Метод определения фосфабензида в биологических жидкостях
- Авторы: Валимухаметова Д.А.1,2, Погорельцев В.И.1,2, Гармонов С.Ю.1,2, Трубникова Г.Г.1,2, Багаутдинова Д.Б.1,2, Будников Г.К.1,2, Евгеньев М.И.1,2
-
Учреждения:
- Казанский медицинский университет
- Казанский технологический университет
- Выпуск: Том 76, № 3 (1995)
- Страницы: 263-265
- Тип: Новые методы и рационализаторские предложения
- Статья получена: 17.02.2022
- Статья одобрена: 17.02.2022
- Статья опубликована: 15.05.1995
- URL: https://kazanmedjournal.ru/kazanmedj/article/view/100990
- DOI: https://doi.org/10.17816/kazmj100990
- ID: 100990
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Индивидуальные фармакокинетические особенности лекарственных средств в большинстве случаев обусловлены различиями в их всасывании, распределении, метаболизме и экскреции. В ряде случаев заключение о неэффективности препарата является следствием неадекватности схемы его дозирования, что обусловлено, в свою очередь, отсутствием метода количественного определения лекарственного препарата в биологических средах целостного организма.
Ключевые слова
Полный текст
Индивидуальные фармакокинетические особенности лекарственных средств в большинстве случаев обусловлены различиями в их всасывании, распределении, метаболизме и экскреции. В ряде случаев заключение о неэффективности препарата является следствием неадекватности схемы его дозирования, что обусловлено, в свою очередь, отсутствием метода количественного определения лекарственного препарата в биологических средах целостного организма.
Фосфабензид (гидразид дифенилфосфинилуксусной кислоты) является представителем класса гидразидов фосфорилированных карбоновых кислот и был предложен как нейротропное средство для лечения алкоголизма, височной эпилепсии и гипоталамических расстройств различного генеза, как транквилизатор при некоторых психических заболеваниях и как средство премедикации в стоматологии [3, 7]. Препарат разрешен Фармакологическим комитетом МЗ СССР для клинического применения при лечении алкоголизма. Однако фармакокинетика фосфабензида (ФБ) не изучена, хотя такие исследования необходимы для оценки его эффективности и оптимизации использования в клинике. Описанные в литературе методы определения содержания фосфабензида в лекарственных формах [6], основанные на получении окрашенных производных с п-диметиламинобензальдегидом и по собственному поглощению ФБ в области УФ-спектра, не селективны при анализе биологических жидкостей.
В задачи исследования входили разработка метода определения содержания фосфабензида в биологических жидкостях, а также изучение процесса связывания препарата биологическими субстратами.
Для большинства препаратов показана более тесная связь между фармакологическим эффектом и концентрацией, чем между эффектом и дозой [8]. Важное значение для изучения механизма действия фосфабензида имеет рассмотрение всех звеньев его терапевтического эффекта: доза→концентрация в плазме крови→концентрация в месте действия→взаимодействтие с фармакорецептором→эффект на уровне ткани→наблюдаемый фармакологический эффект→терапевтический эффект.
Определение концентрации препарата в плазме крови и конечного эффекта позволяет установить активную концентрацию для обеспечения фармакологического и терапевтического эффектов.
Для определения содержания фосфабензида в крови и моче в качестве реагента использован 4-хлор-5,7-динитробензофуразан (БФЗ). Он является реакционноспособным и высококонтрастные реагентом для обнаружения соединений гидразина методом спектрофотометрии [1, 2]. Избирательное спектрофотометрическое выявление гидразидов кислот в виде их динитробензофуразановых производных при этом возможно в присутствии алкиламинов, алкилгидразинов, аминокислот, других органических веществ. Некоторые из них могут быть потенциальными метаболитами фосфабензида.
При взаимодействии ФБ с ацетонитрильным раствором БФЗ (20-кратный избыток) образуется продукт аналитической реакции, окрашенный в красный цвет. Линейная зависимость оптической плотности раствора от концентрации ФБ соблюдается в интервале 10−4—2×10−6 моль/л, что составляет всю область фармакокинетических концентраций лекарственного вещества. Остаточное влияние эндогенных азотистых низкомолекулярных органических веществ, присутствующих в крови и моче, которые также образуют окрашенные продукты с БФЗ, незначительно. Подобное влияние можно устранить при использовании раствора сравнения — центрифугата анализируемого образца, в котором ФБ количественно разрушается перекисью водорода, что не приводит к искажению состава других компонентов матрицы. Метод апробирован на плазме, сыворотке, цельной крови (образцы предоставлены Республиканской станцией переливания крови) и моче. Результаты определений приведены в таблице.
В пробе биологической жидкости (кровь, моча) объемом 4 мл проводят осаждение белков после добавления 1 мл 30% раствора трихлоруксусной кислоты. Из пробы крови предварительно удаляют кровяной сгусток. После отделения белков двукратным центрифугированием (6000 об./мин ) пробы нейтрализуют буферным раствором (pH 5,5; объем — 0,5 мл) и к ним добавляют 0,25 мл ацетонитрильного раствора БФЗ с концентрацией 0,02 моль/л. Через 5 минут анализируемые пробы фотометрируют при 500 нм относительно растворов сравнения. В качестве последних используют анализируемые биологические пробы (4 мл) с тем же содержанием БФЗ, в которых ФБ удален добавлением 0,1 мл 30% пергидроля. Эту операцию проводят в кислой среде до нейтрализации анализируемой пробы буферным раствором.
