Nutrient medium for leptospir

Abstract

We set ourselves the task of selecting a nutrient medium for serum-vaccine production, as well as for studying the biological properties of leptospira, on which leptospira would grow in a short time (2-3 days) and in sufficient quantity.

Full Text

Мы поставили перед собой задачу подобрать для сывороточно-вакцинного производства, а также для изучения биологических свойств лептоспир питательную среду, на которой лептоспиры росли бы в короткий срок (2—3 дня) и в достаточном количестве.

Создавая оптимальные условия для развития лептоспир, мы одновременно стремились упростить питательную среду, исключая внесение сложных и дефицитных компонентов.

Ранее [1] мы сообщали результаты исследований по культивированию лептоспир на сывороточно-буферных, углеводно-сывороточных, экстрактивно-буферных и синтетических средах.

В данной работе мы предлагаем среду следующего состава: (NH4)2SO4— 1 г, К2НРО4—1 г, MgSO4 • 7Н2О—4 мг, FeSO4 • 7Н2О — 2 мг, NaCl — 2 мг, кислотный гидролизат казеина — 50 мг, дрожжевой экстракт — 50 мл.

pH среды = 7,4.

Мы провели сравнительное изучение предлагаемой среды с тремя синтетическими средами, описанными Schneiderman и соавт. (1935), Vogel и Hutner (1961), Johnson и Gray (1963). На этих средах в параллельных опытах выращивали 4 музейных штамма лептоспир (Wijnberg, Hond-Utrecht IV, Pomona, Дмитровский), относящихся к 4 серологическим группам: Icterohaemorrhagiae, Canicola, Pomona, Grippotyphosa.

В качестве исходного посевного материала брали семисуточные культуры лептоспир, выращенные на сывороточно-буферных средах Терских, Ферворта — Вольфа и Каримовой. В пробирки, содержащие по 8 мл испытуемых сред, вносили по 1 мл посевного материала, содержащего 80—100 особей лептоспир в поле зрения, и помещали в термостат при температуре 29—30°. Исходный материал в том же количестве параллельно засевали на сахарный бульон и среду Китт — Тароцци для исключения посторонней микрофлоры. Результаты зачитывали на 2, 3, 4, 5-й дни, а в дальнейшем через каждые 5 дней в течение 3 месяцев.

Параллельные посевы лептоспир на указанные выше среды производили многократно (более 10—20 раз). Во всех случаях получены совпадающие результаты. Наиболее благоприятной оказалась предложенная нами органо-синтетическая среда. Довольно богатый рост лептоспир (60—80 особей в поле зрения) появлялся на ней уже на 2—3-й день и достигал максимума на 4—5-й дни (150 особей в поле зрения). В более поздние сроки лептоспир было так много, что их невозможно было сосчитать. Мощные, морфологически правильной формы лептоспиры находились в состоянии интенсивного деления и активно передвигались.

По количеству развивающихся особей 2-е место занимает синтетическая среда Фогель и Хутнера. Однако на этой среде лептоспиры очень тонки и малоподвижны. Такими же «худосочными» и малоподвижными оказались лептоспиры, полученные на средах Джонсона — Грайя и Шнейдермана. На этих средах рост лептоспир обнаруживается лишь через 8—15 дней и в более поздние сроки.

Таким образом, из 4 испытанных питательных сред наиболее благоприятной для роста и развития лептоспир оказалась органо-синтетическая среда. На этой среде особенно интенсивно развивались штаммы Wijnberg (возбудитель болезни Васильева — Вейля) и Hond-Utrecht IV (возбудитель лептоспироза серогруппы Саnісоlа), несколько медленнее — штаммы Pomona (возбудитель лептоспироза серогруппы Pomona) и Дмитровский (возбудитель лептоспироза серогруппы Grippotyphosa). Однако все штаммы были морфологически правильными, обладали активной подвижностью и хорошо росли в субкультурах.

Выживаемость лептоспир на органо-синтетической среде более длительная (срок наблюдения — 3—6 месяцев), чем на контрольных синтетических средах (2—3 месяца). Лептоспиры при пересевах на этих средах обладают высокоиммуногенными свойствами.

Применение органо-синтетической среды ускоряет сроки выделения лептоспир из организма больного и объектов внешней среды. Следовательно, она может быть использована для целей ранней диагностики лептоспирозов, а также выявления источников инфекции и путей передачи ее.

Предлагаемая нами среда имеет еще ряд преимуществ в сравнении с другими: она наиболее проста по технике изготовления, требует меньшей затраты времени и включает легкодоступные ингредиенты.