Тест трансформации лимфоцитов кровив патологии и клинике

Аннотация

В начале этого столетия известный гистолог А. А. Максимов на основании многолетних исследований морфологии лимфоидной ткани пришел к заключению, что малый лимфоцит может изменять свою функцию и морфологию при воздействии ряда факторов. Был сделан основной вывод, что лимфоцит — клетка полипотентная. Такое положение нашло блестящее подтверждение в последующих опытах по искусственному культивированию инвитро лимфоцитов периферической крови, а также фрагментов лимфатических узлов селезенки, тимуса и других органов [17].

Полный текст

Впервые культивирование лейкоцитов периферической крови человека вне- организма было проведено русскими учеными [1]. В культурах клеток крови с вирулентной микобактерией туберкулеза они наблюдали превращение лимфоцитов в полибласты (макрофаги), эпителиоидные и гигантские клетки. Больше того, описано было образование бугорков в культурах клеток, что можно рассматривать с современных позиций как воспроизведение инвитро реакции гиперчувствительности замедленного типа. Обзор этих работ был напечатан в Казанском мед. журнале в 1926 г. [7].

В последние годы ведутся интенсивные исследования по культивированию лимфоидной и кроветворной ткани, клеток периферической крови и лимфы в целях изучения лимфо- и гемопоэза, иммунитета и иммунологических реакций [14]. Культура клеток периферической крови явилась наиболее удобной моделью в раскрытии роли циркулирующих лимфоцитов в иммунитете и иммунологических реакциях у здорового больного человека [19].

Хунгефорд и соавт. (1959), применив в модификации метод Ригас, Осгуд (1955),. провели культивирование клеток крови человека в питательной среде 199 с введением меченного тритием тимидина. Лейкоциты крови они культивировали с солевым экстрактом фасоли, который был назван фитогемагглютинином (ФГА) за способность вызывать агглютинацию эритроцитов и лейкоцитов. Установили, что ФГА обладает митогенным действием на клетки крови. Тимидиновая метка появлялась в лимфоцитах. Это верный признак повышенного синтеза ДНК в клетках, что предшествует и сопровождает обычно процессы трансформации и деления клеток.

Ноуелл (1960), культивируя с ФГА клетки крови человека, открыл превращение малых лимфоцитов в крупные клетки с базофильной цитоплазмой и большим ядром, с рыхлой хроматиновой структурой и несколькими ядрышками. Эти клетки были названы пиронинофильными за их избирательное окрашивание этой краской. Способность лимфоцитов периферической крови человека трансформироваться при воздействии ФГА в пиронинофильную клетку, иначе — клетку типа бласта, и стало основой реакции бласттрансформации, или теста трансформации лимфоцитов (ТТЛ). Само воздействие получило обозначение стимуляции, или активации. Тест лимфоцитной бласттрансформации приобрел важное значение в иммунологических исследованиях при изучении внутри- и межвидовых изоантигенных отношений, при гиперчувствительности замедленного типа, трансплантационном иммунитете и некоторых других процессах при действии чужеродных и собственных антигенов на организм.

В настоящее время открыт ряд веществ, способных, подобно ФГА, вызывать трансформацию и митотическое деление клеток в культуре инвитро.

Принято выделять неспецифические и специфические стимуляторы [36]. В первую группу входят ФГА, экстракты из растений типа лаконоса, стрептолизин S, стафилококковый а-токсин, антилейкоцитарные антитела, античеловеческий гаммаглобулин, антигенглобулиновые комплексы. Для них характерна стимуляция почти всех лимфоцитов крови здоровых людей: на 3-й день культивирования до 90% лимфоцитов превращается в клетки типа бластов [4, 19]. К группе специфических стимуляторов относятся продукты бактериальных клеток, вирусов, лекарственные препараты, образующиеся в организме аутоантигены, аллогенные клетки и другие. Все они, имея, по существу, характер антигенов, способны к сенсибилизации и несут отчетливый признак иммунной специфичности.

Антигены, однако, способны стимулировать образование клеток типа бластов лишь в том случае, если лимфоциты крови были взяты от людей, имевших в прошлом контакт с этими антигенами. В противоположность ФГА специфические стимуляторы способны вызвать на 5—6-й день культивирования трансформацию небольшой части лимфоцитов крови (5—40%) людей с повышенной чувствительностью [36]. ФГА и чужеродные антигены в культурах клеток крови вызывают образование бластов, морфологически весьма сходных между собой, хотя характер действия их различен [4, 17]. Трансформация и деление клеток в культурах инвитро зависят от дозы применяемых стимуляторов; последняя должна находиться в зоне оптимального действия этих веществ [ 16, 19].