Фармакологический эффект в организме определяется как характером всасывания и экскреции, так и закономерностями инактивации. Специфическая активность препарата снижается вследствие необратимого химического разрушения либо обратимого связывания с различными биосубстратами, что может отождествляться с депонированием. Как известно, многие препараты связываются с белками сыворотки крови, в основном с альбумином [4].
Процесс связывания ФБ с белками плазмы крови исследовали in vitro методом равновесного диализа [5]. Инкубацию лекарственного вещества проводили при 25°С в течение суток. Снижение концентрации ФБ в диализном мешке контролировали постановкой реакции с БФЗ. Параллельно ставили контрольный опыт с дистиллированной водой. Степень связывания ФБ составила 30±3%.
Основные процессы фармакокинетики и фармакодинамики определяются свободной, а не связанной с белками частью препарата в крови, проходящего через различные гистогематические барьеры, фильтрующегося в почечных клубочках и проникающего к месту действия. Как показывают данные связывания, полученные нами в экспериментах in vitro, фосфабензид слабо связан с белками, и его суммарная концентрация в плазме близка к уровню свободного препарата. Однако точный расчет уровня свободного препарата может быть осложнен при таких патологически измененных условиях связывания, как понижение уровня альбумина в сыворотке, или при возможном вытеснении препарата билирубином из комплекса с белком в случае гипербилирубинемии.
Для многих лекарственных средств конечный терапевтический эффект зависит не столько от их концентрации в месте действия, сколько от экспозиции и, по всей видимости, связывание будет пролонгировать время пребывания препарата в крови и органах. Таким образом, связывание в известной степени предохраняет от разрушения лекарственные вещества с короткими сроками циркуляции в организме. Пролонгированный фармакологический эффект проявляется и в результате десорбции или диссоциации комплекса препарата с биосубстратом, так как часть свободного лекарства элиминирует в результате экскреции или метаболизма, чем поддерживается постоянное соотношение между свободным и связанным препаратом.
Важное значение в выяснении активности, эффекта пролонгирования и клеточной проницаемости играет связывание лекарственных веществ с форменными элементами крови, в первую очередь, с эритроцитами, которые составляют около 40% объема крови. Связывание ФБ эритроцитами устанавливали после инкубирования лекарственного вещества (2×10−4 моль/л) в 50 мл эритроцитарной массы при 25°С в течение суток. Надосадочную жидкость анализировали на содержание ФБ спектрофотометрическим методом в виде динитробензофуразанового производного. Для учета возможных изменений концентрации ФБ за счет возможных химических реакций и гемолиза эритроцитов проводили контрольную инкубацию препарата в тех же условиях. Данные эксперимента показали, что 78±4% ФБ оказалось связанным с эритромассой.
Таким образом, представленные данные свидетельствуют о важной роли связывания с биосубстратами в кинетике препарата — в установлении эффективной концентрации в крови, элиминации из крови, прохождении через плазматическую мембрану и гистогематические барьеры и достижении терапевтической концентрации. Разработанный метод определения концентрации фосфабензида в крови и моче позволяет уточнять концентрацию активного вещества в клинических экспериментах in vivo, изучать его метаболизм и экскрецию.
Об авторах
Д. А. Валимухаметова
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньВ. И. Погорельцев
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньС. Ю. Гармонов
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньГ. Г. Трубникова
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньД. Б. Багаутдинова
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньГ. К. Будников
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньМ. И. Евгеньев
Казанский медицинский университет; Казанский технологический университет
Email: info@eco-vector.com
Кафедра клинической фармакологии и внутренних болезней № 3, кафедра аналитической химии
Россия, Казань; КазаньСписок литературы
- Евгеньев М. И., Евгеньева И. И., Николаева Н. Г. и др.//Хим.-фарм. журн.—1991.— № 10, —С. 80
- Евгеньев М. И. и др. А. с. 171812 (СССР). Б. И.— 1992.— № 9
- Заиконникова И. В., Вальдман А. В., Козловская М. М. и др.//Фармакол. и токсикол. — 1980.— № 4.— С. 6
- Луйк А. И., Лукъянчук В. Д. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов. — М., 1971
- Методы экспериментальной химиотерапии./Под ред. Г. Н. Першина.— М., 1971
- Пинягина К. В., Литвиненко А. В., Тарасова Р. И. и др.//Фармация, — 1992, — № 1. — с. 31—35
- Рыбакова Л. С., Семенова Л. А. Научн. тр. Казанского мед. ин-та.— Казань, 1974. — T. I.— Вып. 2.— С. 127—131
- Холодов Л. А., Яковлев В. П. Клиническая фармакокинетика. — М., 1985
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)