Спектр продуцируемых вирусных белков гена GAG в лимфоцитах, инфицированных NL4-3 штаммом ВИЧ-1 in vitro

Цель. Изучение спектра вирусных белков, продуцируемых в культуральную среду лимфоцитами периферической крови здорового донора, инфицированными штаммом NL4-3 ВИЧ-1 in vitro.

Методы. Использовали первичную культуру лимфоцитов, полученную от здоровых доноров. Для синхронного инфицирования первичной культуры лимфоцитов in vitro использовали штамм вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) NL4-3 (NIH AIDS Research & Reference Reagents Program, USA). Титр ВИЧ-1 в супернатантах определяли методом иммуноферментного анализа (EIA p24gag Coulter) Также проводили электрофорез белков осветлённой культуральной среды в 12,5% полиакриламидном геле при денатурирующих условиях с последующим электропереносом на нитроцеллюлозную мембрану; иммуноблоттинг для выявления вирус-специфических белков с использованием контрольной положительной сыворотки к ВИЧ-1 («Bio-Rad»); для определения молекулярных масс сероактивных фракций применяли наборы белковых маркёров LMW 94-14,4 kD, HMW 212-53 kD («Pharmacia Biotech»).

Результаты. Спектр антигенов ВИЧ в культуральной среде исследовали на 4-й, 9-й и 13-й дни после инфицирования культуры лимфоцитов ВИЧ. В течение 13 дней репродукции вируса в культуральной среде выявляются как неструктурные, так и структурные белки гена gag ВИЧ-1, спектр и количественное содержание которых меняется со временем. Через 4 ч репродукции ВИЧ в первичной культуре лимфоцитов in vitro в культуральную среду из клеток экспортируется большое количество неструктурных белков гена gag (р40, р55). Далее неструктурные белки гена gag под действием клеточных протеаз могут расщепляться до структурных белков (р24/25, р18), что обусловлено накоплением в культуральной среде протеолитических ферментов.

Вывод. При репродукции ВИЧ в первичной культуре лимфоцитов в культуральную среду выделяются растворимые формы белков ВИЧ-1 гена gag; на начальных стадиях инфекции спектр белков ВИЧ в культуральной среде in vitro активированных фитогемагглютинином лимфоцитов состоит только из белков-предшественников ВИЧ-1 (р55, р40), а на более поздних сроках - и из капсидных вирусных белков гена gag (р24/25, р18).