4023.
- Webber A. J., Johnson S. A. Am. J. Path., 1970, 60, 1.
- Weiss H. J. New Engl. J. Med., 1975, 293, 11.