Некоторые простые способы окраски гистологических срезов

Аннотация

В больничных и других морфологических лабораториях повседневно используются разные способы окраски гистологических срезов, простые и экономные варианты некоторых из них мы предлагаем в этой статье.

Полный текст

1. Простая окраска раствором квасцового гематоксилина.

Приготовление раствора. На 100 мл отфильтрованного 5% раствора калийных квасцов берется 0,1 гематоксилина, после полного растворения которого (без подогрева) для ускорения созревания краски добавляется одна гранула (не более просяного зерна) йодоватокислого калия —КЮз, а затем 0,1 тимола.

Окрашивание срезов (целлоидиновых, депарафинированных, замороженных). Срезы хорошо промываются дистиллированной водой. Окраска гематоксилином — 5 мин (свежим) или 3 мин (созревшим). Избыток краски сливается обратно для повторного использования. Промывка в 2 порциях водопроводной воды, а затем при надобности срезы докрашиваются эозином и доводятся до препарата. Ядра клеток получаются лиловыми.

Этим же гематоксилином (вместо кармина) хорошо докрашиваются срезы, в которых выявлялся гемосидерин по Перлсу, а также после окраски липидов и липопротеидов растворами красных суданов (см. нашу работу, Арх. патол., 1963, 2).

2. Автоматическая окраска срезов железным гематоксилином и пикрофуксином.

Приготовление растворов (вместо используемых по способу Ван-Гизона):

— готовится 0,4%. раствор гематоксилина на 96° спирте (вместо 1% раствора на 96° спирте по Вейгерту);

-готовится второй раствор Вейгерта: полуторахлористого железа — 4 мл, соляной кислоты — 1 мл, дистиллированной воды — 95 мл (см. у Г. А. Меркулова, 1961);

-готовится пикрофуксиновая смесь из 25 мл 1% водного раствора пикриновой кислоты, ,25 мл 0,1% водного раствора кислого фуксина и 50 мл дистиллированной воды.

Окрашивание срезов:

- срезы хорошо промываются дистиллированной водой;

- перед окраской спиртовым гематоксилином срезы пропитываются 5 минут 96° спиртом;

- готовится свежий рабочий раствор железного гематоксилина из расчета: на 1 мл 0,4% спиртового раствора гематоксилина прибавляются 1—2 капли второго раствора Вейгерта. Смесь должна иметь темно-фиолетовый цвет;

- окраска срезов гематоксилином 5 мин;

- окрашенные срезы хорошо промываются в 2 порциях дистиллированной воды (не водопроводной!);

- докрашивание срезов пикрофуксиновой смесью 5 мин;

- после этого срезы водой и спиртом не промываются! Избыток пикрофуксина удаляется салфеткой, а остаток удаляется отжиманием среза сухой фильтровальной бумагой;

- отжатые срезы обезвоживаются и полностью просветляются в карбол-толуоле (или карбол-ксилоле);

- промывка срезов чистым толуолом (ксилолом), заключение в бальзам.

Для этой окраски замороженные, парафиновые и целлоидиновые срезы целесообразно до окраски приклеивать на предметные стекла (см. у Г. А. Меркулова, 1961). Целлоидиновые ненаклеенные срезы следует расправлять в спирте и воде до окраски гематоксилином и после, но не после окраски пикрофуксином; лучше всего для этих срезов использовать тонкие и гибкие шпадели.

Описанная железо-гематоксилиновая и пикрофуксиновая окраска проста и экономна. Она еще и автоматична, так как исключает дифференцировку окрашенных срезов водой и спиртом. Нами исключен этот самый трудный этап вообще довольно капризной окраски по Ван-Гизону (Г. А. Меркулов, 1961) потому, что мы стремились сохранить цвета и оттенки окраски срезов такими, как это получается во время самой окраски, чем достигается определенный гистохимический эффект всей окраски (гематоксилиновая базофилия ядер и цитоплазмы, фуксинофилия коллагеновых волокон, пикринофилия эритроцитов, фибриноидные пикринофильные оттенки окраски соединительной ткани и сосудов и др.).

Мы уверенно рекомендуем свои длительно испытанные, практически хорошие, простые и экономные способы окраски срезов.