Сравнительное изучение свойств тканевых активаторов плазминогена человека

Аннотация

Патологическое повышение фибринолитической активности крови лежит в основе многих тяжелых геморрагических расстройств, особенно частых в хирургической, акушерской практике и клинике инфекционных заболеваний.

Полный текст

Патологическое повышение фибринолитической активности крови лежит в основе многих тяжелых геморрагических расстройств, особенно частых в хирургической, акушерской практике и клинике инфекционных заболеваний. Обусловливается фибри­нолитическая активность наличием в крови плазмина, большая часть которого обычно находится в виде неактивного предшественника — плазминогена. Активация плазми­ногена катализируется плазменным и тканевым активаторами или урокиназой, а также стрептокиназой при их применении с лечебной целью. Плазменный и тканевой актива­торы плазминогена изучены менее других. Тканевой активатор содержится в боль­шинстве тканей, главным образом в лизосомах клеток и в микросомах эндотелиальных клеток стенки кровеносных сосудов [5]. Некоторые исследователи полагают, что поня­тие «тканевой активатор» является собирательным для нескольких веществ [8] и что в лизосомной суспензии могут существовать две формы фермента, которые можно считать энзимами [2]. В настоящей работе предпринята попытка идентифицировать и выявить изоферменты активаторов плазминогена из ряда тканей человека и мочи.

Материал для исследования был взят у 10 погибших в возрасте от 20 до 70 лет людей. У 5 из них смерть наступила от асфиксии, у 2 — от острой кровопотери, у остальных — от травмы черепа, острой сердечно-сосудистой недостаточности и алко­гольной интоксикации. Ткани брали не позднее 24 час. с момента смерти. Экстракцию активаторов проводили сразу или после хранения при —25°, методом Аструпа и Альбрехтсена [5]. Оптимальное значение концентрации водородных ионов, необхо­димых для взаимодействия активатора с плазминогеном, определяли методом ради­альной диффузии фибрин-плазминоген-агаровых [8] и гретых фибриновых пластин [6], приготовленных на имидазоловом буфере (pH 5,0 — 7,0) и Трис (pH 7,5 — 10,0) 0,05 М буферах. Гель-фильтрацию проводили на колонке 1,4х38 см с сефадексом G-100. Для элюции использовали 0,05 М фосфатный буфер, содержащий 1,5 М КCL, pH 5,0. Общий объем геля — 58,4 см³, внешний объем колонки—16 см³. Фракции собирали автоматическим коллектором ХКОВ-1. В них анализировали концентрацию белка по поглощению при 280 ммк и активность активаторов. При определении моле­кулярного веса методом Эндрюса [3] для калибрования колонки пользовались препа­ратами сахарозы, рибонуклеазы, бычьего альбумина и голубого декстрана.

Были подвергнуты исследованию свойства активаторов, выделенных из ткани легкого, мозга, сердца, стенки аорты, лимфатических желез, надпочечника, простаты, пери-, мио- и эндометрия. Кроме того, мы изучали активаторы тканей, служащих путями выделения урокиназы: почки, лоханок, мочеточников, мочевого пузыря.

Одновременно на фибрин-агаровые гретые и негретые пластины, приготовленные с интервалом 0,5 pH, от pH 5,0 до 10,0 наносили экстракты из перечисленных выше тканей. Максимальная активность всех активаторов отмечалась при pH 7,0—7,5, сохра­нялась высокой при pH 8,0—8,5 и заметно уменьшалась при pH 6,5 и 9,0, а при pH 5,5 и 10,0 не определялась вовсе. Экстракты тканей не обладали собственной фибрино­литической активностью, не содержали плазмина и плазминогена. Различия актива­торов из разных тканей и урокиназы в оптимуме pH не было обнаружено.

При гель-фильтрации активаторов плазминогена из различных тканей (см. рис.) ферменты элюировались после основного белкового пика; это свидетельствует о том,

что на долю активаторов плазминогена приходится лишь небольшая часть белков», содержащихся в экстрактах. Ориентировочное определение молекулярных весов тка­невых активаторов из различных тканей не выявило их различия. Все они имели молекулярный вес около 55000. Молекулярный вес урокиназы соответствовал прибли­зительно 30000, что согласуется с данными, полученными М. Г. Асадуллиным [1].

Несмотря на неодинаковое содержание активаторов в различных тканях, при сравнительном анализе хроматограмм было установлено, что пики активности в ходе элюции совпадали. Этот результат не дает оснований, так же как и исследование оптимума pH активации плазминогена под действием тканевых активаторов, говорить о существовании изоферментов в различных тканях человеческого организма. Это не означает, что в тканях имеется лишь один фермент, катализирующий превращение- плазминогена в плазмин. Учитывая относительно невысокую чувствительность исполь­зованного нами метода выявления активаторов плазминогена, нельзя отрицать, что тканевые активаторы плазминогена, обладающие невысокой активностью, остаются не выявленными, тем не менее о их существовании в настоящее время можно лишь предполагать.