Было установлено, что ФГА в культурах клеток крови ряда больных, страдающих заболеваниями, при которых резко снижена реакция гиперчувствительности замедленного типа, вызывают слабую трансформацию лимфоцитов. Это обнаружено у больных хроническим лимфолейкозом [5, 51], лимфогранулематозом и болезнью Ходжкина [57]. Подобное было отмечено при непрерывно текущей и периодической шизофрении [10]. Однако у больных с нелеченной пернициозной и железодефицитной мегалобластической анемией [28], острым ревматизмом [35], системной красной волчанкой [12] и др. реакция в культурах лимфоцитов с ФГА была сходна с трансформацией, наблюдаемой у здоровых людей.

Эти находки с несомненностью позволяют сделать заключение о неодинаковой реактивности лимфоцитов периферической крови людей при различных болезненных состояниях, что может иметь определенное значение для понимания сущности болезни и способов лечения.

В ряде работ показано, что реакция бласттрансформации может служить тестом для диагностики лекарственной [30, 33], алиментарной [20] и бактериальной аллергии [50].

Серия исследований [31, 32] была направлена на изучение ТТЛ у лиц с клиническими и иммунологическими проявлениями немедленной (астма и др.) и замедленной (контактные дерматиты) аллергии к пенициллину, стрептомицину, аспирину и другим медикаментам. При этом констатирована бласттрансформация в культурах клеток крови всех 30 больных с повышенной чувствительностью к пенициллину независимо от типа аллергической реакции. Это позволило авторам придать ТТЛ особую диагностическую ценность. Эта реакция была положительной у 11 и отрицательной у 9 из 20 человек с аллергией к аспирину, причем все 9 с негативной реакцией получали глюкокортикоиды. Известно, что глюкокортикоиды угнетают трансформацию лимфоцитов, в силу чего ТТЛ может служить показателем эффективности иммунодепрессивной терапии [ 2, 13, 19, 25].

Имеются работы, в которых подчеркивается, что ТТЛ выпадает положительной чаще у людей с выраженной внутрикожной пробой на пенициллин, хотя корреляция между этими двумя тестами может и отсутствовать [30].

Бластообразование в культуре клеток было обнаружено у людей с гиперчувствительностью к ампициллину [53], сульфонамидам [21], цинку [39], травяной пыльце [43], молоку и молочным продуктам [20] и др.

Ряд авторов указывает на возможность успешного использования ТТЛ при инфекционно-аллергических заболеваниях рото-носоглотки не только в целях диагностики, но и для контроля за лечением [6, 9].

Отмечено, что при некоторых аутоиммунных заболеваниях трансформация лимфоцитов проявлялась на тканевые антигены [15]. Имеются наблюдения по трансформации лимфоцитов в культуре клеток крови больных ревматизмом сердца на гиалуронидазу или экстракт из сердечной мышцы. У больных с иеспецифическим язвенным колитом экстракты из кишечника и бактерий типа коли вызывают слабую трансформацию лимфоцитов, не имеющую достоверной разницы с показателями, полученными на эти антигены у здоровых доноров [34]. Поэтому значение гиперчувотвителыюсти замедленного типа в патологии язвенного колита в данной работе ставится под сомнение.

Значительное число работ посвящено изучению ТТЛ при туберкулезе. Показано, что у людей, реагирующих положительно на внутрикожное введение туберкулина, наблюдается бластообразование в культурах клеток крови при воздействии туберкулином или очищенным белковым дериватом его (ППД) [4, 24]. Отмечается определенная корреляция между этими двумя тестами. У больных туберкулезом трансформация лимфоцитов инвитро находится в зависимости от фазы болезни [52].

Некоторые исследователи пришли к выводу, что трансформация лимфоцитов в ФГА культурах повышается с увеличением абсолютного количества лимфоцитов периферической крови [16] и уменьшается с окончанием антибиотикотерапии [И].

Таким образом, большинство авторов сходится во мнении, что бластообразование в культурах клеток крови больных, находящихся в активной фазе туберкулеза, угнетено. Подобное явление наблюдалось и у больных с тяжелым течением гистоплазмоза [44] и хроническим мукокожным кандидозом [26] ).

Мы [6] установили, что при брюшном тифе трансформация лимфоцитов в стимулированных брюшнотифозными антигенами культурах клеток крови больных находится в прямой зависимости от периода и тяжести инфекционного процесса. Четко вырисовывалась тенденция бластообразования к повышению по мере выздоровления больных. Таким образом, наши наблюдения совпадают с данными тех авторов, которые отмечали угнетение трансформации лимфоцитов периферической крови в остром периоде инфекционных заболеваний.

В наших исследованиях ТТЛ был использован для изучения процесса формирования клеточного иммунитета у больных брюшным тифом. Однако этот метод имеет также диагностическое значение.

ТТЛ позволяет выявить наличие иммунно «компетентных» клеток (лимфоцитов) после перенесения инфекции. Специфическая стимуляция вызывает трансформацию лимфоцитов в культурах инвитро у переболевших коклюшем [42], брюшным тифом [3], сывороточным гепатитом [40], у волонтеров в течение 2 лет после заражения малярией и проведения у них специфического лечения [38].

Интересные данные были получены также в культурах инвитро у больных некоторыми вирусными заболеваниями, при которых в периферической крови появляются атипичные мононуклеары (инфекционный мононуклеоз, вирусный гепатит и др.).

В некоторых исследованиях установлено, что если инкубировать лимфоциты больных инфекционным мононуклеозом с уридидином-Н³, то количество меченой РНК становится в 10 раз больше, чем в нормальных лимфоцитах [56]. Вместе с тем было отмечено явное торможение синтеза РНК в клетках этих больных при воздействии ФГА, что обусловливалось, видимо, токсичностью ФГА для бластных клеток больных инфекционным мононуклеозом.

Подобную же картину наблюдал ряд авторов при вирусном гепатите.

Нет установившегося общего мнения о феномене трансформации лимфоцитов в культурах инвитро на печеночный антиген у больных гепатитом и циррозом печени. Полученные результаты разноречивы и окончательному обсуждению, по всей вероятности, не подлежат [13, 49]. Однако у переболевших сывороточным гепатитом, в отличие от больных циррозом печени, можно наблюдать трансформированные лимфоциты, если в культуру клеток вводить австралийский антиген, который по современным представлениям ассоциируется с сывороточным гепатитом [40]. По данным этой работы, ТТЛ считается специфическим и перспективным в диагностике сывороточного гепатита.

Общеизвестно, что дети, чувствительные к туберкулину, заболевая корью, временно перестают реагировать на внутрикожное введение этого препарата. Применение ТТЛ показало, что лимфоциты крови этих детей не способны при воздействии туберкулином или ППД превращаться в клетки типа бластов [58, 59].

В литературе появились сообщения, что вирус коревой краснухи, подобно вирусу кори, тормозит бластообразование в культурах инвитро. Следовательно, при некоторых вирусных заболеваниях наблюдается угнетение иммунореактивности лимфоцитов периферической крови человека.

ТТЛ нашел широкое применение в изучении вакцинального процесса при различных прививках, проводимых у здоровых и больных людей. Было установлено, что у лиц, привитых той или иной вакциной, происходит трансформация лимфоцитов в культурах инвитро при воздействии этой же вакциной. Бластообразование отмечено у вакцинированных против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита [22, 25, 29], тифо-паратифозной инфекции [27, 48, 54], сыпного тифа [23], натуральной оспы [45], коревой краснухи [46].

Мы наблюдали высокую степень бласттрансформации в стимулированных брюшнотифозными антигенами культурах клеток крови людей, систематически вакцинируемых тифо-паратифозной вакциной в течение 2 последних лет. Исследования про- водили через 2—4 педели после последней прививки. Степень трансформации лимфоцитов у них оказалась на уровне реакции, установленной у выздоравливающих брюшнотифозных больных.

С помощью ТТЛ были исследованы взаимоотношения между лимфоцитами крови и иммунитетом в неонатальном периоде [41]. Взрослых и детей в возрасте 2 месяцев иммунизировали однократно тифо-паратифозной вакциной. ТТЛ ставили на 2 и 6-й неделе после вакцинации. Было установлено, что в стимулированных тифо-паратифозной вакциной культурах клеток крови детей бласттрансформация выше, чем у взрослых на 2-й и аналогична реакции у взрослых на 6-й неделе после вакцинации. Эти наблюдения позволили авторам полагать, что иммунокомпетентная система организма новорожденных готова к ответу на иммунологическую стимуляцию.

В заключение следует отметить, что ТТЛ не стоит особняком от многих иммунологических реакций, широко принятых в клинико-лабораторной практике. В инфекционной патологии он сопоставляется, как правило, с серологическими реакциями, в аллергологической клинике — с кожными реакциями, лейкоцитолизом, неспецифической гемагглютинацией и др. Коррелятивные закономерности всех этих реакций и ТТЛ пока остаются неясными, хотя есть основания думать, что все они являются звеньями общей цепи неспецифических и специфических проявлений при различных заболеваниях. Характерной чертой современного этапа изучения этого феномена в болезни является особое внимание, которое уделяется клеточному звену общего иммунного ответа как в здоровье, так и в болезни.